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PAGEPAGE9基因工程的基本操作程序1.有關(guān)目的基因和基因文庫(kù)的敘述,不正確的是()A.目的基因可以從自然界中分別,也可以人工合成B.目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因C.基因文庫(kù)就是基因組文庫(kù)D.cDNA文庫(kù)只包含一種生物的部分基因答案C解析目的基因可以從自然界中分別,也可以通過人工合成的方法獲得,A項(xiàng)正確;目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因,B項(xiàng)正確;基因文庫(kù)分為基因組文庫(kù)和部分基因文庫(kù),C項(xiàng)錯(cuò)誤;cDNA文庫(kù)只包含一種生物的部分基因,D項(xiàng)正確。2.在基因表達(dá)載體的構(gòu)建中,下列敘述錯(cuò)誤的是()A.基因表達(dá)載體的構(gòu)建方法不完全相同B.有了啟動(dòng)子才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNAC.終止子的作用是終止翻譯過程D.基因表達(dá)載體的結(jié)構(gòu)包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等答案C解析因?yàn)槭荏w細(xì)胞有植物、動(dòng)物、微生物細(xì)胞之分,且目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法不同,因此,基因表達(dá)載體的構(gòu)建方法是不完全相同的;啟動(dòng)子是一段有特別結(jié)構(gòu)的DNA片段,位于基因的首端,是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位,能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA,最終獲得所須要的蛋白質(zhì);終止子的作用是使轉(zhuǎn)錄在所須要的地方停止,終止密碼子的作用是使翻譯在所須要的地方停止;基因表達(dá)載體包括啟動(dòng)子、終止子、目的基因、標(biāo)記基因等。3.在將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的相關(guān)操作中,正確的是()A.導(dǎo)入植物細(xì)胞時(shí)均采納農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法B.轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的獲得多采納基因槍法C.大腸桿菌作為受體細(xì)胞時(shí)通常須要運(yùn)用鈣離子處理D.導(dǎo)入目的基因的動(dòng)物受精卵在培育液中發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物答案C解析將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞采納最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法;顯微注射法是將目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞中最為有效的方法,轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的獲得多采納顯微注射法;大腸桿菌作為受體細(xì)胞時(shí)通常須要運(yùn)用鈣離子處理,使其成為易于汲取DNA分子的感受態(tài)細(xì)胞;導(dǎo)入目的基因的動(dòng)物受精卵在培育液中發(fā)育成早期胚胎,再經(jīng)胚胎移植進(jìn)入母體子宮內(nèi),其在母體子宮內(nèi)發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。4.下列關(guān)于目的基因的檢測(cè)與鑒定方法中錯(cuò)誤的是()A.用顯微鏡視察染色體的形態(tài)和結(jié)構(gòu),從而檢測(cè)受體細(xì)胞是否導(dǎo)入了目的基因B.采納分子雜交技術(shù)檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNAC.用相應(yīng)的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)D.做抗蟲或抗病的接種試驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物是否具有抗性以及抗性的程度答案A解析檢測(cè)受體細(xì)胞是否導(dǎo)入了目的基因,用顯微鏡視察不到,但可以利用DNA分子雜交技術(shù)進(jìn)行檢測(cè);采納分子雜交技術(shù)可檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA;通過抗原—抗體雜交可檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì);做抗蟲或抗病的接種試驗(yàn)可檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物是否具有抗性以及抗性的程度。