DB32T 4578.4-2023 丙型病毒性肝炎防治技術(shù)指南 第4部分：實驗室建設(shè)與管理規(guī)范　　

丙型病毒性肝炎防治技術(shù)指南第4部分：實驗室建設(shè)與管理規(guī)范發(fā)出布版發(fā)出布版江蘇省市場監(jiān)督管理局Ⅰ前言 Ⅲ引言 Ⅳ 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語和定義 4縮略語 5開展檢測項目 6實驗室建設(shè) 7實驗室管理 8實驗室操作 9實驗室職業(yè)暴露預(yù)防和處置 參考文獻(xiàn) Ⅲ本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件是DB32/T4578《丙型病毒性肝炎防治技術(shù)指南》的第4部分。DB32/T4578已經(jīng)發(fā)布了以下部分：——第1部分：質(zhì)量控制指標(biāo)；——第2部分：患者管理；——第3部分：職業(yè)暴露與處理；——第4部分：實驗室建設(shè)與管理規(guī)范；——第5部分：聚集性疫情處置。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由江蘇省衛(wèi)生健康委員會提出。本文件由江蘇省衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本文件起草單位：江蘇省疾病預(yù)防控制中心、無錫市疾病預(yù)防控制中心、常州市疾病預(yù)防控制中心、連云港市疾病預(yù)防控制中心、淮安市疾病預(yù)防控制中心、南京市第二醫(yī)院。本文件主要起草人：周瑩、陳莉萍、徐曉琴、楊丹丹、盧靜、張之、胡海洋、肖勇、許曉國、楊煥森、Ⅳ引言丙型病毒性肝炎（簡稱丙肝）是全球性的嚴(yán)重威脅著人類健康的公共衛(wèi)生問題，是引發(fā)肝硬化、肝細(xì)胞癌的重要病因之一。2021年國家衛(wèi)生健康委牽頭印發(fā)了《關(guān)于印發(fā)消除丙型肝炎公共衛(wèi)生危害行動工作方案（2021—2030年）的通知》，隨后江蘇省也印發(fā)了《關(guān)于印發(fā)江蘇省消除丙型肝炎公共衛(wèi)生危害行動工作方案的通知》，以進(jìn)一步推動丙型病毒性肝炎的防治工作。DB32/T4578《丙型病毒性肝炎防治技術(shù)指南》擬由以下五個部分構(gòu)成：——第1部分：質(zhì)量控制指標(biāo)；——第2部分：患者管理；——第3部分：職業(yè)暴露與處理；——第4部分：實驗室建設(shè)與管理規(guī)范；——第5部分：聚集性疫情處置。DB32/T4578的制定是對丙肝防治工作相關(guān)方面的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的有力補(bǔ)充，為丙肝防治工作的患者篩查、診斷、報告、轉(zhuǎn)介、追蹤、治療、隨訪的全流程管理的科學(xué)防治提供支撐。為實現(xiàn)WHO“到2030年消除丙肝公共衛(wèi)生危害”的目標(biāo)有著重要的意義。1丙型病毒性肝炎防治技術(shù)指南第4部分：實驗室建設(shè)與管理規(guī)范本文件給出規(guī)定了丙型病毒性肝炎（以下簡稱“丙肝”）實驗室開展的檢測項目、實驗室建設(shè)、實驗室管理、實驗室操作以及實驗室職業(yè)暴露預(yù)防與處置的指南。本文件適用于各級各類醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)開展丙肝病毒檢測工作的實驗室。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB19489實驗室生物安全通用要求GB50346生物安全實驗室建筑技術(shù)規(guī)范WS/T369醫(yī)療機(jī)構(gòu)消毒技術(shù)規(guī)范ISO/IEC17025檢測和校準(zhǔn)實驗室能力的通用要求（Generalrequirementsforthecompetenceof3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。