《浦北陳皮中毒死蜱和克百威快速檢測(cè)膠體金免疫層析法》

T/CAI***-2023ICS65.100CCSG23T/CAI1xx-2023浦北陳皮中毒死蜱和克百威快速檢測(cè)膠體金免疫層析法（征求意見稿）2023-XX-XX發(fā)布2023-XX-XX實(shí)施中國(guó)農(nóng)業(yè)國(guó)際合作促進(jìn)會(huì)發(fā)布浦北陳皮中毒死蜱和克百威快速檢測(cè)膠體金免疫層析法范圍本文件規(guī)定了浦北陳皮中毒死蜱和克百威快速檢測(cè)膠體金免疫層析法的原理、試劑與材料、儀器與設(shè)備、分析步驟、結(jié)果判定、性能指標(biāo)等。本文件適用于浦北陳皮及其原材料中克百威和毒死蜱的快速測(cè)定。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2763食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法食藥監(jiān)辦科[2017]43號(hào)食品快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范術(shù)語和定義以下列術(shù)語和定義適用于本文件。浦北陳皮pubeichenpi在欽州市浦北縣行政區(qū)域內(nèi)栽培的茶枝柑（Citrusreticulata‘Chachi’）的果皮經(jīng)曬干或烘干，并在區(qū)域范圍內(nèi)貯存陳化三年以上的果皮產(chǎn)品。按采收加工時(shí)間可分為：柑青皮（青皮）、微紅皮（二紅皮）和大紅皮（紅皮）。原理本產(chǎn)品檢測(cè)過程中方法應(yīng)用了競(jìng)爭(zhēng)法免疫層析原理，在層析過程待測(cè)液中的待測(cè)物與金標(biāo)抗體結(jié)合，抑制了金標(biāo)抗體與硝酸纖維素膜上的競(jìng)爭(zhēng)抗原（T線）的結(jié)合，從而影響T線顯色試劑與材料試劑除另有說明外，所有試劑均應(yīng)為分析純，實(shí)驗(yàn)室用水應(yīng)符合GB/T6682中二級(jí)水的要求。材料檢測(cè)卡克百威快速檢測(cè)卡。樣品稀釋液應(yīng)由膠體金免疫層析試紙條配套提供，或按照其說明書配制。參考物質(zhì)克百威和毒死蜱參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量見表1，純度≥98%。表1克百威參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量中文名稱英文名稱CAS登錄號(hào)分子式相對(duì)分子質(zhì)量克百威Carbofuran1563-66-2C12H15NO3221.252毒死蜱Chlorpyrifos2921-88-2C9H11Cl3NO3PS350.586標(biāo)準(zhǔn)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1000mg/L）應(yīng)準(zhǔn)確稱取毒死蜱、克百威標(biāo)準(zhǔn)品各約10mg（精確至0.1mg），用甲醇溶解，定容至10mL，避光-18℃及以下條件保存，有效期12個(gè)月。標(biāo)準(zhǔn)中間液（10mg/L）應(yīng)準(zhǔn)確吸取0.1mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（5.3.1），用甲醇稀釋，定容至10mL，避光-18℃及以下條件保存，有效期1個(gè)月。標(biāo)準(zhǔn)工作液（1mg/L）應(yīng)準(zhǔn)確吸取0.1mL標(biāo)準(zhǔn)中間液（5.3.2），用甲醇稀釋，定容至10mL，0℃～5℃冷藏避光保存，有效期2～3周。儀器與設(shè)備所需設(shè)備儀器應(yīng)如下：電子天平：感量為0.01g；移液器：20μL~200μL、100μL~1000μL；渦旋儀。分析步驟試樣制備陳皮樣品取樣部位應(yīng)按GB2763的規(guī)定執(zhí)行，選取一定量的有代表性樣本，剪成約1cm×1cm的碎片，備用。試樣提取應(yīng)稱取1±0.1g樣本于50mL離心管中；加入3mL樣品稀釋液，劇烈振蕩3min；離心管內(nèi)混合液即為待測(cè)液。