《煙葉和煙葉提取物中茄尼醇的測(cè)定技術(shù)報(bào)告》

《煙葉和煙葉提取物中茄尼醇的測(cè)定》技術(shù)報(bào)告1前言煙草中富含茄尼醇，主要用于合成輔酶Q10、維生素K、抗癌增效劑SDB等，是當(dāng)前市場(chǎng)上炙手可熱的醫(yī)藥化工中間體，同時(shí)它本身也具有抗菌、消炎和止血的作用。全國每年約有50萬噸這樣的廢次煙葉被焚燒，不僅浪費(fèi)資源，而且造成土壤堿化，對(duì)生態(tài)環(huán)境造成污染，如果這些廢次煙葉全部變廢為寶提取茄尼醇，能產(chǎn)生近百億元的經(jīng)濟(jì)效益，既保護(hù)了生態(tài)環(huán)境，又能充分利用煙草生產(chǎn)產(chǎn)業(yè)的廢棄物，實(shí)現(xiàn)煙草資源的高值化利用[1-8]。從煙葉提取的茄尼醇產(chǎn)品中茄尼醇含量直接決定了它的市場(chǎng)價(jià)格，因此迫切需要規(guī)范、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法來檢測(cè)其含量。檢測(cè)茄尼醇的方法很多，有庫倫滴定法[9]、氣相色譜法[10]、HPLC法[11-17]及液質(zhì)聯(lián)用法[18]。其中庫倫滴定法其中重現(xiàn)性差；氣相色譜法要經(jīng)過衍生反應(yīng)，樣品處理麻煩；液質(zhì)聯(lián)用法所用儀器設(shè)備比較高端，應(yīng)用不普遍；液相色譜檢測(cè)結(jié)果比較理想，但方法很多，色譜條件各有不同，目前尚無統(tǒng)一、規(guī)范的相關(guān)檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)方法，因此，經(jīng)國標(biāo)委批準(zhǔn)，我們制定了國家標(biāo)準(zhǔn)《煙葉和煙葉提取物中茄尼醇的測(cè)定高效液相色譜法》，使檢測(cè)結(jié)果更加規(guī)范和準(zhǔn)確可靠，從而能夠更加科學(xué)地評(píng)價(jià)煙葉和煙膏的市場(chǎng)價(jià)值。2實(shí)驗(yàn)部分2.1儀器與試劑2.1.1儀器：Waters2695高效液相色譜系統(tǒng)，Waters2996二極管陣列（PDA）檢測(cè)器（或紫外檢測(cè)器），Millennium32色譜工作站，粉碎機(jī)（天津太斯特儀器有限公司），超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，恒溫振蕩器、離心機(jī)（金壇市江南儀器廠），XW-80A旋渦混合器(上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠)，索氏提取裝置（金壇市晶玻實(shí)驗(yàn)儀器廠），微量可調(diào)移液器（Eppendorf），脫脂中速濾紙（ф=15cm杭州特種紙業(yè)有限公司），濾膜（0.2μm，直徑25mm的聚砜膜或相當(dāng)者）。2.1.2主要試劑：茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)品（Sigma，純度≥99.9%，美國），異丙醇（山東禹王）、甲醇（HPLC級(jí)，TEDIA，美國），水為超純水（蒸餾水再經(jīng)過Millipore超純水系統(tǒng)制備），正己烷、無水乙醇、甲醇、丙酮、石油醚、氫氧化鈉均為分析純。2.1.3材料：烤煙由福建省三明金葉復(fù)烤有限公司提供；白肋煙由中國煙草白肋煙試驗(yàn)站（湖北省煙草科研所）提供；香料煙由湖北省十堰市鄖西縣煙葉分公司提供；煙膏由煙草提取，自制。2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精密稱取茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)樣品0.05g（精確到0.0001g），用正己烷溶解并定容至100mL棕色容量瓶中，制成0.50mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃冰箱內(nèi)保存。