丙型肝炎病毒hepatitisCvirus；HCV屬于黃病毒科，肝炎病毒屬，其基因組為單股正鏈RNA，由9.6×103個核苷酸組成。注：HCV基因易變異，目前可至少分為6個基因型及多個亞型。HCV對一般化學(xué)消毒劑敏感，甲醛熏蒸等均可滅活HCV；100℃5min或60℃10h、高壓蒸汽等物理方法也均可滅活HCV。丙型病毒性肝炎hepatitisC由丙型肝炎病毒感染引起的病毒性肝炎。注簡稱丙型肝炎或丙肝。丙型肝炎病毒抗體檢測hepatitisCvirusantibodydetection對人體免疫細(xì)胞因HCV感染產(chǎn)生的丙型肝炎病毒抗體進(jìn)行檢測的一種方法。注：其原理是利用基因工程表達(dá)HCV基因結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)蛋白作為包被抗原來測定HCV抗體。目前臨床最常用的檢測方法是酶聯(lián)免疫吸附分析法、化學(xué)發(fā)光法和免疫層析法等。丙型肝炎病毒核酸檢測hepatitisCvirusnucleicaciddetection利用分子生物學(xué)方法確定查找患者的血液中是否存在丙肝病毒的核酸，來判斷是否被丙肝病毒感染2DB32/T4578.4—2023的檢測方法。注：核酸檢測分為定性和定量檢測。主要檢測方法有轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增、反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)和實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)。3.5丙型肝炎病毒基因分型檢測hepatitisCvirusgenotypingdetection利用分子生物學(xué)方法確定丙型肝炎病毒的基因型及亞型。注：基因分型檢測主要基于基因序列測定和基于特異性核苷酸互補(bǔ)探針結(jié)合的方法。3.6實驗室生物安全laboratorybiosafety實驗室的條件和狀態(tài)不低于容許水平，可避免實驗室人員、來訪人員、社區(qū)及環(huán)境受到不可接受的損害，以保證人員和環(huán)境相對處于相對沒有危險或殘余風(fēng)險可接受的狀態(tài)。3.7生物安全實驗室biosafetylaboratories通過防護(hù)屏障和管理措施，達(dá)到生物安全要求的病原微生物實驗室。3.8室內(nèi)質(zhì)量控制internalqualitycontrol為達(dá)到質(zhì)量要求所采取的實驗室內(nèi)的作業(yè)技術(shù)和活動。3.9室間質(zhì)量評價externalqualityassessment多家實驗室分析同一標(biāo)本，并由外部獨立機(jī)構(gòu)收集和反饋實驗室上報的結(jié)果，以此評價實驗室操作的過程。3.10標(biāo)準(zhǔn)操作程序standardoperatingprocedure；SOP將某一實驗全部標(biāo)準(zhǔn)操作步驟和要求以統(tǒng)一的格式描述出來，用來指導(dǎo)日常工作。3.11職業(yè)暴露occupationalexposure職業(yè)工作人員，如醫(yī)生、護(hù)士、實驗室技術(shù)人員、人民警察等，在從事診療、護(hù)理或其他職業(yè)工作過程中意外被丙型肝炎患者的血液、體液污染了破損的皮膚或者黏膜，或者被含有丙型肝炎病毒的血液、體液污染了的針頭及其他銳器刺破皮膚，有可能導(dǎo)致丙型肝炎病毒感染風(fēng)險的情況。4縮略語下列縮略語適用于本文件。BSL?2：二級生物安全實驗室（BiosafetyLevel?2）RNA：核糖核酸（RibonucleicAcid）5開展檢測項目5.1丙型肝炎病毒抗體檢測。5.2丙型肝炎病毒核酸檢測。丙型肝炎病毒核酸檢測主要包括以下檢測內(nèi)容：a）丙型肝炎病毒RNA定性檢測；b）丙型肝炎病毒RNA定量檢測；3DB32/T4578.4—2023c）丙型肝炎病毒基因分型檢測。