第八章儀器分析法多圖

第八章儀器分析法多圖藥物分析教研室

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2目標(biāo):1、掌握紫外可見分光光度法、氣相色譜法與高效液相色譜法得原理、方法及在藥物含量測(cè)定中得應(yīng)用。2、了解熒光分析法、原子吸收分光光度法在藥品含量測(cè)定中得應(yīng)用。3、掌握常用儀器分析法得含量計(jì)算。4、熟悉常用儀器得基本結(jié)構(gòu)及使用方法。藥物分析教研室

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3第二節(jié)光譜分析法一、紫外-可見分光光度法基本原理:分子光譜,電子躍遷

λmax

λmin

λsh

①摩爾吸收系數(shù)ε②百分吸收系數(shù))

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4儀器:光源、單色器、吸收池、檢測(cè)器及測(cè)量系統(tǒng)。儀器校正:1、波長(zhǎng)準(zhǔn)確度校正2、吸光度準(zhǔn)確度校正對(duì)溶劑得要求:藥物分析教研室

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5測(cè)定方法:(一)對(duì)照品比較法分別配制供試品溶液與對(duì)照品溶液,對(duì)照品溶液應(yīng)為供試品溶液得100％±10％,溶劑一致,測(cè)定吸光度、藥物分析教研室

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6實(shí)例:貝諾酯得含量測(cè)定精密稱取貝諾酯0、07495g,用無水乙醇定量配成100ml溶液,再定量稀釋100倍后,照分光光度法在240nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度為0、473。另取經(jīng)105℃干燥2小時(shí)得貝諾酯對(duì)照品0、03667g,用無水乙醇定量配成100ml溶液,再定量稀釋50倍后,同法測(cè)定吸光度為0、462,求貝諾酯得百分含量。藥物分析教研室

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8(二)吸收系數(shù)法配制供試品溶液,在規(guī)定得波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度,按吸收系數(shù)計(jì)算含量。注意儀器得校正與檢定。

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9實(shí)例:卡比馬唑得含量測(cè)定精密稱取本品0、05012g,配成500ml溶液,再定量稀釋10倍后,照分光光度法在292nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度為0、555。按C7H10N2O2S得百分吸收系數(shù)為557,求卡比馬唑得百分含量。

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11制劑得含量計(jì)算

對(duì)照品比較法片劑:注射劑:大家有疑問的，可以詢問和交流可以互相討論下，但要小聲點(diǎn)藥物分析教研室

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13實(shí)例:硫酸阿托品注射液(規(guī)格:5mg/1ml)含量測(cè)定

精密量取本品0、5ml(約相當(dāng)于硫酸阿托品2、5mg),置50ml量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液,另取硫酸阿托品對(duì)照品25、47mg,精密稱定,置25ml量瓶中,加水溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取5ml,置100ml量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,作為對(duì)照品溶液。精密量取對(duì)照品溶液與供試品溶液各2ml,分別置預(yù)先精密加入三氯甲烷10ml得分液漏斗中,各加溴甲酚綠溶液2、0ml,振搖提取2分鐘后,靜置使分層,分取澄清得三氯甲烷液,照紫外-可見分光光度法,在420nm得波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度,對(duì)照與供試品得吸光度為0、450與0、432,依法計(jì)算(分子量694、8)得標(biāo)示百分含量。

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15制劑得含量計(jì)算

吸收系數(shù)法片劑:注射劑:藥物分析教研室

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16實(shí)例:鹽酸氯丙嗪片得含量測(cè)定

取標(biāo)示量為25mg得鹽酸氯丙嗪片20片,除去糖衣后精密稱定,總重量為2、4215g,研細(xì),精密稱量片粉0、2290g,置500ml量瓶中,加鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻,濾過,精密量取續(xù)濾液5ml,置100ml量瓶中,加同一溶劑稀釋至刻度,搖勻,在254nm波長(zhǎng)處測(cè)得吸光度為0、440,按為915計(jì)算,求其含量占標(biāo)示量得百分率？藥物分析教研室

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18注意事項(xiàng)取吸收池時(shí),手指拿毛玻璃面得兩側(cè)。含量測(cè)定至少配制2份,平均值得偏差應(yīng)在±0、5%以內(nèi)藥物分析教研室

