調(diào)脂積沖劑對(duì)脂肪肝大鼠主動(dòng)脈脂質(zhì)影響

1/1調(diào)脂積沖劑對(duì)脂肪肝大鼠主動(dòng)脈脂質(zhì)影響1調(diào)脂積沖劑對(duì)脂肪肝大鼠主動(dòng)脈脂質(zhì)影響摘要目的：

觀察調(diào)脂積沖劑對(duì)非酒精性脂肪肝模型大鼠肝組織及主動(dòng)脈脂質(zhì)的影響。

方法：

以高脂乳劑建立雄性SD大鼠脂肪肝模型，同時(shí)用調(diào)脂積沖劑和易善復(fù)膠囊分組進(jìn)行治療，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行肝組織、主動(dòng)脈勻漿甘油三酯（TG）、膽固醇（TC）的檢測，運(yùn)用光學(xué)顯微鏡檢測HE染色的主動(dòng)脈壁橫切面、肝組織的病理改變。

結(jié)果：

調(diào)脂積沖劑能減少非酒精性脂肪肝大鼠主動(dòng)脈的脂質(zhì)沉積。

結(jié)論：

調(diào)脂積沖劑具有降低肝組織、主動(dòng)脈脂質(zhì)沉積的作用，提示不僅對(duì)脂肪肝有防治作用，也對(duì)防治血管粥樣硬化具有一定作用。

關(guān)鍵詞脂肪肝調(diào)脂積沖劑主動(dòng)脈脂質(zhì)大鼠實(shí)驗(yàn)研究隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展，人們飲食及生活方式的改變，脂肪肝、動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病的發(fā)病率日益增高。

據(jù)報(bào)道［1］，4009名上海市機(jī)關(guān)職員脂肪肝、眼底動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病的檢出率分別為12.9%、10.9%、1.6%，相關(guān)分析表明前者與后兩者之間關(guān)系密切。

脂肪肝不僅與肝臟本身病變及功能有關(guān)，而且與心腦血管疾病具有共同的危險(xiǎn)因素，并有交互作用，互為因果。

調(diào)脂積沖劑由莪術(shù)、郁金、萊菔子、半夏、生山楂、川樸、枳殼、澤瀉、白蔻仁、虎杖、過路黃等藥物2組成，具有祛瘀化濁、消導(dǎo)行滯、疏理解郁的功效。

本研究探討調(diào)脂積沖劑對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠肝組織及主動(dòng)脈脂質(zhì)的影響。

1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：

健康SD雄性大鼠40只，清潔級(jí)，體重20020g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供；大鼠飼養(yǎng)于18~22℃、明暗各12h的清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室。

1.2主要藥品和試劑：

調(diào)脂積沖劑由浙江省中醫(yī)院中藥房提供；易善復(fù)膠囊由北京賽諾菲安萬特產(chǎn)品生產(chǎn)；脂肪乳劑組成：

膽固醇由上海思吉生物制品有限公司生產(chǎn)；熟豬油由杭州世紀(jì)聯(lián)華連鎖超市煉制；吐溫-80由浙江溫州清明化工有限公司生產(chǎn)；丙二醇由如皋市金陵試劑廠生產(chǎn)；膽鹽由杭州微生物試劑有限公司生產(chǎn)；丙硫氧嘧啶片由南通精華制藥股份有限公司生產(chǎn)；空腹胰島素（FINS）測定試劑盒由北京北方生物技術(shù)研究所生產(chǎn)。

1.3分組和處理方法：

SD雄性大鼠40只，確定正常對(duì)照組10只，其余30只采用高脂乳劑建立脂肪肝模型［2］，乳劑成分：

每100ml脂肪乳中含10g膽固醇，25g豬油，2g膽酸，1g丙基硫氧嘧啶，20ml丙二醇，25ml吐溫-80。

確定大鼠調(diào)脂積沖劑的用藥量為1.5ml/100g體重，臨用前將調(diào)脂積顆粒稀釋為0.3g/ml溶液；易善復(fù)的用藥量為lml/100g體重，臨用前將易善復(fù)膠囊溶于蒸餾水中，超聲波乳化，配3成0.009g/ml的溶液，4℃冷藏備用。

每天上午給模型組、調(diào)脂積治療組、易善復(fù)治療組以15ml/kg體重脂肪乳灌胃，空白對(duì)照組灌服等量蒸餾水。

每天下午按1.5ml/100g體重給調(diào)脂積組灌服調(diào)脂積溶液，按lml/100g體重給易善復(fù)治療組灌服易善復(fù)溶液。

模型組和空白對(duì)照組按lml/100g體重灌服生理鹽水，連續(xù)8周。

并于第8周末次給藥后禁食。

第8周末，除去中期檢驗(yàn)性死亡大鼠每組各2只，各組大鼠于末次給藥后禁食12小時(shí)，次日上午稱大鼠體重后，以10?Symbole@@水合氯醛1ml/kg體重麻醉，解剖取肝組織以及從腎動(dòng)脈的開口處到升主動(dòng)脈段的主動(dòng)脈。

