藥物毒理學(xué)：重復(fù)給藥毒性研究-1

重復(fù)給藥毒性研究

Repeatdosetoxicitystudy12023最新整理收集do

something提綱第一節(jié) 概述第二節(jié) 基本原則與要求第三節(jié) 基本內(nèi)容第四節(jié) 分類實例討論第五節(jié) 結(jié)果的綜合分析2第一節(jié)概述

3？？？invivo：ADMEDrugTargetorganToxicreactionSingledoseDrugDrugDrugDruginvivo：ADMETargetorganToxicreactionRepeatdoseEvidentforsupportingsafetyevaluation4Safetypharmacology一、定義與目的： 重復(fù)給藥毒性試驗（Repeatdosetoxicitystudy）是觀察反復(fù)給藥情況下,實驗動物出現(xiàn)的：毒性反應(yīng)劑量-反應(yīng)關(guān)系主要靶器官毒性反應(yīng)的性質(zhì)和損害程度可逆性等毒性產(chǎn)生時間持續(xù)時間可能反復(fù)產(chǎn)生毒性反應(yīng)的時間有否遲發(fā)性毒性反應(yīng)有否蓄積毒性耐受性Descriptivetoxicology5找出

無觀察到有害作用劑量(NoObviousAdverseEffectLevel,NOAEL）

(Appliedtoxicology)6二、應(yīng)用意義：預(yù)測受試物可能引起的臨床不良反應(yīng)(Adversereaction)；判斷受試物反復(fù)給藥的主要毒性靶器官(Targetorgans)；推測臨床試驗的起始劑量和重復(fù)用藥的安全劑量范圍(MarginofSafety)；提示臨床試驗中需重點監(jiān)測的指標(Parametersformonitoring)；為臨床試驗中的解毒或解救措施提供參考；為更長期的毒性試驗(包括致癌試驗)的劑量設(shè)計和觀察指標的選定提供參考。

7三、特點：研究周期最長困難最大耗資最多難以重復(fù)無法替代重復(fù)給藥毒性試驗是判斷一個候選藥物是否有進一步開發(fā)的價值能否過渡到臨床的重要依據(jù)之一。8第二節(jié)

基本原則與具體要求9一、基本原則試驗管理：GLP參照有關(guān)的技術(shù)指導(dǎo)原則：CFDA、ICH、OECD、FDA、EMEA整體性：充分考慮藥效學(xué)、藥代動力學(xué)和其它毒理學(xué)研究的試驗設(shè)計和研究結(jié)果。具體問題具體分析：試驗設(shè)計應(yīng)根據(jù)受試物的結(jié)構(gòu)特點和理化性質(zhì)、同類受試物在國內(nèi)、外的臨床使用情況、臨床適應(yīng)癥和用藥人群、臨床用藥方案、相關(guān)的藥效學(xué)、藥代動力學(xué)和毒理學(xué)研究信息等綜合考慮。隨機、對照、重復(fù)。GoodLaboratoryPractice10二、具體要求應(yīng)在藥效、藥代、安全性藥理、急性毒性試驗之后進行；試驗設(shè)計應(yīng)由藥學(xué)、藥理、毒理、臨床研究人員共同制定；研究設(shè)計必須科學(xué)、周到和合理；嚴格掌握試驗條件、盡量排除干擾；觀察指標力求全面并能針對新藥的作用特點，突出重點；數(shù)據(jù)經(jīng)合理的統(tǒng)計學(xué)處理；認真、科學(xué)地分析實驗結(jié)果，實事求是辨別真?zhèn)危唤Y(jié)論能明確回答新藥毒副反應(yīng)的主要特點及安全劑量的主要范圍。11第三節(jié)

