微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 課件 33-4綜合技能訓(xùn)練：糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)

綜合技能實(shí)訓(xùn)四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)學(xué)習(xí)目標(biāo)1．掌握糞便標(biāo)本的正確采集、運(yùn)送和微生物檢驗(yàn)程序。2．熟悉消化道感染的常見(jiàn)致病菌。3．了解糞便標(biāo)本中常見(jiàn)致病菌的臨床意義。4．具有正確采集糞便標(biāo)本和進(jìn)行糞便培養(yǎng)操作的能力。5．能正確選擇試驗(yàn)項(xiàng)目對(duì)糞便培養(yǎng)標(biāo)本進(jìn)行微生物檢驗(yàn)，能正確判斷和分析試驗(yàn)結(jié)果并發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告。綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)思維導(dǎo)圖綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)一、糞便標(biāo)本常見(jiàn)病原菌綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)1、球菌革蘭陽(yáng)性：金黃色葡萄球菌、厭氧鏈球菌、腸球菌革蘭陰性：無(wú)

綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、桿菌革蘭陽(yáng)性：結(jié)核分枝桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、艱難芽胞梭菌、蠟樣芽胞桿菌革蘭陰性：沙門(mén)菌、志賀菌、致病性大腸埃希菌、霍亂弧菌、副溶血弧菌、小腸結(jié)腸炎耶爾森菌、彎曲菌、類(lèi)志賀假單胞

綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)3、真菌白色念珠菌

綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)二、檢驗(yàn)方法與程序綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)糞便標(biāo)本的檢驗(yàn)操作程序見(jiàn)下圖糞便或肛拭子分離培養(yǎng)增菌培養(yǎng)麥康凱或中國(guó)藍(lán)/伊紅亞甲藍(lán)瓊脂平板SS瓊脂平板亞硒酸鹽增菌培養(yǎng)基（適用于沙門(mén)菌屬）GN增菌培養(yǎng)基（適用于志賀菌屬）SS及麥康凱瓊脂平板分離雙糖或三糖鐵培養(yǎng)基血清學(xué)試驗(yàn)生化試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)報(bào)告結(jié)果綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)1、糞便標(biāo)本的采集1）自然排便法2）直腸拭子法

綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、糞便標(biāo)本的運(yùn)送糞便標(biāo)本應(yīng)立即送檢，室溫保存不能超過(guò)2h，如不能立即送檢，放入轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基中運(yùn)送和保存，但不能超過(guò)24h；疑似霍亂弧菌感染標(biāo)本，應(yīng)用堿性蛋白胨水運(yùn)送保存；疑似艱難芽胞梭菌感染標(biāo)本，應(yīng)放入?yún)捬踹\(yùn)送系統(tǒng)中送檢。綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)三、培養(yǎng)及鑒定綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)1、涂片檢查霍亂弧菌檢查：霍亂患者糞便通常呈米泔樣，取新鮮標(biāo)本涂片進(jìn)行革蘭染色，顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)革蘭陰性桿菌，較小呈直桿狀、弧形、香蕉狀、逗點(diǎn)狀或魚(yú)群狀排列，可做出初步報(bào)告“找到革蘭陰性弧形桿菌，疑似霍亂弧菌”。綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)1、涂片檢查假絲酵母菌檢查：在載玻片上加1滴生理鹽水與標(biāo)本混合，加蓋玻片后直接顯微鏡觀察或者革蘭染色后鏡檢，革蘭染色發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性卵圓形芽生孢子及假菌絲，可報(bào)告“找到假絲酵母菌”。艱難梭菌檢查：取疑似抗生素假膜性腸炎患者的糞便涂片，若發(fā)現(xiàn)革蘭陽(yáng)性粗大桿菌，無(wú)莢膜，大多形成卵圓形芽胞，位于菌體次極端者，可報(bào)告“找到革蘭陽(yáng)性芽胞桿菌，疑似艱難梭菌”。綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)1、涂片檢查彎曲菌檢查：取患者新鮮糞便涂片，干燥固定后革蘭染色鏡檢，若見(jiàn)細(xì)小、長(zhǎng)而彎的革蘭陰性弧形、S形或螺旋形成海鷗狀的細(xì)菌，可報(bào)告“找到彎曲菌”。糞便中優(yōu)勢(shì)菌檢查：取糞便標(biāo)本直接涂片，革蘭染色后鏡檢，根據(jù)細(xì)菌染色性、形態(tài)、排列及各自在涂片中所見(jiàn)到的相對(duì)比例等，推定主要優(yōu)勢(shì)菌并及時(shí)報(bào)告結(jié)果。綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、分離培養(yǎng)與鑒定沙門(mén)菌及志賀菌培養(yǎng)：取膿血、黏液樣糞便或直腸拭子接種SS瓊脂平板或XLD瓊脂平板，35℃培養(yǎng)18～24h后觀察生長(zhǎng)現(xiàn)象，取可疑菌落做推斷性生化試驗(yàn)，初步生化反應(yīng)符合兩屬細(xì)菌生物學(xué)特性，繼續(xù)用診斷血清作血清學(xué)試驗(yàn)，鑒定出志賀菌及沙門(mén)菌的血清群及型，再挑取菌落制成菌懸液，作藥敏試驗(yàn)。如生化試驗(yàn)符合沙門(mén)菌或志賀菌，但與二者的診斷血清不發(fā)生凝集現(xiàn)象，可將待檢菌液隔水煮沸1h以破壞K抗原和Vi抗原，再作凝集試驗(yàn)。綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、分離培養(yǎng)與鑒定致腹瀉性大腸埃希菌培養(yǎng)：引起腹瀉的大腸埃希菌主要有5種類(lèi)型，即腸產(chǎn)毒性大腸埃希菌（ETEC）、腸侵襲性大腸埃希菌（EIEC）、腸致病性大腸埃希菌（EPEC）、腸出血性大腸埃希菌（EHEC）和腸集聚性大腸埃希菌（EAggEC）。取膿血、水樣或糊狀糞便接種于血平板及麥康凱（或EMB、中國(guó)藍(lán)）瓊脂平板，35℃培養(yǎng)18～24h后觀察菌落，挑取可疑菌落先按照一般大腸埃希菌作生化反應(yīng)鑒定，再通過(guò)毒力試驗(yàn)或與大腸埃希菌多價(jià)血清作玻片凝集試驗(yàn)進(jìn)行鑒定，同時(shí)作藥敏試驗(yàn)。

綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、分離培養(yǎng)與鑒定霍亂弧菌培養(yǎng)：取米泔水樣標(biāo)本，接種于堿性蛋白胨水中增菌培養(yǎng)，6h后取表面菌膜或直接取糞便標(biāo)本，接種于堿性瓊脂平板、慶大霉素瓊脂平板或硫代硫酸鈉枸櫞酸鈉膽鹽蔗糖（TCBS）瓊脂平板，35℃培養(yǎng)18～24h后觀察菌落，挑取可疑菌落通過(guò)形態(tài)學(xué)檢查、動(dòng)力及制動(dòng)試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)等進(jìn)行鑒定。

綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、分離培養(yǎng)與鑒定副溶血性弧菌培養(yǎng)：取黏凍狀、血性或水樣糞便，以及可疑食物等接種于堿性蛋白胨水中增菌培養(yǎng)，35℃培養(yǎng)6～8h后移種于TCBS平板上。35℃培養(yǎng)18～24h后觀察菌落，取可疑菌落作生化試驗(yàn)、無(wú)鹽及高鹽試驗(yàn)等進(jìn)行鑒定。綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、分離培養(yǎng)與鑒定金黃色葡萄球菌培養(yǎng)：取綠色、海水樣或糊狀糞便接種于高鹽甘露醇瓊脂平板、Baird-Parker瓊脂平板或血平板上，35℃培養(yǎng)18～24h后觀察菌落，挑取金黃色β溶血菌落通過(guò)革蘭染色、凝固酶、耐熱DNA酶及甘露醇發(fā)酵等試驗(yàn)進(jìn)行鑒定，同時(shí)作藥敏試驗(yàn)。

綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、分離培養(yǎng)與鑒定小腸結(jié)腸耶爾森菌培養(yǎng)：將標(biāo)本接種于麥康凱瓊脂平板上，置于25℃培養(yǎng)24～48h后，呈乳糖不發(fā)酵菌落，較小、扁平、無(wú)色、稍隆起、透明或半透明，取此菌落作生化反應(yīng)鑒定。綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、分離培養(yǎng)與鑒定空腸彎曲菌培養(yǎng)：取液狀或帶血糞便標(biāo)本接種于彎曲菌選擇培養(yǎng)基，或先接種于改良亞硒鹽磺綠肉湯（SBG肉湯）增菌液，經(jīng)42℃微需氧培養(yǎng)48h后，再接種于彎曲菌選擇培養(yǎng)基中。在42℃微需氧條件下培養(yǎng)48h后觀察生長(zhǎng)現(xiàn)象，取略帶紅色、有光澤、半透明的可疑菌落作懸滴或壓滴觀察動(dòng)力，可見(jiàn)呈擺動(dòng)的投標(biāo)樣動(dòng)力，再結(jié)合生化試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行鑒定。綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、分離培養(yǎng)與鑒定艱難梭菌培養(yǎng)：取新鮮排出的水樣糞便，立即接種于環(huán)絲氨酸頭孢西丁果糖瓊脂（CCFA）平板、艱難梭菌選擇性培養(yǎng)基（CDIF）上，35℃厭氧培養(yǎng)48h后，選擇可疑菌落移種庖肉培養(yǎng)基制備毒素測(cè)定，同時(shí)涂片、革蘭染色并進(jìn)行其他生化鑒定。綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、分離培養(yǎng)與鑒定真菌培養(yǎng)：真菌性腹瀉多繼發(fā)于長(zhǎng)期抗生素治療后，主要由白念珠菌引起。將標(biāo)本接種于含氯霉素的沙氏瓊脂和血瓊脂平板上，分別置于25～30℃和35℃環(huán)境中培養(yǎng)24～48h，根據(jù)菌落特點(diǎn)、染色結(jié)果、芽管形成試驗(yàn)及厚膜孢子形成試驗(yàn)等進(jìn)行鑒定。綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)2、分離培養(yǎng)與鑒定氣/鄰單胞菌的培養(yǎng)：取糞便標(biāo)本接種于血瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板上，35℃培養(yǎng)18～24h后，挑取灰色、光滑、不透明的菌落進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)和葡萄糖O/F試驗(yàn)，以及其它生化鑒定。

綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)四、結(jié)果報(bào)告綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)糞便標(biāo)本的微生物學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告，應(yīng)以分離目的菌種的結(jié)果而決定。涂片鏡查時(shí)，應(yīng)根據(jù)不同的檢驗(yàn)?zāi)康倪x用不同的檢查方法，發(fā)現(xiàn)典型陽(yáng)性結(jié)果，應(yīng)立即向臨床醫(yī)生發(fā)出初步報(bào)告。一旦分離培養(yǎng)出致病菌，應(yīng)馬上進(jìn)行細(xì)菌鑒定和抗菌藥物敏感試驗(yàn)，最后報(bào)告“檢出×菌”，并報(bào)告藥敏試驗(yàn)結(jié)果。如檢出沙門(mén)菌或志賀菌，應(yīng)根據(jù)血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告“檢出××沙門(mén)菌”或“檢出××志賀菌××群”；檢出霍亂弧菌應(yīng)立即向當(dāng)?shù)丶膊☆A(yù)防控制中心報(bào)告。綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)糞便標(biāo)本的微生物學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告，應(yīng)以分離目的菌種的結(jié)果而決定。陰性結(jié)果應(yīng)根據(jù)分離目的菌的結(jié)果而定。如SS和中國(guó)藍(lán)瓊脂平板分離糞便中的致病菌，應(yīng)報(bào)告“未檢出沙門(mén)菌屬、志賀菌屬及致病性大腸埃希菌”；CCFA瓊脂平板分離艱難芽胞梭菌，則報(bào)告“未檢出艱難芽胞梭菌”。

綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)五、臨床意義綜合技能訓(xùn)練四糞便標(biāo)本微生物檢驗(yàn)?zāi)芤鹉c道感染的常見(jiàn)致病菌有沙門(mén)菌、志賀菌、霍亂弧菌及致病性大腸埃希菌等，臨床常表現(xiàn)為腹瀉、嘔吐、高熱等癥狀。傷寒沙門(mén)菌能引起傷寒，志賀菌可引起細(xì)菌性痢疾，霍亂弧菌能引起霍亂等，當(dāng)培養(yǎng)出上述細(xì)菌時(shí)需及時(shí)報(bào)告臨床科室以及當(dāng)?shù)丶部刂行模綦x患者以免播散。多種細(xì)菌本身或其代謝產(chǎn)物可引起食物中毒，?？晌＜吧?，常見(jiàn)于沙門(mén)菌、副溶血弧菌、致病性大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、肉毒梭菌、蠟樣芽胞桿菌食物中毒，多發(fā)生于夏秋季，以