中藥制劑分析

中藥制劑分析制劑通則檢驗普通雜質檢驗特殊雜質檢驗微生物程度檢驗中藥制劑分析2/41§1中藥制劑雜質檢驗雜質:指能危害人體健康或影響藥品質量物質。雜質分類普通雜質（如酸、堿、水分、氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽）特殊雜質雜質起源中藥材原料中帶入生產(chǎn)制備過程中引入貯存過程中引發(fā)中藥制劑本身理化性質改變中藥制劑分析3/41§1中藥制劑雜質檢驗雜質限量檢驗雜質限量:指藥品中所含雜質最大允許量，通慣用%或ppm來表示。雜質限量檢驗及計算方法取一定量與被檢雜質相同純物質或其它對照品配制成標準溶液，與一定量供試藥品溶液，在相同處理條件下，比較反應結果，從而確定雜質限量是否超出要求。注射用雙黃連（凍干）中砷鹽限量檢驗

取本品0.4g，加2%硝酸鎂乙醇溶液3ml，點燃，燃盡后，先用小火熾灼使炭化，再在500～600℃熾灼使完全灰化，放冷，加鹽酸5ml與水21ml使溶解，依法檢驗（中國藥典版附錄ⅨF）。假如標準砷溶液（1μgAs/ml）取用量為2ml，雜質限量計算以下：中藥制劑分析4/41§1中藥制劑雜質檢驗雜質限量檢驗不用標準溶液,直接在供試品溶液中加入試劑進行檢驗。肉桂油中重金屬檢驗取肉桂油10ml,加水10ml與鹽酸1滴,振搖后,通硫化氫氣使飽和,水層與油層均不得變色。中藥制劑分析5/41

§2普通雜質檢驗方法重金屬檢驗法重金屬:在試驗條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色金屬雜質。重金屬檢驗法基本原理CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2S↑Pb2++H2S→PbS↓+2H+pH3.5中藥制劑分析6/41

§2普通雜質檢驗方法重金屬檢驗法檢驗方法方法適用范圍檢查方法第一法適適用于供試品不經(jīng)有機破壞，在酸性溶液中顯色重金屬限量檢驗。甲管：標準鉛溶液（1μg/ml）+醋酸鹽緩沖液（pH3.5）

2ml+水或各藥品項下要求溶劑稀釋成25ml；乙管：供試品溶液25ml；甲管硫代乙酰胺試液各2ml→搖勻→放置2分鐘→同置白紙上,自上向下透視→乙管中顯出顏色不得比甲管更深。乙管第二法適適用于供試品需灼燒破壞，取熾灼殘渣項下遺留殘渣，經(jīng)處理后在酸性溶液中顯色重金屬限量檢驗。取熾灼殘渣項下遺留殘渣→加硝酸0.5ml→蒸干至氧化氮蒸氣除盡→放冷→加鹽酸2ml→置水浴上蒸干→加水15ml→滴加氨試液至對酚酞指示液顯中性→加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml→微熱溶解→移置納氏比色管中→加水稀釋成25ml；另取配制供試品溶液試劑→置瓷皿中蒸干→加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml→水15ml→微熱溶解→移置納氏比色管中→加標準鉛溶液一定量→用水稀釋成25ml；以上兩管溶液，照上述第一法檢驗。中藥制劑分析7/41

§2普通雜質檢驗方法重金屬檢驗法檢驗方法方法適用范圍檢查方法第三法適適用于檢驗能溶于堿而不溶于稀酸（或在稀酸中即生成沉淀）藥品中重金屬。甲管：標準鉛溶液適量+氫氧化鈉試液5ml+水

20ml+硫化鈉試液5滴，搖勻；乙管：供試品適量+加氫氧化鈉試液5ml+水20ml

溶解→置納氏比色管中+加硫化鈉試液5滴，搖勻；兩管比較，乙管顏色不得比甲管深。第四法適適用于有色溶液或重金屬限量低品種。用微孔濾膜過濾，使重金屬硫化物沉淀富集成色斑后與一定量標準鉛溶液取得色斑進行比較檢驗。中藥制劑分析8/41

§2普通雜質檢驗方法重金屬檢驗法注意事項方法靈敏度適合用于含鉛量在10μg-30μg之間。標準鉛液用量以20μg（相當于標準鉛溶液2ml）為宜。反應條件硫代乙酰胺試液與重金屬反應最正確pH值是3.5,硫代乙酰胺試液加入量以2ml時呈色最深,最正確顯色時間為2分鐘。有色供試液處理供試品在加硫代乙酰胺試液以前如帶色,可用稀焦糖液或加慣用指示劑調整標準溶液,使二者顏色一致。其它離子干擾Fe3+---加抗壞血酸。當使用鹽酸超出1.0ml、氨試液超出2ml,以及用硫酸或硝酸進行有機破壞,或加入其它試劑進行處理者,對照溶液應取一樣量試液蒸干后,依法檢驗。鐵鹽供試品,可利用Fe3+在比重為1.103-1.105鹽酸（鹽酸9ml與蒸餾水6ml混合液）中成為HFeC162-,可用乙醚提取而除去,再將酸性溶液加氨試液使呈堿性后,用氰化鉀作為微量鐵鹽掩蔽劑,再加硫化鈉試液測定。中藥制劑分析9/41