基本內(nèi)容12一、受試物：

采用制備工藝穩(wěn)定、符合臨床試驗用質(zhì)量標準規(guī)定的樣品，能代表所要評價物質(zhì)的總體，理化性質(zhì)應(yīng)清晰，包括：制作方法(合成、提取、發(fā)酵、重組表達等)所用的前體及溶劑(工程菌、細胞)純化的方法殘留物雜質(zhì)質(zhì)量可控13二、實驗動物：1、實驗動物種屬或品系的選擇：理想的動物應(yīng)具有以下特點：對受試物的生物轉(zhuǎn)化及反應(yīng)與人體相近對受試物敏感已有大量歷史對照數(shù)據(jù)實際應(yīng)用：化學(xué)藥和中藥常選用兩種動物，大鼠和Beagle狗皮膚用藥常用小型豬或家兔生物技術(shù)藥物常用非人靈長類--猴142、實驗動物的質(zhì)量控制：正常、健康和未孕，動物體重差異應(yīng)在平均體重的20％之內(nèi)。符合國家有關(guān)規(guī)定的等級要求，來源、品系、遺傳背景清楚，質(zhì)量合格。選用處于體重增長曲線對數(shù)期的動物，試驗開始時大鼠為6周齡左右，Beagle犬為6個月齡左右，猴為2-3歲左右少年期153、實驗動物的性別和數(shù)量：大鼠：雌、雄各15-30只Beagle犬或猴：雌、雄各5-6只

4、動物試驗設(shè)施的要求：動物飼養(yǎng)環(huán)境能夠影響實驗動物的生長發(fā)育、生理功能與機體代謝，如體重、免疫功能、應(yīng)激狀態(tài)、代謝能力等，從而影響了其對受試藥物的毒性反應(yīng)。國家標準GBGB14925-2010《中華人民共和國標準實驗動物環(huán)境及設(shè)施》對動物實驗室的要求16中山大學(xué)實驗動物中心17動物實驗設(shè)施(SPF)18動物實驗設(shè)施(狗實驗室)19動物實驗設(shè)施(猴實驗室)20三、給藥方案：1、給藥劑量(Doselevels)：劑量組設(shè)置？高劑量：使動物產(chǎn)生明顯的毒性反應(yīng)，甚至出現(xiàn)個別動物死亡。（找出毒性反應(yīng)和靶器官）低劑量：高于動物藥效學(xué)試驗的等效劑量，并不使動物出現(xiàn)毒性反應(yīng)。（找出NOAEL）中劑量：在高劑量和低劑量之間設(shè)立，考察毒性反應(yīng)劑量-反應(yīng)關(guān)系還有？賦形劑對照組，空白對照組或陽性對照組212、對照組

(control)：賦形劑(vehicle)對照組(包括溶媒、膠囊、生理鹽水、佐劑或空載體)：排除賦形劑對試驗結(jié)果解釋的干擾。

空白(blank)對照組：對試驗組動物取得的各種數(shù)據(jù)與正常動物進行比較，也可比較試驗前后各種數(shù)據(jù)的本底值。陽性(positive)對照組(包括已知典型毒性反應(yīng)的陽性對照物和已知毒性資料的標準物)：考察所選用的實驗系統(tǒng)及方法是否能反映一些特殊的毒性（如神經(jīng)系統(tǒng)毒性），提供對受試物所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)程度進行比較。223、給藥途徑

(Exposureroute)：原則上應(yīng)與臨床用藥途徑一致，特殊情況需作說明

經(jīng)口給藥(byorally)：灌胃(i.g)、灌服膠囊、摻入飼料、摻入飲水；注射給藥(byinjection)：肌肉注射(im)、靜脈注射(iv)輸注（infusion）、腹腔注射(ip)、皮下注射(sc)等；皮膚給予(topicalapplication)：包括開放、半封閉、封閉給藥；其他：瘤內(nèi)注射、舌下給藥234、給藥頻率：理想的給藥頻率及給藥間隔盡量與人擬用方式一致原則上應(yīng)每天給藥，給藥期限長（3個月或以上）的藥物每周至少應(yīng)給藥6天。根據(jù)具體藥物的特點設(shè)計給藥頻率（t1/2)245、給藥期限：與擬用的臨床療程、臨床適應(yīng)癥和用藥人群有關(guān)25四、檢測指標：？涉及全身各系統(tǒng)：血液、免疫、肝臟、腎臟、呼吸、神經(jīng)行為、心血管、消化、內(nèi)分泌、生殖、眼、耳、皮膚、粘膜等。對應(yīng)的檢測指標：一般觀察指標、血液學(xué)、血液生化學(xué)、病理解剖學(xué)及病理組織等方面。261、一般狀況的觀察：