5.應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)可生產(chǎn)人類所須要的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品,如利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素。下列能說(shuō)明人胰島素基因在受體細(xì)胞中得以表達(dá)的是()A.在大腸桿菌細(xì)胞中檢測(cè)到人的胰島素基因B.在大腸桿菌細(xì)胞中檢測(cè)到人胰島素基因轉(zhuǎn)錄出的mRNAC.在大腸桿菌的代謝產(chǎn)物中檢測(cè)到人胰島素D.在含有四環(huán)素的培育基中培育出大腸桿菌答案C解析在大腸桿菌細(xì)胞中檢測(cè)到人的胰島素基因,只能說(shuō)明胰島素基因?qū)雱倮豢隙軇倮磉_(dá)合成胰島素;在大腸桿菌細(xì)胞中檢測(cè)到人胰島素基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA,只能說(shuō)明胰島素基因轉(zhuǎn)錄勝利,但不肯定能勝利翻譯合成胰島素;人胰島素基因在大腸桿菌中得以表達(dá)的標(biāo)記是通過轉(zhuǎn)錄和翻譯合成人的胰島素,所以在大腸桿菌的代謝產(chǎn)物中檢測(cè)到人胰島素,說(shuō)明人胰島素基因在受體細(xì)胞中得以表達(dá);若基因表達(dá)載體上有四環(huán)素抗性基因,則在含有四環(huán)素的培育基中大腸桿菌能生存,說(shuō)明目的基因可能導(dǎo)入受體細(xì)胞中,但不肯定能合成胰島素。6.下列過程中須要應(yīng)用分子雜交技術(shù)的是()①用DNA分子探針診斷疾病②重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞③快速靈敏地檢測(cè)水中病毒的含量④雜交育種A.①③ B.②③C.③④ D.①④答案A解析將某種致病基因的單鏈DNA用放射性同位素等作標(biāo)記,以此作為探針,使探針與病人的DNA雜交,假如出現(xiàn)雜交帶,則說(shuō)明含有該致病基因,有利于疾病的早期診斷;重組DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞的過程無(wú)需進(jìn)行分子雜交;檢測(cè)水中病毒的含量時(shí),在該病毒核酸片段上用放射性同位素等作標(biāo)記,以此作為探針,若發(fā)覺探針能與水中的核酸產(chǎn)生雜交帶,則表明水中含有該種病毒,可依據(jù)雜交帶的多少,確定病毒的含量;雜交育種的過程中不須要進(jìn)行分子雜交。7.多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一種體外快速擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)。下列有關(guān)敘述不正確的是()A.變性過程中破壞的是DNA分子內(nèi)堿基對(duì)之間的氫鍵,也可利用解旋酶實(shí)現(xiàn)B.復(fù)性過程中引物與DNA模板鏈的結(jié)合是依據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則完成的C.延長(zhǎng)過程中須要加入DNA聚合酶、四種核糖核苷酸D.與細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制相比,PCR所需酶的最適溫度較高答案C解析PCR延長(zhǎng)過程中須要加入耐高溫DNA聚合酶、四種脫氧核糖核苷酸。8.植物甲具有極強(qiáng)的耐旱性,其耐旱性與某個(gè)基因有關(guān)。若從該植物中獲得該耐旱基因,并將其轉(zhuǎn)移到耐旱性低的植物乙中,有可能提高后者的耐旱性?;卮鹣铝袉栴}:(1)理論上,基因組文庫(kù)含有生物的________基因;而cDNA文庫(kù)中含有生物的________基因。(2)若要從植物甲中獲得耐旱基因,可首先建立該植物的基因組文庫(kù),再?gòu)闹衉_______出所需的耐旱基因。(3)將耐旱基因?qū)朕r(nóng)桿菌,并通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將其導(dǎo)入植物________的體細(xì)胞中,經(jīng)過一系列的過程得到再生植株。要確認(rèn)該耐旱基因是否在再生植株中正確表達(dá),應(yīng)檢測(cè)此再生植株中該基因的________,假如檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性,再在田間試驗(yàn)中檢測(cè)植株的________是否得到提高。