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19二、原子吸收分光光度法基本原理

由待測(cè)元素?zé)舭l(fā)出得特征譜線通過供試品蒸氣時(shí),被蒸氣中待測(cè)元素得基態(tài)原子所吸收。通過測(cè)定輻射光強(qiáng)度減弱得程度可求出供試品中待測(cè)元素得含量。

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20原子吸收分光光度計(jì)光源:心陰極燈,銳線光源原子化系統(tǒng):火焰原子化與無火焰原子化。分光系統(tǒng):衍射光柵檢測(cè)系統(tǒng):檢測(cè)器、放大器、對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換器與顯示裝置藥物分析教研室

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21測(cè)定方法1、標(biāo)準(zhǔn)曲線法藥物分析教研室

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222、標(biāo)準(zhǔn)加入法藥物分析教研室

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23三、熒光分析法基本原理:

某些物質(zhì)(分子結(jié)構(gòu)常常具有長(zhǎng)共軛結(jié)構(gòu)、剛性與共平面性)受紫外光或可見光照射激發(fā)后,它會(huì)在極短得時(shí)間內(nèi)發(fā)射出較照射光波長(zhǎng)為長(zhǎng)得光,這種光稱為熒光。光致發(fā)光激發(fā)光譜與發(fā)射光譜藥物分析教研室

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24熒光分析儀

1、光源:現(xiàn)在大多數(shù)儀器采用高壓氙燈

2、單色器:由光柵與狹縫組成。3、樣品池:常用石英池,質(zhì)地應(yīng)較純藥物分析教研室

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25測(cè)定方法選定激發(fā)光波長(zhǎng)與發(fā)射光波長(zhǎng),并配制對(duì)照品溶液與供試品溶液,測(cè)定跑光強(qiáng)度。藥物分析教研室

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26第三節(jié)色譜分析法色譜得種類:按流動(dòng)相所處得物理狀態(tài)分類,可以將色譜法分為氣相色譜(GC)、液相色譜(LC)與超臨界流體色譜(SFC)。氣相色譜又可以分為氣-固、氣-液色譜,液相色譜可分為液-固與液-液色譜。

氣相色譜法就是一種很重要得,以氣體為流動(dòng)相,以液體或固體為固定相得色譜方法分離效能、靈敏度、選擇性、分析速度硅膠柱上加上中藥提取物洗脫得效果色譜法原理:一、吸附混合物中各組分在性質(zhì)與結(jié)構(gòu)上得差異,與固定相之間產(chǎn)生得作用力得大小、強(qiáng)弱不同。色譜法原理一、吸附當(dāng)流動(dòng)相流過時(shí),各組分以不同得速度隨流動(dòng)相流出色譜柱。色譜法原理:二、分配混合成分在固定相與流動(dòng)相之間分配色譜法原理:三、分子篩因混合物中各種分子體積大小不一樣而分離色譜法分類常用色譜法的種類薄層色譜法常壓柱色譜法氣相色譜法高效液相色譜法從粗顆粒到細(xì)顆粒色譜所用硅膠顆粒變細(xì)之后分離效能大為提高,同時(shí)阻力也增大。各種加壓泵為提高分離效果,出現(xiàn)了從中壓到高壓得各種加壓泵從玻璃柱到不銹鋼柱二、高效液相色譜法highperformanceliquidchromatographHPLCHPLC基本組成示意圖HPLC主要由色譜柱、加壓泵與檢測(cè)器組成色譜柱色譜柱就是液相分離得核心部件輸液泵輸液泵分單元等度泵與多元梯度泵檢測(cè)器對(duì)沒有紫外吸收得物質(zhì)得檢測(cè),以蒸發(fā)光散射檢測(cè)器用得較多檢測(cè)器種類很多,現(xiàn)在最常用得就是紫外檢測(cè)器進(jìn)樣器—手動(dòng)進(jìn)樣器Rheodyne7725i幾乎成了所有液相色譜儀得手動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣器—手動(dòng)進(jìn)樣器—六通閥進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣器可由軟件完全控制Waters717Agilent色譜工作站色譜工作站就就是HPLC得軟件控制系統(tǒng)外企得在數(shù)萬元左右,國(guó)產(chǎn)得幾千元。色譜工作站工作站得兩大功能1、控制儀器2、處理數(shù)據(jù)液相色譜儀器常見種類

highperformanceliquidchromatograph液相色譜儀(2)液相色譜儀(3)安捷倫Agilent1100液相色譜儀(4)液相色譜儀(5)上海伍豐科學(xué)儀器有限公司液相色譜儀(6)戴安公司Ultimate3000高效液相色譜法在藥典中得使用