標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確移取0.1、1、2、3、4、5mL茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（4.7）于50mL棕色容量瓶中，用流動(dòng)相溶液稀釋并定容至刻度，得到一系列的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（質(zhì)量濃度分別為1、10、20、30、40、50μg/mL），現(xiàn)配現(xiàn)用。2.3樣品分析2.3.1樣品的制備試樣的制備將煙葉在55℃的通風(fēng)干燥箱中干燥至恒重，冷卻至室溫，粉碎，過40目篩。制備后煙葉粉末應(yīng)保存于干燥器內(nèi)備用。。2.3.2樣品前處理2.3.2.1煙葉：（1）茄尼醇的提取稱取約2g（精確至0.0001g）煙葉粉末于50mL具塞離心管中，加正己烷20mL，旋渦振蕩2min，于65℃超聲波萃取15min，萃取功率為250W，4000r/min離心10min，上清液移入50mL容量瓶中。用15mL正己烷重復(fù)以上振蕩、萃取和離心步驟，將沉淀物重復(fù)提取2次，合并正己烷層于50mL容量瓶中，定容至刻度。（2）游離茄尼醇測(cè)定的試樣處理準(zhǔn)確移取4mL2.3.2.1（1）提取液于10mL具塞離心管中，加入約6mL蒸餾水，渦旋振蕩3min，去除水溶性雜質(zhì)，4000r/min離心10min分層；準(zhǔn)確移取1mL凈化后上層正己烷提取液，用流動(dòng)相稀釋并定容至25mL棕色容量瓶中（如茄尼醇濃度超出標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍，則適當(dāng)調(diào)整分取體積和定容體積），經(jīng)0.2μm濾膜過濾，濾液待上機(jī)測(cè)定。（3）總茄尼醇測(cè)定的試樣處理準(zhǔn)確移取4mL2.3.2.1（1）提取液于100mL具塞棕色三角瓶中，加入4mLNaOH乙醇溶液（0.02mol/L），密封好塞子，充分混勻，在恒溫振蕩器中60℃～65℃水浴振蕩，皂化30min；皂化后溶液在83℃～87℃水浴蒸發(fā)至近干；準(zhǔn)確移取2mL正己烷于三角瓶中，超聲2min溶解殘?jiān)D(zhuǎn)移至另一潔凈10mL具塞離心管中，重復(fù)一次以上操作溶解三角瓶中殘留物轉(zhuǎn)移至離心管中，再用蒸餾水約6mL多次洗滌三角瓶，合并溶液于具塞離心管中；渦旋振蕩具塞離心管3min，去除水溶性雜質(zhì)，離心10min分層；準(zhǔn)確移取1mL凈化后上層正己烷提取液，用流動(dòng)相稀釋并定容至25mL棕色容量瓶中（如茄尼醇濃度超出標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍，則適當(dāng)調(diào)整分取體積和定容體積），經(jīng)0.2μm濾膜過濾，濾液待上機(jī)測(cè)定。2.3.2.2煙葉提取物（煙膏）：稱取約0.1g（精確到0.0001g）煙葉提取物，置于50mL容量瓶中，加入30mL左右正己烷溶解，置于超聲波清洗器中超聲5min,冷卻定容至刻度。其余步驟同2.3.2.1（2）、2.3.2.1（3）測(cè)定煙膏中的游離茄尼醇和總茄尼醇。2.4色譜分析條件按照制造商操作手冊(cè)運(yùn)行高效液相色譜儀。以下分析條件可供參考，采用其它條件應(yīng)驗(yàn)證其適用性：色譜柱：AtlantisT3C184.6×150mm，3μm(Waters)。流動(dòng)相：異丙醇-甲醇溶液（體積比為30:70）。流速：1.0mL·min-1。柱溫：35℃。紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：213nm。進(jìn)樣體積：20μL。在上述色譜條件下樣品中茄尼醇與雜質(zhì)得到快速有效分離，分離度大于1.5，茄尼醇色譜峰保留時(shí)間在7min左右。2.5煙葉和煙葉提取物中茄尼醇的定性和定量測(cè)定分別取適量的茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（2.2）及待上機(jī)試樣溶液，按2.4列出的條件進(jìn)行液相色譜分析測(cè)定。