(4)假如用得到的二倍體轉(zhuǎn)基因耐旱植株自交,子代中耐旱與不耐旱植株的數(shù)量比為3∶1時(shí),則可推想該耐旱基因整合到了________(填“同源染色體的一條上”或“同源染色體的兩條上”)。答案(1)全部部分(其他合理答案也可)(2)篩選(3)乙表達(dá)產(chǎn)物耐旱性(4)同源染色體的一條上解析(1)基因組文庫(kù)包含某種生物全部的基因,而cDNA文庫(kù)包含某種生物的部分基因。(2)植物甲具有極強(qiáng)的耐旱性,其耐旱性與某個(gè)基因有關(guān),若要從植物甲中獲得耐旱基因,首先應(yīng)建立該植物的基因組文庫(kù),然后再?gòu)闹泻Y選出所需的耐旱基因。(3)從植物甲中獲得耐旱基因后,通常采納農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法,將該耐旱基因?qū)胫参镆业捏w細(xì)胞中,經(jīng)過一系列的過程得到再生植株。若要確認(rèn)該耐旱基因是否在再生植株中正確表達(dá),應(yīng)檢測(cè)此再生植株中該基因的表達(dá)產(chǎn)物,假如檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性,說(shuō)明該耐旱基因已經(jīng)翻譯成相應(yīng)的蛋白質(zhì)。此后還須要進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的檢測(cè),即在田間試驗(yàn)中檢測(cè)植株的耐旱性是否得到提高。(4)若得到的二倍體轉(zhuǎn)基因耐旱植株自交,子代中耐旱和不耐旱植株的數(shù)量比為3∶1,符合基因的分別定律,可知得到的二倍體轉(zhuǎn)基因耐旱植株為雜合子,因此可推想該耐旱基因整合到了同源染色體的一條上。9.下列有關(guān)獲得目的基因的敘述,正確的是()A.獲得目的基因是實(shí)施基因工程的第一步,也是基因工程的核心B.從基因組文庫(kù)中獲得的基因均可在物種間進(jìn)行溝通C.利用PCR技術(shù)獲得目的基因時(shí)須要耐熱的解旋酶D.假如基因比較小,核苷酸序列又已知,可以用化學(xué)方法干脆人工合成答案D解析基因工程的核心為構(gòu)建基因表達(dá)載體,A項(xiàng)錯(cuò)誤;從cDNA文庫(kù)中獲得的基因可以進(jìn)行物種間的基因溝通,但從基因組文庫(kù)中獲得的基因,只有部分可以進(jìn)行物種間溝通,B項(xiàng)錯(cuò)誤;利用PCR技術(shù)獲得目的基因時(shí),DNA在高溫下變性解旋,無(wú)需耐熱的解旋酶,C項(xiàng)錯(cuò)誤;假如基因較小,核苷酸序列又已知,可以通過DNA合成儀用化學(xué)方法干脆人工合成該基因,D項(xiàng)正確。10.下列所述方法不能用于檢測(cè)目的基因是否勝利導(dǎo)入或表達(dá)的是()A.顯微鏡下干脆視察受體細(xì)胞中是否含有目的基因B.在含某種抗生素的培育基中培育導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌C.利用相應(yīng)的DNA探針與受體細(xì)胞DNA分子進(jìn)行雜交D.提取受體細(xì)胞蛋白質(zhì),利用抗原—抗體特異性反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)答案A解析分子水平上的檢測(cè):①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物的DNA上是否插入了目的基因用DNA分子雜交技術(shù);②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA用分子雜交技術(shù);③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)用抗原—抗體雜交技術(shù)。個(gè)體生物學(xué)水平上的檢測(cè):做抗蟲或抗病的接種試驗(yàn)。質(zhì)粒上的特別基因作為標(biāo)記基因,來(lái)檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞。顯微鏡下無(wú)法視察到基因,因此無(wú)法運(yùn)用顯微鏡干脆視察受體細(xì)胞中是否含有目的基因。11.下列有關(guān)人胰島素基因表達(dá)載體的敘述,正確的是()A.表達(dá)載體中的胰島素基因可通過人肝細(xì)胞mRNA反轉(zhuǎn)錄獲得B.表達(dá)載體的復(fù)制和胰島素基因的表達(dá)均啟動(dòng)于復(fù)制原(起)點(diǎn)C.借助抗生素抗性基因可將含胰島素基因的受體細(xì)胞篩選出來(lái)D.啟動(dòng)子和終止密碼子均在胰島素基因的轉(zhuǎn)錄中起作用答案C解析人肝細(xì)胞的胰島素基因沒有表達(dá),所以無(wú)法通過人肝細(xì)胞mRNA反轉(zhuǎn)錄獲得胰島素基因,A項(xiàng)錯(cuò)誤。