1985年版1990年版1995年版2000年版2005年版數(shù)量8561212791327比例%0、53、25、110、441、3高效液相圖譜各成分依次流出色譜柱,從進(jìn)樣到出峰得時(shí)間稱為保留時(shí)間三、定性方法定性:確定成分歸屬,依據(jù)與對(duì)照品相比較時(shí),相同得保留時(shí)間定量方法外標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法定量方法——外標(biāo)法定量方法——內(nèi)標(biāo)法對(duì)照品供試品內(nèi)標(biāo)物內(nèi)標(biāo)法供試液(樣品+內(nèi)標(biāo))內(nèi)標(biāo)物對(duì)照液(對(duì)照+內(nèi)標(biāo))是樣品中不存在的物質(zhì)與被測(cè)組分峰靠近能與各組分完全分離與被測(cè)組分的量接近校正因子:例內(nèi)標(biāo)液取正三十二烷加正己烷溶解并稀釋成1.0mg/ml溶液對(duì)照液精密稱取VitE對(duì)照品0.2011g置棕色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)液10ml，密塞，振搖使溶解，取1~3ul注入GC儀，測(cè)定，計(jì)算供試液精密稱取供試品0.1998g置棕色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)液10ml，密塞，振搖使溶解，取1~3ul注入GC儀，測(cè)定，計(jì)算維生素E含量測(cè)定對(duì)照液供試液HPLC操作注意事項(xiàng)流動(dòng)相嚴(yán)格過濾(0、45μm微孔濾膜),不要相信任何商家宣傳得流動(dòng)相已過濾得保證。樣品嚴(yán)格過濾。流動(dòng)相需經(jīng)脫氣處理。藥物分析教研室

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67基本原理:色譜分離體系包括兩個(gè)相,其中得一相固定不動(dòng),稱為固定相;另一相就是攜帶試樣混合物流過此固定相得氣體或液體,稱為流動(dòng)相。當(dāng)兩相作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí),反復(fù)多次地利用混合物中所有組分性質(zhì)得差異使彼此得到分離。兩相及兩相得相對(duì)運(yùn)動(dòng)構(gòu)成了色譜法得基礎(chǔ)。

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68氣相色譜系統(tǒng):主要由分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)與溫度控制系統(tǒng)藥物分析教研室

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69系統(tǒng)適用性試驗(yàn)藥物分析教研室

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701、基線與色譜峰

無試樣通過檢測(cè)器時(shí),檢測(cè)到得信號(hào)即為基線。2、保留值

(1)時(shí)間表示得保留值

保留時(shí)間(tR):組分從進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)濃度極大值時(shí)所需得時(shí)間

死時(shí)間(tM):不與固定相作用得氣體(如空氣)得保留時(shí)間。

調(diào)整保留時(shí)間(tR

＇):tR＇=tR－tM

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71用來衡量色譜峰寬度得參數(shù),有三種表示方法:(1)標(biāo)準(zhǔn)偏差(

):

即0、607倍峰高處色譜峰寬度得一半。(2)半峰寬(Y1/2):

色譜峰高一半處得寬度Y1/2=2、354

(3)峰底寬(Wb):

Wb=4

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72塔板理論-柱分離效能指標(biāo)色譜柱長(zhǎng):L,虛擬得塔板間距離:H,色譜柱得理論塔板數(shù):n,則三者得關(guān)系為:

n=L/H理論塔板數(shù)與色譜參數(shù)之間得關(guān)系為:藥物分析教研室

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73分離度得表達(dá)式:R=0、8:兩峰得分離程度可達(dá)89%;R=1、0:分離程度98%;R=1、5:達(dá)99、7%(相鄰兩峰完全分離得標(biāo)準(zhǔn))。藥物分析教研室

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74測(cè)定方法內(nèi)標(biāo)法加校正因子法(R:對(duì)照品S:內(nèi)標(biāo)X:待測(cè)樣品)

校正因子:含量計(jì)算:

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