人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述ppt課件

1、人類輔助生殖技術(shù)應(yīng)用概述,中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院 徐艷文,1,人工授精 夫精人工授精 贈(zèng)精人工授精 常規(guī)體外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET） 常規(guī)體外受精 單精子卵胞質(zhì)內(nèi)注射（intracytoplasmic sperm injection, ICSI） 射出精 睪丸/附睪精 植入前遺傳學(xué)診斷（preimplantation genetic diagnsosi, PGD）,人類輔助生殖技術(shù),2,適應(yīng)證 男方因素 宮頸因素 免疫因素 女方排卵障礙 不明原因性不孕 步驟,夫精人工授精,臨床妊娠率10-15%,3,促排卵治療

2、,誘發(fā)排卵 有排卵障礙的情況下 以誘發(fā)單個(gè)卵泡或少數(shù)卵泡的發(fā)育為目的 超排卵 在可控制的范圍內(nèi)誘發(fā)多卵泡發(fā)育和成熟 為ART奠定基礎(chǔ) 治療的對(duì)象很多本身有正常的排卵功能,4,IUI中促排卵的作用,授精時(shí)間更精確 糾正排卵障礙 提供更多可用的卵子,5,適應(yīng)證 輸卵管盆腔因素 子宮內(nèi)膜異位癥 排卵障礙經(jīng)促排卵治療無(wú)效 嚴(yán)重少弱畸精癥 無(wú)精癥 反復(fù)IUI失敗 免疫性不孕,常規(guī)體外受精-胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET）,6,步驟 藥物促排卵 經(jīng)陰道穿刺取卵 體外授精 胚胎培養(yǎng) 胚胎移植 胚胎冷凍 新鮮周期失敗后解凍胚胎移植,常規(guī)體

3、外受精-胚胎移植in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET,7,GnRH激動(dòng)劑：達(dá)必佳，達(dá)菲林 GnRH拮抗劑：加尼瑞克，思則凱 Gn： 重組FSH：果納芬，普麗康 尿源性FSH：麗申寶，福特蒙 尿源性FSH和LH：賀美奇，HMG,主要藥物,8,促排卵方案-短效長(zhǎng)方案,GnRH-a 0.1mg qd,月經(jīng)第二十天黃體中期,GnRH-a 0.05mg qd,Gn,14-21天,垂體達(dá)降調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn),主導(dǎo)卵泡達(dá)18mm時(shí)注射HCG，36hr后取卵,9,促排卵方案-長(zhǎng)效長(zhǎng)方案,月經(jīng)第二十天黃體中期 GnRH-a 1.3mg單次注射,Gn,14-21天,垂

4、體達(dá)降調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn),主導(dǎo)卵泡達(dá)18mm時(shí)注射HCG，36hr后取卵,10,促排卵方案-拮抗劑方案,Gn,主導(dǎo)卵泡達(dá)18mm時(shí)注射HCG，36hr后取卵,月經(jīng)第2-3天啟動(dòng),促排5-6天加拮抗劑,11,ART臨床治療風(fēng)險(xiǎn),穿刺并發(fā)癥 血栓栓塞 妊娠相關(guān)并發(fā)癥 其它風(fēng)險(xiǎn),12,經(jīng)陰道穿刺取卵術(shù)并發(fā)癥,嚴(yán)重并發(fā)癥（0.5%-1.5%） 陰道出血100ml 0.8% 盆腔感染 0.6% 盆腔膿腫 卵巢扭轉(zhuǎn) 盆腔出血,卵巢過(guò)度刺激綜合征,13,取卵術(shù)后卵巢改變,非常脆 容易撕裂 通過(guò)測(cè)定Hb和Hct的變化，推測(cè)通常取卵術(shù)后平均出血量232130 mL,避免在卵巢內(nèi)橫向擺動(dòng),14,卵巢過(guò)度刺激綜合征（ovar