表達(dá)載體的復(fù)制是由復(fù)制原點(diǎn)起先的;啟動(dòng)子是基因的一個(gè)組成部分,限制基因表達(dá)(轉(zhuǎn)錄)的起始時(shí)間和表達(dá)的程度,胰島素基因的表達(dá)從啟動(dòng)子起先,啟動(dòng)子和復(fù)制原點(diǎn)是不同的序列;起始密碼子和終止密碼子在翻譯過程中起作用,B、D兩項(xiàng)錯(cuò)誤。用含抗生素抗性基因的質(zhì)粒作為胰島素基因表達(dá)載體,可以鑒定受體細(xì)胞中是否被導(dǎo)入質(zhì)粒,從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái),C項(xiàng)正確。12.利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)羧酸酯酶(carE)制劑的流程如圖所示,下列敘述正確的是()A.過程①所需的逆轉(zhuǎn)錄酶可取自抗農(nóng)藥馬拉硫磷小菜蛾的任一細(xì)胞B.過程②利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因需運(yùn)用耐高溫的解旋酶和引物C.過程③常用Ca2+處理大腸桿菌使其成為易于汲取DNA分子的感受態(tài)細(xì)胞D.過程④可利用抗原—抗體雜交技術(shù)鑒定目的基因是否已導(dǎo)入受體細(xì)胞答案C解析過程①表示通過反轉(zhuǎn)錄法合成目的基因,該過程須要逆轉(zhuǎn)錄酶,逆轉(zhuǎn)錄酶一般取自RNA病毒,抗農(nóng)藥馬拉硫磷小菜蛾體內(nèi)沒有逆轉(zhuǎn)錄酶,A項(xiàng)錯(cuò)誤;過程②利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因需運(yùn)用耐高溫的DNA聚合酶和引物,B項(xiàng)錯(cuò)誤;過程③常用Ca2+處理大腸桿菌,使其成為易于汲取DNA分子的感受態(tài)細(xì)胞,C項(xiàng)正確;抗原—抗體雜交技術(shù)用于鑒定目的基因是否勝利表達(dá),鑒定目的基因是否已導(dǎo)入受體細(xì)胞常用DNA分子雜交技術(shù),D項(xiàng)錯(cuò)誤。13.下面是將某細(xì)菌的基因A導(dǎo)入大腸桿菌內(nèi),制備“工程菌”的示意圖。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問題:(1)人工合成法獲得A的兩條途徑:一是以A的mRNA為模板,在________酶的催化下,合成互補(bǔ)的單鏈DNA,然后在________作用下合成雙鏈DNA,從而獲得所需基因;二是依據(jù)目的蛋白質(zhì)的________序列,推想出相應(yīng)的mRNA序列,然后依據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,推想其DNA的________序列,再通過化學(xué)方法合成所需基因。(2)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增DNA時(shí),須要在反應(yīng)體系中添加的有機(jī)物質(zhì)有________、________、4種脫氧核苷酸和具有耐熱性的DNA聚合酶,擴(kuò)增過程可以在PCR擴(kuò)增儀中完成。(3)由A和載體B拼接形成的C通常稱為____________。(4)在基因工程中,常用Ca2+處理D,其目的是____________________________________________________________________________________________。答案(1)逆轉(zhuǎn)錄DNA聚合酶氨基酸脫氧核苷酸(2)引物模板(或目的基因或基因A)(3)基因表達(dá)載體(4)使大腸桿菌成為感受態(tài)細(xì)胞,更簡(jiǎn)單汲取重組DNA分子解析(1)利用反轉(zhuǎn)錄法合成目的基因的過程:以mRNA為模板,在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化作用下合成單鏈DNA,然后在DNA聚合酶作用下,合成雙鏈DNA分子,從而獲得所需基因。依據(jù)蛋白質(zhì)合成目的基因的過程:依據(jù)目的蛋白質(zhì)的氨基酸序列,推想相應(yīng)的mRNA序列,然后依據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,推想DNA中脫氧核苷酸的序列,通過化學(xué)方法合成所需基因。(2)PCR過程中須要耐熱性DNA聚合酶、原料(4種脫氧核苷酸)、模板、引物等物質(zhì)。(3)目的基因和運(yùn)載體結(jié)合,形成基因表達(dá)載體。(4)利用大腸桿菌作為受體細(xì)胞時(shí),須要先用Ca2+處理,使之成為感受態(tài)細(xì)胞,有利于汲取重組DNA分子。14.