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1、護(hù)骨素基因啟動子區(qū)T950-C單核苷酸點突變多態(tài)性與骨密度及骨 代謝的關(guān)系,武兆忠 林偉 于憲 張永健 廣州醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科,前言,護(hù)骨素（Osteoprotegerin，OPG）是近年來發(fā)現(xiàn)并克隆的三個腫瘤壞死因子受體及其配體家族新成員之一。 OPG是目前已知唯一一個通過與定位于成骨細(xì)胞膜上的NF-kB受體活化劑配體（receptor activation of NF-kB ligand, RANKL）結(jié)合，從而封閉了成骨細(xì)胞誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞分化成熟及其溶骨性骨吸收的可溶性餌受體 。,前言,OPG基因啟動子區(qū)序列的變化可能影響到OPG基因的轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)表達(dá)水平 。因此， OPG基因是

2、骨質(zhì)疏松癥的一個良好的候選基因。,臨床資料,研究對象及入圍標(biāo)準(zhǔn)： 134例廣州地區(qū)居住十年以上無親緣關(guān)系的漢族婦女作為研究對象，年齡48-81歲，平均62.76歲，自然絕經(jīng)時間超過5年。 所有研究對象必須排除其它影響骨代謝的疾病和未有服用各種影響骨代謝藥物。,臨床資料,診斷標(biāo)準(zhǔn)： WHO骨質(zhì)疏松癥診斷標(biāo)準(zhǔn),即BMD低于正常人群平均峰值2.5個標(biāo)準(zhǔn)差 。 分組： 134例研究對象分為骨質(zhì)疏松癥組和對照組。其中骨質(zhì)疏松癥組73例，年齡49-81歲，平均64.59歲；對照組61例，年齡48-77歲，平均60.66歲。,實驗方法,BMD測定： 雙能X線吸收骨密度測量儀測定股骨髖部股骨頸、Wards三角

3、、大轉(zhuǎn)子和腰椎24的BMD值（g/cm2），測量時將測量對象的出生年月日、身高和體重等參數(shù)輸入計算機。,實驗方法,骨代謝指標(biāo)測定： 放射免疫分析法測實驗對象外周血中降鈣素、甲狀旁腺素、雌激素和骨鈣素水平。,實驗方法,外周血提取基因組DNA，PCR擴增目的片段，擴增后的片段采用Hinc II限制性內(nèi)切酶消化，1.5%瓊脂糖凝膠電泳確定基因型,實驗方法,酶切位點的判斷 有Hinc II酶切位點的純合子-CC，顯示129bp和126bp兩條帶；缺乏Hinc II酶切位點的野生型純合子-TT，顯示255一條帶；雜合子-TC則顯示上述三條帶。,結(jié)果,OPG基因啟動子區(qū)T950-C基因型和等位基因頻率分布

4、 基因型 等位基因 分組 例數(shù) TT TC CC T C 骨質(zhì)疏松癥組 73 28(0.384) 39(0.534) 6(0.082) 95(0.651) 51(0.349) 絕經(jīng)后正常婦女 61 29(0.475) 29(0.475) 3(0.049) 87(0.713) 35(0.287) X2=1.425，P=0.490 注明：等位基因在絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥漢族婦女群和絕經(jīng)后正常婦女人群中的頻率分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律。,結(jié)果,漢族婦女與高加索人種婦女OPG基因啟動子區(qū)T950-C基因型和等位基因頻率分布的比較 基因型 等位基因 分組 種 例數(shù) TT TC CC T

5、C 骨質(zhì)疏 漢族 73 28(0.384) 39(0.534) 6(0.082) 95(0.651) 51(0.349) 松癥組 高加索 215 46(0.214）117(0.544)52(0.242) 209(0.486) 221(0.514) X2=13.010，P=0.001 X2=11.854，P=0.001 絕經(jīng)后正 漢族 61 29(0.475) 29(0.475) 3(0.049) 87(0.713) 35(0.287) 常婦女 高加索 256 53(0.244)142(0.534)61(0.229) 248(0.484)264(0.516) X2=23.016，P=0.000

6、X2=20.686，P=0.000,結(jié)果,骨質(zhì)疏松癥婦女各基因型之間BMD的比較 基因型 例數(shù) L1 L2 L3 L4 股骨頸 wards區(qū) 大轉(zhuǎn)子 TT 28 0.6640.099 0.7370.109 0.7770.114 0.8310.134 0.6960.084 0.5880.106 0.6110.071 TC 39 0.6960.068 0.7640.077 0.8140.089 0.8650.130 0.7020.085 0.5940.105 0.6140.095 CC 6 0.7170.060 0.7530.072 0.7910.082 0.7640.105 0.6200.023

7、 0.5070.068 0.5550.072 ANOVA 2.28/0.11 0.76/0.46 1.55/0.21 2.35/0.10 4.26/0.04 1.68/0.19 1.14/0.32 ,結(jié)果,絕經(jīng)后正常婦女各基因型之間BMD的比較 基因型 例數(shù) L1 L2 L3 L4 股骨頸 wards區(qū) 大轉(zhuǎn)子 TT 29 0.8780.084 0.9730.116 1.0090.106 1.0460.132 0.8060.090 0.7300.102 0.7170.087 TC 29 0.9020.108 1.0250.145 1.0700.134 1.0950.129 0.8310.065 0.7600.096 0.7250.067 CC 3 0.9430.106 0.9830.126 1.1220.155 1.1060.156 0.8010.081 0.6780.083 0.6830.061 ANOVA 0.85/0.43 1.15/0.32 2.48/0.09 1.12/0.33 0.74/0.47 1.33/0.27 0.44/0.64 ,討論,廣州地區(qū)134名絕經(jīng)后漢族婦女OPG基因啟動子區(qū)T950-C多態(tài)性等位基因頻率分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律。 基因型頻率分布與高加