注：若混合液不易吸取，應(yīng)置于離心機(jī)中離心1min。測(cè)定步驟將待測(cè)液100μL（膠頭滴管約3滴）加入檢測(cè)卡的加樣孔中，加樣同時(shí)開始計(jì)時(shí)；在室溫（20℃～25℃）反應(yīng)5min后判讀結(jié)果。注1：測(cè)定步驟建議按照試紙條說明書。注2：結(jié)果判定建議使用讀數(shù)儀，讀數(shù)儀的具體使用參照儀器使用說明書。質(zhì)控試驗(yàn)試驗(yàn)方式每批樣品應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)和加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)?？瞻自囼?yàn)應(yīng)稱取空白試樣，按照7.2和7.3步驟與樣品同法操作。加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)應(yīng)準(zhǔn)確稱取空白試樣2g（精確至0.05g）放入離心管中，加入40μL克百威和毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)工作液（4.2.3），使試樣中克百威和毒死蜱濃度為0.02mg/kg，按照6.2和6.3步驟與樣品同法操作。結(jié)果判定讀數(shù)儀測(cè)定將待判讀檢測(cè)卡插入儀器，選擇對(duì)應(yīng)項(xiàng)目和批號(hào)進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)儀器顯示結(jié)果進(jìn)行判讀。儀器使用方法詳見儀器使用說明書。目視判定應(yīng)通過對(duì)比質(zhì)控線（C線）和檢測(cè)線（T線）的顏色深淺進(jìn)行結(jié)果判定。目視判定示意圖見圖1。判定方式陰性結(jié)果T線顯色比C線顯色深或一樣深，表示樣品中待檢測(cè)物質(zhì)濃度低于檢測(cè)限，或不含待檢測(cè)物質(zhì)。陽性結(jié)果T線顯色比C線顯色淺，或T線無顯色，則表示樣品中待檢測(cè)物質(zhì)濃度高于檢測(cè)限。無效質(zhì)控C線未顯色，表明操作過程不正確或檢測(cè)卡已失效，檢測(cè)結(jié)果無效。圖1目視判定示意圖質(zhì)控試驗(yàn)要求空白試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陽性。結(jié)果確認(rèn)當(dāng)檢測(cè)結(jié)果為陽性時(shí)，應(yīng)按照GB2763指定方法標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行確證。性能指標(biāo)檢出限：0.02mg/kg。靈敏度：≥95%。特異性：≥90%。假陰性率：≤5%。假陽性率：≤10%注：性能指標(biāo)計(jì)算方法見附錄A。其他本方法所述試劑、試紙條信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時(shí)不做限定。方法使用者應(yīng)使用經(jīng)過驗(yàn)證的滿足本方法規(guī)定的各項(xiàng)性能指標(biāo)的試劑、試紙條。

附錄A（規(guī)范性）快速檢測(cè)方法性能指標(biāo)計(jì)算A.1快速檢測(cè)方法各個(gè)性能指標(biāo)計(jì)算見表A.1。表A.1快速檢測(cè)方法性能指標(biāo)計(jì)算表樣品情況a檢測(cè)結(jié)果b總數(shù)陽性陰性陽性N11N12N1=N11+N12陰性N21N22N2=N21+N22總數(shù)N.1=N11+N21N.2=N12+N22N=N1.+N2.或N.1+N.2顯著性差異（Χ2）Χ2=(∣N12-N21∣-1)2/（N12+N21），自由度（df）=1靈敏度（p+，%）p+=N11/N1.特異性（p-，%）p-=N22/N2.假陰性率（pf-，%）pf-=N12/N1.=100-靈敏度假陽性率（pf+，%）pf+=N21/N2.=100-特異性相對(duì)準(zhǔn)確度，%c(N11+N22)/(N1.+N2.)a由參比方法檢驗(yàn)得到的結(jié)果或者樣品中實(shí)際的公議值結(jié)果；b由待確認(rèn)方法檢驗(yàn)得到的