最基本、最重要的內(nèi)容體重、攝食量：是非特異性指標，可用作全身毒性反應(yīng)的初步反映。一般癥狀觀察：籠旁觀察，每天兩次，觀察動物是否出現(xiàn)死亡。按癥狀觀察表進行詳細的檢查和記錄。272心血管功能檢查動物：大動物檢測時間：試驗開始前、試驗期間、試驗結(jié)束指標：描記心電圖，測量血壓、心率特別注意：Q-T間期28心血管、神經(jīng)功能檢查293血液學(xué)指標

內(nèi)容：紅細胞計數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HB)、白細胞計數(shù)(WBC)及分類、血小板計數(shù)(PLT)、凝血酶原時間(PT)、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)(Ret)。意義：貧血、溶血、紅細胞生成減少、化療、腎上腺皮質(zhì)激素、肝臟受損、骨髓抑制304血液生化學(xué)指標

內(nèi)容及意義：肝膽功能：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶

(ALT)天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶

(AST)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶

(GGT)堿性磷酸酶

(ALP)膽堿脂酶（CHE）

腎功能尿素氮（BUN）

肌酐（CRE）

31蛋白:總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）糖(GLU)脂類:甘油三酯（TG)、總膽固醇（TCHO）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL）、低高密度脂蛋白膽固醇（LDL)總膽紅素(T-BIL)、直接膽紅素(D-BIL)肌損傷：乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）離子：Ca2+、IP、K+、Na+、Cl-其他特征性指標325、骨髓檢查意義：觀察骨髓細胞數(shù)量是否波動，細胞構(gòu)成比例的變化，特異細胞是否異常增殖或減少和消失，出理異常形態(tài)的細胞。6、尿液分析指標內(nèi)容：尿液外觀、比重（SG）、pH值（pH）、尿糖（GLU）、尿蛋白（PRO）、尿膽紅素（BIL）、尿膽原（UBG）、酮體（KET）、亞硝酸鹽（NIT）、潛血（BLD）、白細胞（LEU）337、組織病理學(xué)檢查

給藥結(jié)束后，應(yīng)對動物（除恢復(fù)期觀察動物）進行全面的大體解剖，主要臟器應(yīng)稱重并計算臟器系數(shù)。臟器系數(shù)(%)=(臟器重量÷體重)10034病理儀器35組織病理學(xué)檢查是長期毒性試驗的核心內(nèi)容之一，對判斷動物的毒性靶器官或靶組織具有重要的意義，是發(fā)現(xiàn)毒性和描述毒性的“證據(jù)”。旨在：全面細致反映組織結(jié)構(gòu)狀態(tài)提供重要的形態(tài)學(xué)依據(jù)判斷毒性損傷部位程度性質(zhì)尋找毒性靶器官探討毒性作用機理。368、毒物代謝動力學(xué)

揭示受試物體內(nèi)暴露狀況和毒理學(xué)試驗結(jié)果的關(guān)系，推斷與臨床安全性之間的相關(guān)性.毒代動力學(xué)數(shù)據(jù)可以來自重復(fù)給藥毒性試驗的全部動物，也可以來自部分動物。毒代動力學(xué)試驗應(yīng)選擇合適的時間點采樣測定，從而獲得藥時曲線下面積（AUC）、峰濃度（Cmax）、達峰時間（Tmax）等參數(shù)。生物技術(shù)藥物在體內(nèi)的分布：分布至重要器官(生殖腺)、表達，是否與宿主的遺傳物質(zhì)發(fā)生整合、融合。毒代動力學(xué)的儀器9、免疫原性免疫器官檢查、血液學(xué)檢查體液免疫：抗體(滴度、出現(xiàn)抗體的動物數(shù)、中和或非中和抗體等)。細胞介導(dǎo)免疫：CTL(ELISPORT)，CD4、CD8非特異免疫：補體、NK細胞活性自身免疫：抗核抗體細胞因子：IFN、IL免疫復(fù)合物