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34TechnicalregulationfornestedPCRdetectionmethodforporcinecircovirustypI本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定蕭縣畜牧獸醫(yī)水產(chǎn)服務(wù)中心、岳西縣畜牧獸醫(yī)水產(chǎn)服務(wù)中心、望江縣畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣1《病死及病害動物無害化處理技術(shù)規(guī)范》(農(nóng)醫(yī)發(fā)(2017)25號)豬圓環(huán)病毒3型porcinecircovirustype3,PCV34.2臺式高速冷凍離心機：可控溫至4℃,離心力12000g以上25.2DNA提取純化試劑盒：商品化試劑。5.40.5×TBE緩沖液：稱取108gTris、7.44g枸櫞酸鈉、55g硼酸，溶于1000mL水中，配5.51%瓊脂糖：稱取1g瓊脂糖，溶于100mL0.5×TBE緩沖液中。5.6磷酸鹽緩沖液(PBS):稱取8gNaCl、0.2gKC1、1.44gNa?HPO?和0.24gKH?PO4,溶于800保存于室溫或4℃冰箱中。引物名稱引物序列擴增基因第1輪擴增上游引物(F1)5'-CCACATGCGAGGGCGTTTAC-3”第1輪擴增下游引物(R1)第2輪擴增上游引物(F2)53-CTTTGGTGCCGTAGAAGTCTG-3’第2輪擴增下游引物(R2)5'-CGCCTAAACGAATGGGAAAC-3”3取樣品約1g放入1.5mL離心管中，用手術(shù)剪剪碎，加入1mLPB9樣品DNA提取第1輪擴增第2輪擴增881倍稀釋)1總體積總體積4第1輪、第2輪PCR反應(yīng)條件均為：95℃預(yù)變性5min后，35個循環(huán)擴增(95℃變性30s、58℃將第2輪PCR擴增產(chǎn)物于1%瓊脂糖凝膠(在凝膠中加入DNA核酸染料)進行電泳，電壓100V,時間30min～40min。2%的84消毒液浸泡30min后，放置于危險廢棄物容器內(nèi)暫存，委托有資質(zhì)的固體廢棄物無害56A.7加入20μL滅菌一級水溶解沉淀，即用或-7(資料性)豬圓環(huán)病毒3型PCR產(chǎn)物電泳圖標(biāo)引序號說明：M——DN
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