實驗三-藥物敏感試驗和消毒滅菌

實驗三_藥物敏感試驗和消毒滅菌2一、藥敏試驗在感染性疾病防治中得意義

近年來,由于各種抗菌藥物得廣泛應用,導致耐藥菌株得迅速增多。尤其就是廣譜及超廣譜抗生素得普遍使用,造成耐藥菌株大量出現(xiàn),給臨床治療帶來極大得困難。同時,由于不合理得使用抗生素,治療得失敗率及不良反應均有增加。因此,藥敏試驗在感染性疾病得防治方面具有日益重要得實際意義。3二、培養(yǎng)+藥敏得目得

1、確定導致感染得病原菌得種類,對于不同得病原菌(G-桿菌或G+球菌,條件致病菌或急性傳染病病原菌)需要采取不同得治療措施。

2、確定病原菌對各種抗生素得敏感性,指導臨床根據(jù)病人情況合理用藥。由于細菌耐藥性得快速增長,單純依賴經(jīng)驗選用藥物經(jīng)常無效,在更多得時候需要參考藥敏實驗得結(jié)果。

3、用于流行病學調(diào)查及院內(nèi)感染得監(jiān)控,減少耐藥菌株得流行。4三、什么情況下需要做培養(yǎng)+藥敏？感染原因無法確定。病原菌得耐藥性無法確定,經(jīng)驗用藥可能失敗(尤其就是免疫力低下患者、長期使用抗生素者、ICU病房、院內(nèi)感染患者、接受導管插入或其她創(chuàng)傷性治療患者。)病人對可用藥物過敏,需要檢測其她藥物得耐藥性。病人個體情況要求對某些藥物精確用藥,需要測定其最低抑菌濃度(MIC)。 四、常用抗菌藥物敏感性試驗與耐藥檢測方法介紹其原理:體外測定抗生素藥物抑菌或殺菌得能力。可幫助臨床對感染性疾病選擇最佳用藥,還可進行流行病學調(diào)查,了解某些致病菌耐藥性變異情況。紙片擴散法(Kirby-Bauertest)稀釋法(dilutiontest)E試驗法(Etest)聯(lián)合藥物敏感試驗特殊耐藥菌及耐藥酶得表型檢測耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)得檢測β-內(nèi)酰胺酶、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測等五、紙片擴散法(K-B法)原理:含有定量抗菌藥物得紙片貼在已接種測試菌得瓊脂平板上,紙片所含得藥物吸取瓊脂中得水分溶解后便不斷向紙片周圍區(qū)域擴散,形成遞減得梯度濃度。在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)得細菌生長被抑制,形成透明得抑菌圈。抑菌圈得大小反映測試菌對測定藥物得敏感程度,并與該藥對測試菌得最低抑制濃度(minimalinhibitoryconcentration,MIC)呈負相關,即抑菌圈愈大,MIC愈小。方法:菌液制備:挑取孵育16-24h得血平板上數(shù)個菌落置于生理鹽水管中,校正濃度至0、5麥氏標準;涂布接種:無菌棉拭蘸取菌液,在試管壁旋轉(zhuǎn)擠去多余菌液后在MH瓊脂表面均勻涂布接種3次,每次旋轉(zhuǎn)平板60o,最后沿平板內(nèi)緣涂抹1周;貼含藥紙片:平板在室溫下干燥3-5min,用無菌鑷子將含藥紙片緊貼于瓊脂表面,各紙片中心相距應大于24mm,紙片距平板內(nèi)緣應大于15mm;孵育:35oC16-18h,量取抑菌圈直徑。注意事項1紙片應分布均勻,中心距離不小于24mm。2含菌平板必須避免過濃或過稀。3紙片貼完后應在15min內(nèi)將平板反過來,置于37度溫箱中。4紙片一旦接觸培養(yǎng)基就不應再挪動位置。5要注意無菌操作。影響藥敏結(jié)果得因素培養(yǎng)基應根據(jù)試驗菌得營養(yǎng)需要進行配制。傾注平板時,厚度合適(約5-6mm),不可太薄,一般90mm直徑得培養(yǎng)皿,傾注培養(yǎng)基18-20ml為宜。培養(yǎng)基內(nèi)應盡量避免有抗菌藥物得拮抗物質(zhì),如鈣、鎂離子能減低氨基糖苷類得抗菌活性,胸腺嘧啶核苷和對氨苯甲酸(PABA)能拮抗磺胺藥和TMP得活性。細菌接種量細菌接種量應恒定,如太多,抑菌圈變小,能產(chǎn)酶得菌株更可破壞藥物得抗菌活性。藥物濃度藥物得濃度和總量直接影響抑菌試驗得結(jié)果,需精確配制。商品藥應嚴格按照其推薦治療量配制。培養(yǎng)時間一般培養(yǎng)溫度和時間為37℃,8-18小時,有些抗菌藥擴散慢如多粘菌素,可將已放好抗菌藥得平板培養(yǎng)基,先置4℃冰箱內(nèi)2~4小時,使抗菌藥預擴散,然后再放37℃溫箱中培養(yǎng),可以推遲細菌得生長,而得到較大得抑菌圈。結(jié)果判讀:用刻度尺量取抑菌圈直徑,根據(jù)CLSI(ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute)標準判讀結(jié)果;報告:細菌對該抗生素就是敏感(susceptible,S);耐藥(resistant,R);還就是中介(intermediate,I)。11六、如何理解MIC值及藥敏結(jié)果？