6實驗室建設(shè)6.1設(shè)施與環(huán)境6.1.1丙型肝炎病毒檢測實驗室應(yīng)按BSL?2的標(biāo)準(zhǔn)建設(shè)。具體要求見GB19489和GB50346。6.1.2實驗室應(yīng)通過二級生物安全實驗室備案。6.1.3醫(yī)療機(jī)構(gòu)丙型肝炎病毒核酸檢測實驗室建設(shè)依據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增管理辦法》及其附件《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室工作導(dǎo)則》。6.1.4基本設(shè)備包括壓力蒸汽滅菌鍋、二級生物安全柜、冰箱、生物安全型離心機(jī)、加樣器等基本設(shè)備，應(yīng)與所開展檢測項目和工作量相適應(yīng)。6.2管理體系文件6.2.1實驗室內(nèi)具備完善的管理體系文件，至少應(yīng)包含實驗室規(guī)章制度、質(zhì)量手冊、程序文件、作業(yè)指導(dǎo)書、生物安全管理文件等，明確實驗室負(fù)責(zé)人、安全負(fù)責(zé)人和安全監(jiān)督員，按照ISO/IEC17025的要求。6.2.2實驗室內(nèi)所有丙型肝炎病毒檢測項目應(yīng)具有但不僅限于檢測方法的SOP、原始記錄、質(zhì)量控制、高壓滅菌記錄等記錄文件，并及時更新。6.3人員要求6.3.1需配備2名以上檢測技術(shù)人員，至少1人具有中級及以上衛(wèi)生技術(shù)職稱。每年進(jìn)行一次人員比對考核。6.3.2丙型肝炎病毒檢測實驗室或?qū)嶒炇以O(shè)立單位應(yīng)當(dāng)每年定期對檢測技術(shù)人員進(jìn)行培訓(xùn)，保證其掌握實驗室技術(shù)規(guī)范、操作規(guī)程、生物安全防護(hù)知識和實際操作技能，并進(jìn)行考核。檢測技術(shù)人員經(jīng)考核合格的，方可上崗。上崗培訓(xùn)內(nèi)容至少應(yīng)包括（參考《病原微生物實驗室生物安全管理條例》第三十四條規(guī)定a）丙型肝炎病毒檢測相關(guān)基礎(chǔ)知識；b）丙型肝炎病毒相關(guān)檢測技術(shù)及管理要求，試驗操作，質(zhì)量保證與質(zhì)量控制，生物安全等。6.3.3報告簽署人員應(yīng)分為檢驗人、復(fù)核人和簽發(fā)人，且三人不可重復(fù)，其中簽發(fā)人可根據(jù)報告機(jī)構(gòu)工作需求選擇是否在報告單中體現(xiàn)。6.3.4檢驗人需接受過市級及以上丙型肝炎病毒檢測技術(shù)培訓(xùn)，并獲得培訓(xùn)證書；要求掌握相關(guān)專業(yè)知識和技能，能獨立熟練地操作，并經(jīng)考核合格，持證上崗。6.3.5復(fù)核人、簽發(fā)人應(yīng)具備對檢測過程進(jìn)行分析和處理的能力。6.4實驗室檢測能力及職能要求6.4.1二級以上綜合醫(yī)院、傳染病?？漆t(yī)院、丙肝定點醫(yī)療機(jī)構(gòu)和疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)丙型肝炎檢測實驗室應(yīng)具備抗體檢測和核酸檢測能力。傳染病專科醫(yī)院、丙肝定點醫(yī)療機(jī)構(gòu)還應(yīng)具備基因分型檢測能力。6.4.2其他醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)應(yīng)具備丙型肝炎病毒抗體檢測能力。6.4.3第三方檢測機(jī)構(gòu)丙型肝炎檢測實驗室可根據(jù)工作需求選擇相應(yīng)的檢測能力。6.4.4具有管理職能的實驗室應(yīng)負(fù)責(zé)對管轄實驗室進(jìn)行管理、培訓(xùn)、督導(dǎo)、考評等工作并提供技術(shù)支持。6.4.5實驗室應(yīng)配合傳染病報告人員完成丙肝抗體陽性且核酸檢測陽性病例在國家傳染病監(jiān)測系統(tǒng)的上報工作。47實驗室管理7.1質(zhì)量控制7.1.1室內(nèi)質(zhì)量控制實驗室應(yīng)建立質(zhì)控計劃并開展室內(nèi)質(zhì)量控制。