按照保留時(shí)間進(jìn)行定性，以標(biāo)準(zhǔn)工作液做單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，并用色譜峰面積積分值定量。待測(cè)樣液中茄尼醇的相應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)行分析，并在試樣溶液分析間適當(dāng)穿插標(biāo)準(zhǔn)工作液，以確保定量的準(zhǔn)確性。定量分析：煙葉和煙葉提取物中茄尼醇的含量由式（1）計(jì)算得出：試樣中茄尼醇的含量按式（1）進(jìn)行計(jì)算：………………(1)式中：X試樣茄尼醇的含量（以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，若測(cè)定鮮基含量則要測(cè)定鮮樣制成試樣損失的水分，再將試樣中茄尼醇的含量換算成鮮基中茄尼醇含量。），單位為克每百克（g/100g）；cs標(biāo)準(zhǔn)溶液中茄尼醇的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；A試樣溶液中茄尼醇的峰面積數(shù)值；V試樣最終定容體積，單位為毫升（mL）；f試樣稀釋倍數(shù)；As標(biāo)準(zhǔn)溶液中茄尼醇的峰面積數(shù)值；m試樣質(zhì)量，單位為克（g）。測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。3結(jié)果與討論3.1液相色譜分析方法的優(yōu)化3.1.1檢測(cè)波長(zhǎng)的確定：利用二極管陣列檢測(cè)器采集樣品的3D圖并截取茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)品的紫外光譜圖（圖1）。從光譜圖可以看出：茄尼醇在210nm波長(zhǎng)處有最大吸收，考慮到儀器的穩(wěn)定性，選擇213nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。aλ/nmaλ/nmA/AUA/AUbbt/minλ/nm圖1(a)樣品3D圖譜和(b)茄尼醇紫外光譜圖Fig.1(a)3Dgraphsofsampleand(b)UVspectraofsolanesol3.1.2流動(dòng)相的確定：色譜柱選擇AtlantisT3C18柱（4.6×150mm，3μm），考察甲醇、甲醇-水、乙腈-水、甲醇-乙腈、異丙醇-乙腈等流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)前四種流動(dòng)相茄尼醇色譜峰盡管也能和雜質(zhì)很好分離，但色譜峰保留時(shí)間太長(zhǎng)，流動(dòng)相為V（異丙醇）∶V（甲醇）=30∶70時(shí)，茄尼醇與雜質(zhì)能得到快速有效分離，分離度大于1.5，茄尼醇色譜峰保留時(shí)間在7.5min（圖2）。進(jìn)空白樣品保留時(shí)間為7.5min時(shí)沒有出現(xiàn)色譜峰，說明流動(dòng)相溶劑在210nm處不會(huì)對(duì)測(cè)定產(chǎn)生干擾。A/AUa茄尼醇(solanesol)a茄尼醇(solanesol)A/AUb茄尼醇(solanesol)b茄尼醇(solanesol)t/min圖2(a)對(duì)照品和(b)樣品的高效液相色譜圖Fig.2HPLCchromatogramsandUVspectraof(a)referencesubstancesand(b)asample3.2樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化3.2.1提取條件的優(yōu)化：本實(shí)驗(yàn)考察了索氏提取法和超聲波提取法萃取煙葉中的茄尼醇。（1）索氏提取法稱取約2g(精確到0.001g)煙葉粉末于濾紙中，包好（樣品不可裝得太緊，以免影響浸抽效果），濾紙包長(zhǎng)度應(yīng)以可全部浸泡于提取溶劑中為準(zhǔn)。將濾紙包放入索氏提取器的抽提管內(nèi)，下接抽提瓶（規(guī)格為100mL），在抽提瓶中注入3/4容積的提取溶劑，在水浴(用蒸餾水)上加熱，使提取液回流，控制提取溶劑回流次數(shù)為每小時(shí)約7次，回流完，取出試樣，仍用原提取器回收提取溶劑直至抽提瓶?jī)?nèi)液體少于30mL，取下抽提瓶，擦凈瓶外壁，將提取液轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶，用提取溶劑分多次將抽提瓶里的物質(zhì)轉(zhuǎn)移至容量瓶，定容至刻度。