DB22T 1589-2012 高粱品種鑒定 DNA 指紋法(SSR)　　

備案號(hào)：35077-2012DB22DB22/T1589—2012高粱品種鑒定DNA指紋法（SSR）Identificationofsorghum(Sorghumbicolor(L.)Moench)varietiesusingDNAfingerprintingmethod(SSR)吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I1GB/T3543.2農(nóng)作物種子檢2）：5.1.25親和硅烷（bindingsil3至每種核苷三磷酸終濃度為10mmol40.25g過(guò)硫酸銨溶于1mL超純水中，混勻。5引物在DNA分析儀上使用時(shí)，須在正向引物5′端加應(yīng)按本標(biāo)準(zhǔn)方法，確定其大小和對(duì)應(yīng)參照品種。參照品種的名9.1.1樣品材料可為種子、幼苗、植株幼嫩葉片等組織或器官。對(duì)d)通風(fēng)櫥下加入700μL的氯仿:異戊醇（24:1），輕輕倒轉(zhuǎn)搖動(dòng)5min～10min；），輕混勻。-20℃冰箱靜置一段時(shí)間后，至DNA凝集，室溫下鉤出DNA；6ng～40ng，其余以超純水補(bǔ)足至所需體積。如果PCR過(guò)程中不采用熱蓋程序，則反應(yīng)液上加蓋15μL礦），到下部，在上部輕輕插入梳子，使其凝聚至少1h以上。灌膠過(guò)程中防止出現(xiàn)氣泡。拔出梳子。80W恒功率預(yù)電泳30min～40min。7用移液器吹吸加樣槽，清除殘膠和氣泡，插入樣品梳子，每一個(gè)加c)染色：在新配染色液中，輕輕搖蕩20min；使用DNA分析儀的片段分析軟件，讀出每個(gè)位點(diǎn)每個(gè)樣品的等位變異片段大小數(shù)據(jù)。通過(guò)使用參照品種，消除同型號(hào)不同批次間或不同型號(hào)DNA分析儀間可能存在的系統(tǒng)誤差。比較參照品種的等位將每個(gè)核心引物位點(diǎn)的所有譜帶按擴(kuò)增片段從小到大的順序編號(hào)，用二位代碼描述（依次為01、02……），對(duì)照參照品種的譜帶確定待測(cè)樣品的基因型。純合位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為X/X，其中X為該位點(diǎn)譜帶的代碼；雜合位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為X/Y，其中X、Y為該位點(diǎn)上兩個(gè)不同的譜帶。8純合位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為X/X，其中X為該位點(diǎn)等位變異的大?。浑s合位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)215bp，則該品種在該引物位點(diǎn)上的等位變異數(shù)據(jù)記測(cè)品種在這些引物位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)，利用這對(duì)待測(cè)品種進(jìn)行檢測(cè)后利用其檢測(cè)數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)庫(kù)中品種的數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)時(shí)，先用附錄A.1中20對(duì)基對(duì)品種間差異位點(diǎn)數(shù)=0、1的情況，將這些相近品種或疑同品種與待測(cè)品種按照11.1.2的方法進(jìn)行9123456789123456789GAAATTACAATGCTACCCCTACTCTACTCCTTCCGTCCAGCAAGCGAGCTGACTTATGTACAAAGTGCTACTAAACCTATGCA引物相關(guān)信息1323324257677585