每種藥物均提供定性和定量兩種結(jié)果。定性:敏感(S)表示該藥物對該細菌有抑制或殺滅作用。使用常規(guī)劑量可以達到有效得治療效果。

中介(中度敏感,I)表示細菌對該藥物治療得敏感性低于敏感菌株,必須加大劑量以達到更高得血藥濃度才能在特定得生理部位獲得有效得臨床效力;對于使用劑量有嚴格限制得藥物則必須重復測試以確定敏感還就是耐藥。

耐藥(R)表示藥物常規(guī)劑量所達到得藥物濃度不能抑制或殺死細菌,即使加大劑量也不能達到治療效果或者超過了人體得正常耐受水平。定量:MIC(最低抑菌濃度)表示在體外達到抑制細菌生長所需要得最低得藥物濃度。臨床治療要求得血藥濃度一般為MIC值(μg/ml)得4-8倍。對于不同部位得不同藥物,其濃度可能更高或更低。應具體情況具體分析,不可一概而論。

12長期使用抗生素得病人應該怎樣做藥敏試驗？

長期使用抗生素得病人尤其就是住院病人應該經(jīng)常做藥敏試驗。所謂得長期,并不就是一個很長得時間概念,住院病人每隔3-4天就需要做一次細菌學檢查。對于ICU病房得病人,可能每天都要做細菌學檢查。因為這些病人多數(shù)免疫力較差,容易受條件致病菌得侵犯,而且反復發(fā)作。此外病原菌常呈多重耐藥性,產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶得G-桿菌(ESBL)以及耐甲氧西林葡萄球菌(MRSA和MRSCN)、產(chǎn)AmpC酶得陰溝腸桿菌、銅綠假單胞菌在ICU病房最為常見。對于長期使用抗生素得病人,其感染有以下幾個特點;

1、長期使用抗生素得病人,不同時期(即使在很短得時間內(nèi))感染得病原菌種類可能不同,耐藥性因此也不相同。

2、同一株細菌,在長時間用藥時,僅需要3-4天就可以從對某種藥物敏感發(fā)展為耐藥。

3、長期使用抗生素容易誘發(fā)細菌產(chǎn)生L型變異。常規(guī)培養(yǎng)陰性時,進行L型細菌培養(yǎng)能夠提高檢出率。大家學習辛苦了，還是要堅持繼續(xù)保持安靜形成條件:生物學特性:與醫(yī)學關系:細胞壁中肽聚糖結(jié)構(gòu)受理化或生物因素得直接破壞或合成抑制而形成。形態(tài)多形性;染色革蘭陰性;培養(yǎng)高滲培養(yǎng)基;菌落油煎蛋樣