本實(shí)驗(yàn)考察了五種提取溶劑（正己烷、無水乙醇、甲醇、丙酮、石油醚），不同提取時(shí)間（2、4、6、8、10、12、14）對(duì)煙葉粉末中游離態(tài)茄尼醇測(cè)定結(jié)果的影響，結(jié)果見圖3。圖3索氏提取法提取溶劑和提取時(shí)間對(duì)游離茄尼醇測(cè)定值的影響Fig.3Theeffectofsolanesolmeasuredvaluewithdifferentabstractingsolventsandtimebysoxhletextractionmethod從圖3可以看出，乙醇、甲醇、丙酮對(duì)茄尼醇的提取率低。正己烷、石油醚提取率高，而用正己烷提取8h才能提取完全，且正己烷沸點(diǎn)為80.7℃，需將水浴溫度調(diào)高到99℃才能達(dá)到理想的回流速度，此時(shí)水浴鍋里的蒸餾水易揮發(fā)，需要不斷補(bǔ)充蒸餾水，實(shí)驗(yàn)過程繁瑣。用石油醚提取6h即能提取完全，石油醚沸點(diǎn)為30～60℃，水浴溫度控制在80～85℃即能達(dá)到理想的回流速度，水浴鍋加滿水后，蒸餾水揮發(fā)很慢,完成一個(gè)提取過程不需補(bǔ)充蒸餾水。因此，選用石油醚作為索氏提取法的提取溶劑。（2）超聲波提取法按照2.3.2.1步驟，用正己烷超聲萃取得到的茄尼醇測(cè)定值為1.95g/100g。用石油醚代替正己烷，將超聲萃取溫度改為35℃（石油醚沸點(diǎn)為30～60℃，高于35℃萃取時(shí)溶劑揮發(fā)），其它條件不變，得到的游離態(tài)茄尼醇測(cè)定值為1.91g/100g，用甲醇代替正己烷，將超聲萃取溫度改為55℃（甲醇沸點(diǎn)為64.5℃，高于55℃萃取時(shí)溶劑易揮發(fā)），其它條件不變，得到的游離態(tài)茄尼醇測(cè)定值為1.65g/100g；甲醇提取率相對(duì)較低，其它兩種溶劑都能達(dá)到較高的提取率，考慮到正己烷成分比石油醚單純，對(duì)液相色譜測(cè)定的干擾少，且正己烷沸點(diǎn)為80.7℃，較石油醚不易揮發(fā)，故選用正己烷作為提取劑。（3）比較兩種提取方法索氏提取法石油醚提取需6h，而超聲波提取法只需45min，既省試劑又省時(shí)間，而且操作簡(jiǎn)單易行，故選擇超聲波提取法萃取煙葉中的茄尼醇。3.2.2皂化條件的優(yōu)化（1）皂化堿的稀釋劑及其它皂化條件對(duì)皂化率的影響皂化反應(yīng)是界面反應(yīng)，任何影響油水二相分散程度以及界面上二相分子接觸的因素，都會(huì)影響皂化反應(yīng)速度和皂化程度，稀釋劑是使二相分子接觸的環(huán)境，故皂化反應(yīng)的進(jìn)行需要使用稀釋劑。本方法考察了稀釋劑及其它皂化條件對(duì)皂化率的影響，水、甲醇、乙醇是常用的稀釋劑，由于它們沸點(diǎn)不同，故分別對(duì)其進(jìn)行正交試驗(yàn)。堿用量、堿濃度、皂化溫度、皂化時(shí)間對(duì)皂化率均有顯著影響，故移取茄尼醇提取液9份，分別以上述3種稀釋劑溶解NaOH，對(duì)以上4因素各因素3水平設(shè)計(jì)L9(34)正交皂化試驗(yàn)。以乙醇作稀釋劑的因素水平設(shè)計(jì)見表1，正交試驗(yàn)結(jié)果見表2；表1因素與水平表Table1Factorsandlevels水平因素堿用量/mL堿濃度/(mol/L)皂化溫度/℃皂化時(shí)間/min1A1=2B1=0.005C1=45D1=302A2=3B2=0.01C2=55D2=403A3=4B3=0.02C3=65D3=50表2正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)L9(34)及結(jié)果Table2OrthogonaldesignL9(34)andresults試驗(yàn)號(hào)ABCD總茄尼醇測(cè)定值/(g/100g)堿用量堿濃度皂化溫度皂化時(shí)間111111.76212221.89313332.11421231.99522312.34623122