§2普通雜質檢驗方法重金屬檢驗法注意事項前處理1需將藥品灼燒破壞,使有機物分子中重金屬游離。灼燒時熾灼溫度必須控制在500～600℃。2……,3……其它標準鉛溶液應在臨用前精密量取標準鉛貯備液新鮮稀釋配制硫化鈉試液應采取分析純硫化鈉配制,貯存在棕色瓶中可保留1～2個月。含有Pb2+中性或弱酸性溶液,如需過濾,可加入對酚酞呈微堿性飽和醋酸銨溶液,溫熱后用直徑較小定量濾紙濾過,或者選取玻砂漏斗過濾。如供試品本身能生成不溶性硫化物時,影響重金屬檢驗,可加入適當掩蔽劑。確保色斑上色調均勻性。中藥制劑分析10/41§2普通雜質檢驗方法砷鹽檢驗:藥品中微量砷（以As計算）限量檢驗古蔡氏法基本原理①AsO33-+3Zn+9H+→AsH3↑+3Zn2++3H2O②AsH3+2HgBr2→2HBr+AsH(HgBr)2(黃色)（溴化汞試紙）AsH3+3HgBr2→3HBr+As(HgBr)3(棕色)※As(V)反應慢，須將As(V)還原成As(III)初生態(tài)氫中藥制劑分析11/41中藥制劑分析12/41§2普通雜質檢驗方法砷鹽檢驗:古蔡氏法AsO43-+2I-+2H+→AsO33-+I2+H2OAsO43-+Sn2++2H+→AsO33-+Sn4++H2OI2+Sn2+→2I-+Sn4+4I-+Zn2+→[ZnI4]2-Sn2++Zn→Sn+Zn2+促進反應向右進行形成鋅錫齊,有利于反應平穩(wěn)進行中藥制劑分析13/41§2普通雜質檢驗方法砷鹽檢驗:古蔡氏法

古蔡氏法檢驗砷裝置A:100ml標準磨口錐形瓶B:中空標準磨口塞C:導氣管(外徑8.0mm,內徑6.0mm),全長約180mmD/E:具孔（孔徑6.0mm）有機玻璃旋塞HgBr2試紙醋酸鉛棉60mg(裝管高度6-8cm)中藥制劑分析14/41§2普通雜質檢驗方法砷鹽檢驗:古蔡氏法

標準砷斑制備①A瓶:標準砷溶液(1μg/ml)2ml+鹽酸5ml+水21ml+KI試液5ml+酸性SnCl2試液5滴，室溫10min②A瓶＋鋅粒2g，接導氣管C③25℃-40℃水浴45min檢驗法中藥制劑分析15/41§2普通雜質檢驗方法砷鹽檢驗古蔡氏法注意事項方法靈敏度約為0.75μg(以As計)。2ml標準砷溶液（相當于2μgAs）所形成砷斑色度適中,清楚,便于識別。酸度及各種試液用量反應液酸度相當于2mol/L鹽酸液。含KI濃度為2.5%,SnCl2濃度為0.3%,加入鋅粒以2g為宜。反應溫度和時間:25～40℃,時間為45分鐘。鋅粒選用2mm左右粒徑(能經(jīng)過一號篩)為宜。汞試紙選擇選取質量很好,組織疏松中速定量濾紙；溴化汞試紙普通宜新鮮制備。采取醋酸鉛棉花吸收除去H2S。版藥典要求稱取60mg醋酸鉛棉花,裝管高度約80mm。

中藥制劑分析16/41§2普通雜質檢驗方法砷鹽檢驗:古蔡氏法注意事項中藥制劑前處理:慣用酸破壞法、堿破壞法及直接炭化法等使有機砷游離出來，以氫氧化鈣破壞法較為慣用。干擾物質:如硝酸、磷、銻化合物或硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽、碘、氯、汞、銀、鎳、鈷、銅、鐵、鉍等干擾。其它A所用儀器、試液等影響B(tài)同一套儀器應能區(qū)分出標準砷溶液1.5ml與2.0ml所呈砷斑深淺。C標準砷溶液應于試驗當日配制，標準砷貯備液存放時間普通不宜超出一年。D砷斑不穩(wěn)定，反應應保持干燥及避光，并馬上比較。E配制成酸性氯化亞錫試液3個月后不宜使用。