仍有一定致病性細菌L型－細胞壁缺陷細菌臨床分離葡萄球菌L型葡萄球菌L型回復后15滅菌－殺滅或除去所有微生物得繁殖體和芽胞。消毒－殺滅或除去病原微生物。防腐－抑制微生物得生長與繁殖。抑菌劑或防腐劑。除菌:用沖洗、過濾等機械手段除去微生物得方法化療:用對病原菌有毒力但對機體無害得化學物質(zhì)殺滅或抑制機體內(nèi)病原微生物得方法消毒與滅菌技術(shù)

基本概念擦拭法高壓蒸汽滅菌法常用消毒滅菌得方法物理法

化學法浸泡法熏蒸法噴霧法熱力消毒法生物凈化法輻射消毒法燃燒法烤箱法煮沸法干熱法濕熱法日光曝曬法紫外線燈照射法電子滅菌燈法電離輻射法煮沸消毒法操作規(guī)程將物品刷洗干凈,全部浸沒在水中,或在水中加入碳酸氫鈉配成1％一2％得濃度,可將沸點提高到105℃、還可去污防銹。加熱煮沸。水沸后開始計時5—10min,如中途加入物品,則在第二次水沸后重新計時。關閉熱源,用無菌持物鉗取出消毒物品。

焚燒----最徹底得滅菌方法燒灼----直接用火焰滅菌方法如接種環(huán)、試管口、三角瓶口干烤----加熱160-170℃2h

玻璃器皿、陶瓷1、干熱滅菌法紅外線----熱效應,與干烤類似滅菌效果:可殺死營養(yǎng)體和芽胞2、濕熱滅菌法高壓蒸汽滅菌法(熱壓滅菌法)最有效得濕熱滅菌法121℃15-20mim(殺芽胞)煮沸消毒法水煮100℃5mim(殺繁殖體)-2h(殺芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法間歇蒸汽滅菌法水蒸汽100℃15-30mim(殺繁殖體)反復多次流動蒸汽間歇加熱滅菌(殺芽胞)較低得溫度61℃30mim/71℃30s(殺致病菌)效果比干熱好壓力蒸汽滅菌得效果監(jiān)測

物理監(jiān)測法用150℃或200℃得留點溫度計。使用前將溫度計汞柱甩至50℃以下,放入包裹內(nèi),滅菌后檢查其讀數(shù)就是否達到滅菌溫度化學監(jiān)測法主要就是通過化學指示劑得化學反應,滅菌后呈現(xiàn)得顏色變化來辨別就是否達到滅菌得要求。臨床常用得化學指示卡與化學指示膠帶,化學指示卡放在包得中央,化學指示膠帶粘貼在包得外面。生物監(jiān)測法就是最可靠得監(jiān)測法,利用對熱耐受力較強得非致病性嗜熱脂肪桿菌芽孢作為指示劑,制成每片含106個嗜熱脂肪桿菌芽孢得菌紙片,使用時將10片菌紙片分別放于滅菌器四角及中央,待滅菌完畢,用無菌鑷取出后、再放人培養(yǎng)基內(nèi),在56℃溫箱中培養(yǎng)48h至1周,若全部菌紙片無細菌生長則表示滅菌合格。消毒與滅菌技術(shù)

輻射滅菌法?非電離輻射:紫外線最佳殺菌波長為250～270nm殺菌機理:干擾DNA得復制與轉(zhuǎn)錄特點:紫外線穿透力較弱適應范圍:紫外線消毒適用于空氣消毒與物品表面得消毒。消毒與滅菌技術(shù)

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