5、ian hyperstimulation syndrome, OHSS）,-促排卵最嚴(yán)重的醫(yī)源性并發(fā)癥 -正常妊娠中罕見(jiàn) *發(fā)生率: - 輕度： 8 23% - 重度： 3.5-8% COH - 輕中度：7.3% - 重度： 4.2%,15,病理及臨床表現(xiàn),體液外滲,毛細(xì)血管 通透性增加,胸水、腹水、心包 積液、全身水腫,低血容量,血液濃縮 高凝狀態(tài),腎灌注減少,少尿、無(wú)尿,電解質(zhì)紊亂,血栓形成,氮質(zhì)血癥,腹脹、惡心、嘔吐 咳嗽、氣促,16,卵巢過(guò)度刺激綜合征（ovarian hyperstimulation syndrome, OHSS）,臨床表現(xiàn) 卵巢體積顯著增大 血液濃縮，腹腔積液，胸腔

6、積液 少尿 電解質(zhì)紊亂 血栓形成、ARDS及多器官功能衰竭,17,OHSS分度,18,OHSS分度,根據(jù)OHSS發(fā)生的時(shí)間，又分為早發(fā)型OHSS和晚發(fā)型OHSS 早發(fā)型發(fā)生在HCG后37天，其發(fā)生與卵巢對(duì)促性腺激素的反應(yīng)性有關(guān)，并且被外源性HCG激發(fā) 晚發(fā)型HCG后1217天，多伴有多胎妊娠，系內(nèi)源性HCG所致 晚發(fā)型OHSS程度往往比早發(fā)型嚴(yán)重,19,體外授精-胚胎移植的實(shí)驗(yàn)室步驟,20,實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控 體外授精 胚胎培養(yǎng) 胚胎移植 胚胎冷凍 胚胎解凍,體外授精-胚胎移植的實(shí)驗(yàn)室步驟,21,A、顯微操作系統(tǒng) B、程序冷凍儀及液氮罐 C、CO2濃度測(cè)試儀和溫度測(cè)試儀 D、電子天平，

7、超純水儀和滲透壓儀 E、冰箱 F、空氣凈化設(shè)備 G、CO2和N2，混合氣體氣瓶,實(shí)驗(yàn)室的儀器和設(shè)備,22,1、顯微鏡 A、相差顯微鏡 B、體視鏡 C、倒置顯微鏡 D、熒光顯微鏡,實(shí)驗(yàn)室的儀器和設(shè)備,23,IVF工作站,實(shí)驗(yàn)室的儀器和設(shè)備,24,CO2培養(yǎng)箱：,實(shí)驗(yàn)室的儀器和設(shè)備,Thermo,K-system G-185,Cook MINC Benchtop Incubator,25,1、質(zhì)量控制： 溫度：233 濕度：30 60% 氣壓： 10Pa 塵埃：百級(jí)（配子操作區(qū)），萬(wàn)級(jí)（胚胎實(shí)驗(yàn)室），十萬(wàn)級(jí)（更衣室，取精室） 可揮發(fā)有機(jī)物（VOC）： 0.5ppm 振動(dòng)，光照及噪音：,胚胎培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

8、室的質(zhì)量控制和管理,26,2、管理： A、按功能和清潔度分區(qū) B、實(shí)驗(yàn)室禁止吃，喝，抽煙以及使用化妝品 C、培養(yǎng)箱和溫臺(tái)的監(jiān)測(cè) D、冰箱的監(jiān)測(cè) E、液氮罐的監(jiān)測(cè),胚胎培養(yǎng)環(huán)境的質(zhì)量控制和管理,27,實(shí)驗(yàn)室禁止使用酒精等可揮發(fā)性有機(jī)物和紫外照射 可用蒸餾水擦拭臺(tái)面 可用專用洗滌劑擦拭可能會(huì)被污染的臺(tái)面或者區(qū)域 可使用吸塵器吸走灰塵 培養(yǎng)箱的清潔和消毒,實(shí)驗(yàn)室的清潔,28,1、溫度和濕度：37.00.1，90% 2、pH：7.1 pHi 7.2， 7.2 pHe 7.4 3、氣體：CO2和O2 4、滲透壓：270 290mOsm/kg,胚胎培養(yǎng)系統(tǒng),29,培養(yǎng)基的基本組成 水：99% 無(wú)機(jī)鹽：維持