采購符合本實驗室檢測方法的商品化弱陽性質(zhì)控品，并與樣品在同等條件下進(jìn)行檢測。選擇合適的質(zhì)控方法、設(shè)定質(zhì)控失控規(guī)則，質(zhì)控數(shù)據(jù)可溯源，及時發(fā)現(xiàn)并處理失控情況。7.1.2室間質(zhì)量評價實驗室每年至少參加一次由有資質(zhì)的第三方單位組織的室間質(zhì)量評價或能力驗證考核且成績合格。如無法參加室間質(zhì)量評價，可用實驗室間比對代替，結(jié)果形成報告保存。7.2生物安全防護(hù)7.2.1丙型肝炎病毒相關(guān)檢測的生物安全級別丙型肝炎病毒不是高致病性病原微生物，但未經(jīng)滅活的感染性材料應(yīng)在符合二級生物安全實驗室中進(jìn)行。7.2.2實驗室生物安全保障措施實驗室應(yīng)建立安全制度、標(biāo)準(zhǔn)操作程序、意外事故處理預(yù)案及信息安全保密制度。7.2.3培訓(xùn)和管理培訓(xùn)并強(qiáng)化“普遍性防護(hù)原則”。所有檢測人員應(yīng)接受過生物安全培訓(xùn)并掌握生物安全防護(hù)用品和儀器設(shè)施使用方法、意外事故處理方法。7.2.4個人防護(hù)實驗室工作人員上崗前及其后每年應(yīng)進(jìn)行丙型肝炎病毒標(biāo)志物本底檢測并保留檢測記錄。實驗室為工作人員提供充分的個人防護(hù)用品和個人防護(hù)設(shè)施。8實驗室操作8.1實驗室生物安全操作8.1.1試劑的管理和使用保證試劑包裝完整性，按試劑要求溫度、環(huán)境保存。8.1.2樣品的管理和使用參照GB/T38576，依據(jù)《病原微生物實驗室生物安全管理條例》妥善保管丙型肝炎抗體陽性和丙型肝炎RNA陽性樣本，樣本保存、運輸、銷毀應(yīng)有記錄。58.1.3實驗室檢測過程丙型肝炎病毒感染性生物樣品離心應(yīng)使用生物安全型離心機(jī)；開蓋、加樣等操作應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行或在具有高效過濾器的自動脫蓋機(jī)中開蓋并在封閉機(jī)器內(nèi)自動加樣。8.1.4實驗室的清潔和消毒參照GB19489和WS/T369處置。實驗室發(fā)生核酸污染處理后需對實驗室內(nèi)環(huán)境采樣并進(jìn)行丙型肝炎病毒核酸檢測，結(jié)果陰性后才可恢復(fù)核酸檢測工作。8.2實驗室檢測操作8.2.1根據(jù)檢測方法不同，樣品可選擇血清、血漿或全血。樣品應(yīng)具有實驗室唯一標(biāo)識，可溯源。8.2.2試劑出入庫明細(xì)清楚，按要求保存。臨床診斷用試劑應(yīng)是經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理部門注冊、在有效期內(nèi)的試劑。使用的試劑和儀器應(yīng)做適用性和性能驗證，相同試劑盒不同批號之間應(yīng)做批號比對。8.2.3所有實驗室內(nèi)開展的丙型肝炎病毒檢測實驗應(yīng)按照SOP及試劑說明書操作，保存原始記錄以保證結(jié)果可溯源。8.2.4每批次項目檢測須同時完成該項目室內(nèi)質(zhì)控品檢測。8.2.5實驗室內(nèi)開展的丙型肝炎病毒檢測實驗所用儀器應(yīng)按照要求定期檢查、檢驗、校準(zhǔn)、保養(yǎng)、維護(hù)并予以記錄。結(jié)果用于臨床報告的儀器應(yīng)是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊的儀器。8.2.6同批次檢測中，試劑盒內(nèi)對照結(jié)果成立、室內(nèi)質(zhì)控品結(jié)果在控時，可出具檢測報告。9實驗室職業(yè)暴露預(yù)防和處置發(fā)生職業(yè)暴露后應(yīng)盡快對暴露部分進(jìn)行清洗消毒，對暴露風(fēng)險進(jìn)行檢測和評估，建立丙肝職業(yè)暴露情況的登記報告，并對暴露人做好保密工作。具體規(guī)范參見DB32/T4578.3。6［1］GB/T38576—2020人類血液樣本采集與處理［2］WS/T213丙型肝炎診斷［3］WS