如圖是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程示意圖(Ampr為氨芐青霉素抗性基因),其中①~④是該過程中的相關(guān)步驟,Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請(qǐng)據(jù)圖作答(題中四種限制酶切割產(chǎn)生的末端不相同):(1)在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),可用一種或多種限制酶進(jìn)行切割,為了避開目的基因和載體在酶切后發(fā)生隨意連接,在此試驗(yàn)中應(yīng)當(dāng)選用____________分別對(duì)含魚抗凍蛋白基因的DNA片段和質(zhì)粒進(jìn)行切割,含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒切割后產(chǎn)生的DNA片段分別有________、________個(gè)。(2)基因工程中核心步驟是________(填序號(hào)),該步驟的目的是____________________________________________________________。為了使目的基因正常表達(dá),其首端必需有啟動(dòng)子,它是________識(shí)別和結(jié)合的部位。若限制酶切出了平末端,要選擇________(填“E·coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”)進(jìn)行連接。(3)圖中將魚抗凍蛋白基因?qū)敕鸭?xì)胞的方法一般為____________。該方法用到的Ti質(zhì)粒中含有____________,可以將目的基因轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并整合到受體細(xì)胞中染色體的DNA上。(4)檢測(cè)番茄植株細(xì)胞中魚抗凍蛋白基因是否勝利表達(dá),分子水平上常采納的方法是________。答案(1)PstⅠ、SmaⅠ42(2)①使目的基因穩(wěn)定存在并能遺傳下去,使目的基因能夠表達(dá)及發(fā)揮作用RNA聚合酶T4DNA連接酶(3)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法T-DNA(或可轉(zhuǎn)移的DNA)(4)抗原—抗體雜交解析(1)在構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí),假如目的基因和載體僅用一種限制酶切割,獲得的末端相同,可能會(huì)發(fā)生自連或目的基因反向接入載體的現(xiàn)象。為避開目的基因和載體在酶切后發(fā)生隨意連接,應(yīng)選用兩種不同的限制酶切割,分析圖中4種限制酶的切割位點(diǎn)可知,應(yīng)選用PstⅠ和SmaⅠ對(duì)含魚抗凍蛋白基因的DNA片段、質(zhì)粒進(jìn)行切割。含魚抗凍蛋白基因的DNA片段被切割后產(chǎn)生4個(gè)DNA片段,質(zhì)粒被切割后產(chǎn)生2個(gè)DNA片段。(2)基因工程中核心步驟是①(基因表達(dá)載體的構(gòu)建),該步驟的目的是使目的基因穩(wěn)定存在并能遺傳下去,使目的基因能夠表達(dá)及發(fā)揮作用。啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位。若限制酶切出了平末端,應(yīng)選擇T4DNA連接酶進(jìn)行連接。(3)圖中將魚抗凍蛋白基因?qū)敕鸭?xì)胞的方法一般為農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。該方法用到的Ti質(zhì)粒中含有T-DNA(可轉(zhuǎn)移的DNA),可以將目的基因轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞并整合到受體細(xì)胞中染色體DNA上。(4)檢測(cè)番茄植株細(xì)胞中魚抗凍蛋白基因是否勝利表達(dá),分子水平上常采納的方法是抗原—抗體雜交。15.蘇云金芽孢桿菌(Bt)能產(chǎn)生具有殺蟲實(shí)力的毒蛋白。圖1表示3種限制酶的識(shí)別序列與酶切位點(diǎn),圖2是轉(zhuǎn)Bt毒蛋白基因植物的重組DNA形成過程示意圖,圖3是Bt毒蛋白基因進(jìn)入植物細(xì)胞后發(fā)生的兩種生物大分子合成的過程。據(jù)圖回答下列問題。(1)將圖2中①用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后,反應(yīng)管中有________種DNA片段。過程②兩片段通過________鍵相連。(2)假設(shè)圖2中質(zhì)粒上限制酶BamHⅠ的識(shí)別序列變成了另一種限制酶BclⅠ的識(shí)別序列,現(xiàn)用BclⅠ和HindⅢ切割質(zhì)粒,則該圖中①還能選擇BamHⅠ和HindⅢ進(jìn)行切割,并獲得所需重組質(zhì)粒嗎?并請(qǐng)說(shuō)明理由。_____________________________________________________________________。(3)若(2)中假設(shè)成立,并勝利構(gòu)建重組質(zhì)粒,則重組質(zhì)粒________。A.既能被BamHⅠ切開,也能被HindⅢ切開B.能被Bam

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