中藥制劑分析17/41§2普通雜質檢驗方法砷鹽檢驗:二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC法）基本原理※既可做限量檢驗，又可做含量測定。紅色膠態(tài)銀中藥制劑分析18/41§2普通雜質檢驗方法砷鹽檢驗:二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC法）檢驗方法Ag-DDC5ml目視檢測分光光度計,λ=510中藥制劑分析19/41§2普通雜質檢驗方法砷鹽檢驗:二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC法）注意事項吡啶(DL=0.5μgAs/30ml)有機堿液選擇三乙胺(0.75-7.5μg范圍內,A∝C)溫度和時間:25～40℃水浴，45min中藥制劑分析20/41§2普通雜質檢驗方法鐵鹽檢驗法硫氰酸鹽法(CP)原理

Fe3++6SCN-

→[Fe(SCN)6]3-檢驗方法供試品標準鐵溶液方法靈敏度

20-50μgFe3+/50ml

H++H20至25ml,+稀HCl4ml,+(NH4)2S2O850mg,+H20至35ml,+30%NH4SCN3ml,+H20至50ml中藥制劑分析21/41§2普通雜質檢驗方法鐵鹽檢驗法巰基醋酸法（EP）

2Fe3++2HS·CH2COOH→2Fe2++HOOCCH2-S-S-CH2COOH+2H+Fe2++2HS·CH2COOH→Fe(S·CH2COOH)2+2H+Fe(S·CH2COOH)2+2OH-

→[Fe(S·CH2COO)2]2-+2H2O

中藥制劑分析22/41§2普通雜質檢驗方法有害元素測定中藥制劑分析23/41§2普通雜質檢驗方法干燥失重:藥品在要求條件下，經(jīng)干燥后所減失重量，包含水分及其它揮發(fā)性成份。檢驗方法常壓恒溫干燥（烘干法）--受熱較穩(wěn)定中藥制劑恒重:連續(xù)2次干燥后重量差異不超出0.3mg干燥劑干燥–受熱易分解或揮發(fā)供試品硅膠，五氧化二磷，硫酸等干燥劑減壓干燥—熔點低、受熱不穩(wěn)定及較難趕除水分供試品熱分析法中藥制劑分析24/41§2普通雜質檢驗方法水分測定法烘干法—不含或含少許揮發(fā)性成份供試品甲苯法--含揮發(fā)性成份供試品減壓干燥--含揮發(fā)性成份珍貴藥品干燥劑:P2O5氣相色譜法--散劑、顆粒劑、丸劑、片劑等各類型中藥制劑中微量水分測定費休法甲苯法裝置中藥制劑分析25/41§2普通雜質檢驗方法熾灼殘渣檢驗法

(硫酸灰分,EP)

700℃－800℃+硫酸

※取樣量由熾灼殘渣限量決定,普通1~2g※遲緩灼燒※將殘渣留作重金屬檢驗時,500℃－600℃灰分測定總灰分500℃－600℃

灰燼

+鹽酸溶解

過濾濾渣灼燒

(+10%NH4NO3)酸不溶性灰分有機物→炭化,分解非揮發(fā)性無機雜質→硫酸鹽中藥制劑分析26/41§3特殊雜質檢驗方法特殊雜質:指在該藥品生產(chǎn)和貯存過程中，依據(jù)其起源、生產(chǎn)工藝及藥品性質有可能引入雜質。中藥制劑分析27/41§3特殊雜質檢驗方法大黃流浸膏中土大黃苷檢驗取本品適量,加甲醇2ml,溫浸10分鐘,放冷,取上清液10μl,點于濾紙上,以45%乙醇展開,取出,晾干,放置10分鐘,置紫外燈（365nm）下檢視,不得顯持久亮紫色熒光。大黃素土大黃苷中藥制劑分析28/41§3特殊雜質檢驗方法中藥制劑分析29/41§4農(nóng)藥殘留量檢驗慣用農(nóng)藥有機氯類:艾氏劑、六六六、氯丹、DDT、狄氏劑等有機磷類:三硫磷、氯硫磷、蠅毒磷、內吸磷、敵敵畏、樂果等苯氧羧酸類除草劑:2，4-D；2，4，5-T氨基甲酸酯類:西維因（甲萘威）二硫代氨基甲酸酯類:福美鐵、代森錳、代森鈉、福美雙等無機農(nóng)藥:磷化鋁、砷酸鈣、砷酸鉛植物性農(nóng)藥:煙葉和尼古丁；除蟲菊花提取物和除蟲菊酯（合成除蟲菊酯）；毒魚藤根和魚藤根其它:溴螨酯、氯化苦、二溴乙烷、環(huán)氧乙烷、溴甲烷。中藥制劑分析30/41§4農(nóng)藥殘留量檢驗農(nóng)藥殘留量測定供試品制備殘留農(nóng)藥提取提取溶劑:乙腈、丙酮提取方法:索氏提取法和振蕩提取法樣品純化—液-液分配+柱層析分離檢測方法—色譜分離法中藥制劑分析31/41§4農(nóng)藥殘留量檢驗農(nóng)藥殘留量測定