9、培養(yǎng)基的滲透壓和酸堿度 碳水化合物：提供胚胎發(fā)育的能量 氨基酸：促進(jìn)胚胎體內(nèi)外發(fā)育 維生素：調(diào)控細(xì)胞代謝 激素和生長(zhǎng)因子：促進(jìn)胚胎發(fā)育 大分子物質(zhì)：維持膠體滲透壓，中和毒素 抗氧化劑：減少氧自由基對(duì)胚胎的損傷 螯合劑：螯合重金屬離子 抗生素：防止污染,胚胎培養(yǎng)系統(tǒng),30,培養(yǎng)液配制和平衡,胚胎培養(yǎng)系統(tǒng),31,32,單氣培養(yǎng)：CO2(5-6%)，O2(21%) 和N2(74%) 三氣培養(yǎng)：CO2(5-6%)，O2(5%) 和N2(90%) 優(yōu)勢(shì)：更接近生理狀態(tài)（2-8% O2）,單氣培養(yǎng)和三氣培養(yǎng),33,1、精子的形態(tài)結(jié)構(gòu),精子和卵子,精子形態(tài),精子變態(tài)示意圖,34,2、卵子的形態(tài)結(jié)構(gòu),卵母細(xì)胞

10、顆粒細(xì)胞復(fù)合體,GV 期,MI 期,MII 期,35,異常卵母細(xì)胞,36,1、常規(guī)體外授精,體外授精,精卵混合,精卵結(jié)合,37,2、卵胞質(zhì)內(nèi)單精子注射（ICSI）,38,人胚胎體外發(fā)育,39,異常受精,單原核,多原核,三原核,無(wú)原核,40,胚胎發(fā)育階段：卵裂球的數(shù)目 胚胎形態(tài)學(xué)評(píng)分： 胚胎的碎片評(píng)分：,卵裂期評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),8-1-1,8-2-1,8-2-3,41,1期：囊胚腔小于胚胎體積的一半 2期：囊胚腔大于胚胎體積的一半 3期：完全囊胚，囊胚腔與胚胎體積相等,囊胚的發(fā)育階段,1期,2期,3期,42,4期,5期,6期,4期：擴(kuò)張囊胚，囊胚腔大于胚胎，透明帶變薄 5期：孵化囊胚，胚胎部分孵出 6期

11、：完全孵化囊胚,43,胚胎移植數(shù)目： 35歲以下第一周期：2個(gè) 35歲以上或者第二周期以上：3個(gè) 單胚胎移植：,胚胎移植,44,胚胎移植管裝載,胚胎移植管,空氣,空氣,胚胎,培養(yǎng)基,45,1、精子冷凍： 2、卵子冷凍： 3、胚胎冷凍： 4、生殖組織冷凍：,配子和胚胎的冷凍及復(fù)蘇,46,程序化冷凍（慢速冷凍） 玻璃化冷凍（快速冷凍）,冷凍方法,47,Slow cooling,- 0.3C/min,慢速冷凍法 將胚胎放入含有一定濃度的冷凍保護(hù)劑處理后，慢速降溫（0.23/min ）, 在這個(gè)過(guò)程中，隨著細(xì)胞外溫度的逐漸降低和細(xì)胞外冰晶的形成，細(xì)胞以一種平衡的方式逐步脫水。直到溫度降至-150 ，至

12、于液氮保存。,48,玻璃化冷凍法 采用更高濃度的冷凍保護(hù)劑處理細(xì)胞，快速降溫，使細(xì)胞內(nèi)外的液體均達(dá)到玻璃化狀態(tài),49,玻璃化冷凍過(guò)程（兩步平衡法） 在不同濃度的冷凍液中進(jìn)行平衡,ES,VS,50,2.裝管,3. 投入液氮，在液氮罐中保存。,51,冷凍前,置入冷凍液后0min,置入冷凍液后4min,置入冷凍液后8min,52,囊胚冷凍前人工皺縮,皺縮前,皺縮后,53,控制性超排卵 B超監(jiān)測(cè)下取卵 體外受精和胚胎培養(yǎng),胚胎活檢 對(duì)活檢的細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè) 選擇胚胎移植入宮腔,植入前遺傳學(xué)診斷(PGD),54,常染色體隱性遺傳病 -thalassaemia Cystic fibrosis Spinal muscular atrophy Sickle cell disease,常染色體顯性遺傳病 Huntingtons disease Myotonic dystrophy Charcot-Marie-Tooth disease 性染色體遺傳病