.02731321.99832132.00933212.54Ⅰ5.765.745.786.64Ⅱ6.356.236.425.90Ⅲ6.536.676.446.10K11.921.911.932.21T=Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ=K22.122.082.141.9718.6K32.182.222.152.03R0.770.930.660.20濃度改為0.1mol·L-1[19]，總茄尼醇測(cè)定值為2.51%，與堿濃度為0.02mol·L-1的皂化條件的測(cè)定結(jié)果差別不大，說明皂化條件A3B3C2D1已能夠使茄尼醇酯充分皂化。從表2可以看出，皂化溫度55℃～65℃能皂化充分，且C2、C3測(cè)定結(jié)果基本一致，故選擇該組合為最佳皂化條件，即4mL0.02mol·L-1NaOH的乙醇溶液，60℃～65℃皂化30min。該條件經(jīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)（n=6），總茄尼醇測(cè)定值RSD＜5.0%。甲醇和水作為稀釋劑的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果總茄尼醇測(cè)定值均低于乙醇作稀釋劑的最佳皂化條件的測(cè)定結(jié)果。且甲醇沸點(diǎn)為64.5℃，乙醇沸點(diǎn)為78.3℃，皂化過程甲醇較乙醇易揮發(fā)，同時(shí)甲醇毒性較乙醇大，故排除用甲醇作皂化反應(yīng)稀釋劑。而水作稀釋劑其與正己烷不能互溶，皂化過程需要不停振蕩，操作繁瑣。故我們選擇乙醇作為稀釋劑溶解NaOH，進(jìn)行皂化反應(yīng)。（2）堿的種類對(duì)皂化率的影響常用的皂化用堿有NaOH和KOH，通常KOH比NaOH的催化作用大，而NaOH比KOH便宜。將皂化條件：“4mL0.02mol·L-1NaOH的乙醇溶液，60℃～65℃皂化30min”中NaOH改成KOH按照2.3.2.1(3)進(jìn)行測(cè)定，總茄尼醇測(cè)定值為2.57g/100g，說明兩種堿對(duì)皂化率的影響差別不大，故選用較便宜的NaOH作為皂化用堿。3.3線性范圍與線性方程取茄尼醇系列標(biāo)準(zhǔn)溶液（2.2）各進(jìn)樣20μL進(jìn)行測(cè)定，以峰面積Y對(duì)茄尼醇質(zhì)量濃度X（μg?mL-1）進(jìn)行線性回歸分析，線性回歸方程為Y=4.16×104X-2.96×103，相關(guān)系數(shù)r=0.9999。結(jié)果表明：在1～50.0μg?mL-1(0.1～5.0g?100g-1)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。3.4定量限、檢出限及定量計(jì)算以信噪比（S/N）約為10計(jì)定量限（LOQ），以S/N約為3計(jì)檢出限（LOD），采用空白溶液添加標(biāo)準(zhǔn)溶液的方法，得到定量限為0.003μg?mL-1（0.0003g?100g-1即3mg?kg-1），檢出限為0.001μg?mL-1（0.0001g?100g-1即1mg?kg-1）。同時(shí)采用外標(biāo)法定量計(jì)算樣品中茄尼醇的含量，其計(jì)算公式如下：式中：C為樣品中茄尼醇含量，單位為g?100g-1；X為校正曲線中查得的茄尼醇含量，單位為μg?mL-1；A為樣品稀釋倍數(shù)；V為樣品提取液體積，單位為mL；m為取樣量，單位為g。3.5方法的回收率稱取約1～2g（精確到0.001g）煙葉粉末于50mL具塞離心管中，添加一定濃度水平的茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用2.3.2的實(shí)驗(yàn)方法，提取、凈化、稀釋、過濾后上機(jī)檢測(cè)，測(cè)定游離態(tài)茄尼醇回收率和精密度。同樣稱取約1～2g（精確到0.0001g）煙葉粉末，添加一定水平的茄尼醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，提取、皂化、凈化、稀釋、過濾后上機(jī)檢測(cè)，測(cè)定總茄尼醇回收率和精密度。每個(gè)水平作6次平行實(shí)驗(yàn)，其不同添加水平的回收率及精密度見表3，回收率良好。