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文檔簡介
實驗六、微生物的分離與純化
自然界中各種微生物混合生活在一起,即使取得很少量的樣品也是許多微生物共存的群體。人們要研究某種微生物的特征,首先須使該微生物處于純培養(yǎng)狀態(tài)。微生物的平板分離技術(shù)為人類獲得豐富的微生物資源以及在工、農(nóng)、醫(yī)、環(huán)境、動植物細胞培養(yǎng)等方面做出了巨大貢獻。一、實驗?zāi)康模?、掌握倒平板的方法2、掌握常用微生物分離純化技術(shù)3、學習平板菌落計數(shù)的基本方法
二、實驗原理采用適宜(選擇)培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件,或加入某種抑制劑有利于目標微生物的生長,從而分離獲得目標微生物的純培養(yǎng):常用稀釋平板分離法和劃線分離法分離細菌用牛肉膏培養(yǎng)基,分離放線菌用高氏培養(yǎng)基,分離真菌用馬丁氏-孟加拉紅培養(yǎng)基。依據(jù)一個單細胞在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)后可以長成一菌落,從而推算樣品中含有多少細菌、放線菌以及真菌的活菌數(shù)目土壤是微生物生存的大本營,種類和數(shù)量及其豐富三、實驗步驟:從土壤中稀釋分離微生物的方法如下:(一)土壤懸液的制備準備1瓶土壤懸液:稱0.5克土壤放入4.5ml無菌水中,手搖振蕩(5-10min),使土樣分散。(二)倒固體瓊脂培養(yǎng)基平板:取一瓶牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基熔化后,待冷至55-60℃時,倒平板。(三-1)稀釋平板分離法1、懸液稀釋:(本實驗取0.5g放入4.5ml無菌水中稀釋)2、懸液涂布(演示):無菌操作(從稀至濃將菌液涂布均勻)采用10-6,10-7,10-8稀釋液各0.1ml涂布牛肉膏蛋白胨平板平板涂布(三-2)劃線分離法——平皿劃線(演示)每人用1個牛肉膏蛋白胨平板做劃線分離,從上次實驗室環(huán)境生長的單菌種挑取劃線分離平皿劃線分離法結(jié)果分析:1.計數(shù):(牛肉膏平板取單菌落數(shù)目在30~300個左右的稀釋度來計數(shù))我所計數(shù)的平板稀釋度是:
單菌落數(shù)目:
、
。2.計算:活菌數(shù)目/每克土壤=
(計算過程)=
菌落形成單位(CFU)/每克土壤[每克土壤中菌落形成單位數(shù)=同一稀釋度2次重復的平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)×10]3.對你和同伴的細菌計數(shù)結(jié)果進行分析思考題1.你所做的涂布平板和劃線平板是否較好的得到了單菌落,如果不是,請分析原因;2.怎樣判斷稀釋涂布平板記數(shù)數(shù)據(jù)是否可靠?需要掌握哪幾個關(guān)鍵?3.平板菌落記數(shù)法中,為什么熔化后的培養(yǎng)基要冷卻至
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