檢測方法薄層色譜法氣相色譜法和液相色譜法

吸附劑展開劑顯色劑有機氯農(nóng)藥

硅膠G、氧化鋁、硅膠GF254己烷、庚烷等硝酸銀顯色劑、芳胺類顯色劑、熒光顯色劑有機磷農(nóng)藥

硅膠G、氧化鋁、硅藻土、纖維素粉、聚酰胺丙酮、氯仿、乙腈、環(huán)己烷等剛果紅、4-（對硝基芐基）吡啶（NBP）、四溴苯酚磺酞乙酯-硝酸銀-檸檬酸、硝酸銀-溴酚藍以及薄層-酶抑制法中藥制劑分析32/41§4農(nóng)藥殘留量檢驗農(nóng)藥殘留量測定有機氯農(nóng)藥殘留量檢驗色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗——彈性石英毛細管柱SE-54(或DB-1701)、電子捕捉檢測器，進樣口溫度:230℃，檢測器溫度:300℃，不分流進樣，程序升溫對照品貯備液——六六六（BHC）[α-，β-，γ-，δ-BHC]，滴滴涕（DDT）[PP’-DDE，-DDD，-DDT，OP’-DDT]及五氯硝基苯（PCNB）+石油醚（60-90℃）分別制成每1ml約含4-5μg溶液混合對照品貯備液制備——對照品貯備液0.5ml→10ml混合對照品溶液制備——取混合對照品貯備液制成每1L含0μg、1μg、5μg、10μg、50μg、100μg、500μg濃度系列。中藥制劑分析33/41§4農(nóng)藥殘留量檢驗農(nóng)藥殘留量測定有機氯農(nóng)藥殘留量檢驗供試品溶液制備——供試品研細,稱取適量（相當于藥材2g）,置100ml具塞錐形瓶中,+水20ml浸泡過夜,+丙酮40ml,稱定,超聲處理30min,放冷,用丙酮補足減失重量,+氯化鈉約6g及二氯甲烷30ml,稱定,超聲處理15min,用二氯甲烷補足減失重量,靜置使分層,將有機相快速移入裝有適量無水硫酸鈉100ml具塞錐形瓶中,放置4小時。精密量取35ml,于40℃水浴減壓濃縮至近干,加少許石油醚（60～90℃）如前重復操作至二氯甲烷及丙酮除凈,用石油醚（60-90℃）溶解并轉移至10ml具塞刻度離心管中,加石油醚（60～90℃）至5ml。+硫酸1ml,振搖1分鐘,離心（3000轉/分）10分鐘。精密量取上清液2ml置具刻度濃縮瓶（見圖3-5）中,連接旋轉蒸發(fā)器,40℃下（或用氮氣）將溶液濃縮至適量,精密稀釋至1ml,即得。測定中藥制劑分析34/41§4農(nóng)藥殘留量檢驗農(nóng)藥殘留量測定有機磷農(nóng)藥殘留量檢驗色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗——彈性石英毛細管柱DB-17MS(或HP-5)、氮磷檢測器，進樣口溫度:230℃，檢測器溫度:300℃，不分流進樣，程序升溫對照品貯備液——對硫磷、甲基對硫磷、樂果、氧化樂果、甲胺磷、久效磷、二嗪農(nóng)、乙硫磷、馬拉硫磷、殺撲磷、敵敵畏、乙酰甲胺磷，+用乙酸乙酯，制成每1ml約含100μg溶液混合對照品貯備液制備——對照品貯備液1ml→20ml混合對照品溶液制備——取混合對照品貯備液制成每1ml含0.1μg、0.5μg、1μg、2μg、5μg濃度系列。中藥制劑分析35/41§4農(nóng)藥殘留量檢驗農(nóng)藥殘留量測定有機磷農(nóng)藥殘留量檢驗供試品溶液制備——供試品研細,稱取適量（相當于藥材5g）,+無水硫酸鈉5g,+乙酸乙酯50-100ml,冰浴超聲處理3min,放置,取上層液濾過,藥渣加乙酸乙酯30-50ml,冰浴超聲處理3min,放置,濾過,合并濾液,40℃減壓濃縮至干,+乙酸乙酯5ml,使溶解。精密量取1ml,加到活性炭小柱（120-400目,0.25g）,置多功效真空樣品處理器