DB34-T 4950-2024 禽白血病─通.用AJ三重PCR檢測技術(shù)規(guī)程

34DB34/T4950—2024禽白血病—通用/A/J三重PCR檢測技術(shù)規(guī)程Technicalregulationforgeneric/A/JtriplePCRdetectionforavianleukemia安徽省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I1NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)DNA：脫氧核糖核酸(deoxyribonucleALV：禽白血病病毒（avianleuRT-PCR；反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reversetranscription-polymerase25.7DEPC水：在100mL三蒸水中加入100μLDEPC，18℃~22℃室溫下過夜，121℃滅菌15min。也5.13DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)：DL2000Marker6.2臺式高速冷凍離心機(jī)（4℃,離心速度12000r/min以上）。漿，4℃,3000r/min離心15min，取上清液轉(zhuǎn)入無菌的1.5mL離心管中，對樣本進(jìn)行編號。38.2.7倒去上清，加入置室溫條件下干燥后8.5瓊脂糖凝膠電泳9.1試驗(yàn)成立條件：陽性對照在338bp、274bp、145bp位置同時(shí)出49.6被檢樣本無特異性擴(kuò)增條帶，判定ALV5KH2PO4A.2.10.5mo1/L乙二銨四乙酸二鈉(EDTA)溶液（p65'-TACTTGAGCCCTTGCGACTC-3’5'-ATGGTGAACCCGGCTCTTTC-3’5'-TTACATGGGCCAACCGTACA-3’5'-GGTGGCTCATCCCACATAGA-3’5'-AGGCCCTATGTCAACCAATCA-3’5'-GCCCTGTCCCCACAAATCAA-3’7C.1pol基因（通用）特異性擴(kuò)增片段（145bp）TACTTGAGCCCTTGCGACTCAAGCACCCATCTCTGTGCATGTTGCATTATATGGACGATCTTTTACTAGCCGCCCAGGTTGGAAGCGGCAGGGGAGGAGGTTATTAGTATACTGGAAAGAGCC.2gp85基因(A亞群)特異性擴(kuò)增TTACATGGGCCAACCGTACAGGCCAAACGGATTTCTGCCTCTCTACACAGTCAGCCACCTCCCCTTTTCAAACATATCCCGTCCCCTATTTCCGAAGGTGATTTTAAGGGATACGTCTCTGATAATTGCACCACCTTGGGAACTGACCGGCCAGCATTACCGGCGGCCCTGACAACAGCACCACCCTCACTTATCGAAAGGTTTCATGCTTGCTGTTAAAGCTGAAC.3gp85基因(J亞群)特異性擴(kuò)增片段(338bp)AGGCCCTATGTCAACCAATCATGGACGATGGTAAGTCCAATAAACATAGAGAGTTTTTCAATAAGTCGTAGATATTGTCCAGTAACGAGACTCGTTACTATAGAGGGGACCTTTCTAATTGGTGTGGTTCAAAAAGGGGAAAATGGTCAGCGGGGTACACAAAATGTTCCAGCAACACGACGGGTTGCGGTGGTAATTGCACAACGGAATGGAA