表3茄尼醇加標(biāo)回收率Table3Recoveryofsolanesol檢測(cè)參數(shù)樣品名稱取樣量（g)茄尼醇含量(g/100g)樣品中茄尼醇含量(mg)加入茄尼醇量(mg)實(shí)測(cè)茄尼醇量(mg)回收率（%）平均回收率（%）游離茄尼醇煙葉11.19361.7921.41031.399.598.3煙葉32.18131.3228.82048.296.8煙葉62.11920.89118.94058.498.8煙膏10.149618.527.71037.699.0煙膏20.121115.318.52038.097.4總茄尼醇煙葉11.19862.3828.51038.195.597.0煙葉32.23132.5657.12076.697.4煙葉61.01921.3013.24052.096.9煙膏10.125325.131.51041.398.1煙膏20.111922.224.82044.397.23.6方法的精密度3.6.1進(jìn)樣重復(fù)性各取一份煙葉、煙膏待測(cè)液，按本方法2.4、2.5步驟各重復(fù)測(cè)定6次，結(jié)果見表4，可以看出，RSD均小于1%，說明本方法進(jìn)樣重現(xiàn)性良好。表4茄尼醇進(jìn)樣精密度(n=6)Table4Precisionofinjectingofsolanesol(n=6)樣品名稱編號(hào)茄尼醇含量平均值標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD（g/100g)（g/100g)（g/100g)（%）煙葉10.8480.8490.0050.5920.84430.85640.84350.84960.851煙膏115.115.00.0320.21215.0315.0415.0515.0615.03.6.2實(shí)驗(yàn)方法本身的重復(fù)性各取一份煙葉、煙膏樣品，每個(gè)樣品稱取6份，按照1.4對(duì)樣品進(jìn)行處理后上機(jī)測(cè)定，結(jié)果見表5?？梢钥闯?，RSD均小于5%，說明本方法具有良好的精密度。表5茄尼醇檢測(cè)方法精密度(n=6)Table5Precisionofthedetectionmethodofsolanesol（n=6)樣品名稱編號(hào)游離茄尼醇總茄尼醇含量平均值標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD含量平均值標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD（g/100g)（g/100g)（g/100g)（%）（g/100g)（g/100g)（g/100g)（%）煙葉10.7220.750.0273.51.591.540.0754.920.7241.5230.7761.5640.7821.3950.7711.5860.7461.57煙膏115.315.40.1651.122.722.50.4422.0215.223.1315.322.4415.522.1515.722.7615.521.93.6.3日間精密度各取一份煙葉、煙膏樣品，每隔2天將樣品測(cè)定一次，連續(xù)測(cè)定6次，按照2.3對(duì)樣品進(jìn)行處理后上機(jī)測(cè)定，計(jì)算樣品含量，測(cè)得煙葉游離茄尼醇RSD為3.7%、煙葉總茄尼醇RSD為4.7%、煙膏游離茄尼醇RSD為1.6%，煙膏總茄尼醇RSD為2.2%，RSD均小于5，說明本方法日間重現(xiàn)性良好。3.7共同實(shí)驗(yàn)結(jié)果本項(xiàng)目開展了對(duì)比試驗(yàn)，選擇了烤煙、白肋煙、香料煙3種類型的卷煙進(jìn)行分析。比對(duì)的6家實(shí)驗(yàn)室分別為：福建省農(nóng)科院中心實(shí)驗(yàn)室、中國煙草總公司鄭州煙草研究院、中國農(nóng)科院煙草研究所、福建省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心、福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院、福建省分析測(cè)試中心，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表6所示。表6茄尼醇共同實(shí)驗(yàn)結(jié)果（g·100g-1）序號(hào)樣品名稱檢測(cè)參數(shù)ABCDEF均值RSD(%)1烤煙游離茄尼醇0.5280.5400.5800.5850.5590.4810.5457.0總茄尼醇0.7600.7970.8140.8160.8110.7870.7982.72白肋煙游離茄尼醇1.001.011.031.020.9810.9801.002.2總茄尼醇1.021.051.041.091.021.251.088.13香料煙游離茄尼醇0.2220.2140.2130.2120.2150.1870.2115.7總茄尼醇0.2440.2490.2500.2420.2600.2640.2523.44煙膏游離茄尼醇14.714.614.514.714.714.214.61.4總茄尼醇19.818.620.219.118.420.619.44.6其中：A：福建省農(nóng)科院中心實(shí)驗(yàn)室，B：福建省農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心，C：福建省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，D：福建省分析測(cè)試中心，E：中國農(nóng)科院煙草研究所，F(xiàn)：中國煙草總公司鄭州煙草研究院。由表6所示的結(jié)果可見，6家實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)結(jié)果的RSD均小于10%，說明各家實(shí)驗(yàn)室結(jié)果較為接近，本方法再現(xiàn)性好。3.8實(shí)際樣品的測(cè)定結(jié)果本實(shí)驗(yàn)設(shè)定的條件下，我們測(cè)定了福建省三明金葉復(fù)烤有限公司、中國煙草白肋煙試驗(yàn)站（湖北省煙草科研所）、湖北省十堰市鄖西縣煙葉分公司提供的3種煙葉樣品（烤煙、白肋煙、香料煙）、煙梗樣品及自制煙膏樣品，茄尼醇標(biāo)樣峰與樣品中的雜質(zhì)峰均達(dá)到良好的分離，測(cè)定結(jié)果見表7。表7不同樣品中茄尼醇含量g·100g-1Table6Solanesolcontentsindifferentsamples樣品名稱游離茄尼醇含量總茄尼醇含量煙葉1（烤煙）1.792.38煙葉2（烤煙）0.5300.737煙葉3（白肋煙）1.942.56煙葉4（白肋煙）0.9721.05煙葉5（香料煙）0.2110.245煙葉6（香料煙）0.8911.30煙梗0.00030.0005煙膏118.525.1煙膏214.322.2參考文獻(xiàn)：[1]NarosionhaRaoCV,ChakrabortyMK.Solanesolfromtobaccowaste[J].ResearchandIndustry,1979,24(2):83-85.[2]王非，鄭珩，余永柱，楊欣.高純度茄尼醇的現(xiàn)狀與市場(chǎng)前景[J].現(xiàn)代化工，2005，25（8）：63-66.[3]陳愛國，申國明，梁曉芳，等.茄尼醇的研究進(jìn)展與展望[J].中國煙草科學(xué)，2007，28（6）：44-48.[4]李軍，李吉昌，吳曉華，等.煙草廢棄物利用研究[J].云南化工，2010，37（2）：44-49.[5]黎新江，張彬，周武.高純度茄尼醇的分離及測(cè)定[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（26）：11389-11390.[6]張曉仿，曹棟，鄧國棟.從廢次煙草浸膏中提取茄尼醇的皂化試驗(yàn)[J].煙草科技，2007（5）：50-52.[7]顧正桂，劉玲，顧美娟，林軍.采用分離集成技術(shù)提取廢棄煙葉中精品茄尼醇[J].化學(xué)工程，2010，38（10）：136-140.[8]許玉君，黎四芳，劉苗，等.超聲波輔助兩相提取茄尼醇的研究[J].廈門大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2010，49（5）：649-653.[9]劉快之，李德亮，陳伯森，等.庫侖滴定法測(cè)定煙葉提取物中茄尼醇[J].化學(xué)研究，1997，8（3）：56-59.[10]Sev