肉眼觀察其體積、包膜緊張度、顏色、切面色澤等外觀情況；沿肝門最大橫切面取左葉右葉各一片置于4%甲醛中固定，逐級(jí)乙醇脫水，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡觀察；另取新鮮肝組織0.1g加提取液(為氯仿與甲醇1∶1體積配合)2.0ml，在低溫下研成勻漿，再補(bǔ)加提取液3.0ml，混勻；經(jīng)24h抽提，不斷振搖，最后3000r/min離心5min，提取上清液，送檢膽固醇（TG）、膽固醇（TC）［3］。

取出從腎動(dòng)脈的開口處到升主動(dòng)脈段的主動(dòng)脈，預(yù)冷生理鹽水沖洗，均勻分成兩段。

肉眼觀察血管內(nèi)壁光滑度、脂質(zhì)條紋等。

取一段主動(dòng)脈，用4%多聚甲醛固定,逐級(jí)乙醇脫水,石蠟包埋,4主動(dòng)脈縱軸方向切片,HE常規(guī)染色；光鏡下觀察泡沫細(xì)胞和膽固醇結(jié)晶、各層細(xì)胞脂質(zhì)浸潤、管腔內(nèi)管壁厚薄、是否有粥樣和纖維樣的斑塊等；稱量另一段主動(dòng)脈，加入預(yù)冷的生理鹽水，用勻漿機(jī)在冰水中制成10%的肝勻漿，4℃離心，3500r/min，10min，提取上清液，全自動(dòng)生化分析儀上測定主動(dòng)脈TG、TC。

1.4肉眼觀察：

肉眼觀察肝組織的體積、包膜緊張度、顏色、切面色澤等外觀情況及主動(dòng)脈血管內(nèi)壁光滑度、脂質(zhì)條紋等。

1.5光鏡標(biāo)本：

沿肝門最大橫切面取左葉右葉各一片置于4%甲醛中固定，逐級(jí)乙醇脫水，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡觀察；取一段主動(dòng)脈，用4%多聚甲醛固定,逐級(jí)乙醇脫水,石蠟包埋,主動(dòng)脈縱軸方向切片,HE常規(guī)染色；光鏡下觀察泡沫細(xì)胞和膽固醇結(jié)晶、各層細(xì)胞脂質(zhì)浸潤、管腔內(nèi)管壁厚薄、是否有粥樣和纖維樣的斑塊等。

1.6勻漿脂質(zhì)檢測：

取新鮮肝組織0.1g加提取液(為氯仿與甲醇1∶1體積配合)2.0ml，在低溫下研成勻漿，再補(bǔ)加提取液3.0ml，混勻；經(jīng)24h抽提，不斷振搖，最后3000r/min離心5min，提取上清液，送檢TC、TG［3］。

稱量一段主動(dòng)脈，加入預(yù)冷的生理鹽水，用勻漿機(jī)在冰水中制成10%的肝勻漿，4℃離心，3500r/min，10min，提取上清液，全自動(dòng)生化分析儀上測定主動(dòng)脈TG、TG。

51.7統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：

數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS17.0軟件處理，所得結(jié)果均用xs表示,組間差異采用方差分析。

2結(jié)果2.1調(diào)脂積沖劑對(duì)高脂飼料喂養(yǎng)大鼠的影響：

高脂飼料喂養(yǎng)大鼠4周時(shí)正常對(duì)照組、模型組各取2只大鼠眼眶取血測TC、TG，模型組略高于空白組。

6周時(shí)，每組各取2只大鼠麻醉解剖，取肝組織、主動(dòng)脈進(jìn)行中期檢驗(yàn)，高脂乳劑干預(yù)各組肝組織較正常對(duì)照組明顯增大、切面有油膩感，主動(dòng)脈部分可見白色小突起物。

提示造模成功后，于8周時(shí)麻醉解剖，模型組大鼠肝重、肝指數(shù)均高于正常組大鼠，調(diào)脂積沖劑干預(yù)組大鼠肝重、肝指數(shù)均明顯低于脂肪肝模型組(P0.01)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

見表1。

2.2肉眼觀察：

正常對(duì)照組大鼠腹腔中，脂肪組織無增生，肝臟體積大小均正常，肝臟顏色呈暗紅色；脂肪肝模型組大鼠腹腔中，脂肪組織豐富，且肝體積明顯增大，包膜緊張，顏色呈磚紅色，切面有油膩感，呈典型脂肪肝外觀；易善復(fù)干預(yù)治療組、調(diào)脂積干預(yù)治療組大鼠腹腔脂肪組織較模型組含量少，肝臟體積較模型組小，顏色呈偏黃色或暗紅色，部分大鼠肝臟切面有油膩感。

正常對(duì)照組大鼠主動(dòng)脈血管內(nèi)壁光滑、無異物；脂肪肝模型組大鼠主動(dòng)脈血管內(nèi)壁欠光滑，可見乳白色小突起物，生理鹽水沖洗后,將主動(dòng)脈對(duì)光觀察,可見乳白色的脂質(zhì)條6紋；易善復(fù)、調(diào)脂積干預(yù)治療組大鼠主動(dòng)脈血管內(nèi)壁欠光滑，部分可見白色小突起物及脂質(zhì)條紋。

2.3光鏡觀察：

正常對(duì)照組大鼠肝組織小葉結(jié)構(gòu)大小一致，肝細(xì)胞索排列整齊，無脂肪變性；模型組的肝組織細(xì)胞腫脹、脂肪變性，細(xì)胞胞漿內(nèi)可見大小不一的脂滴，間質(zhì)中可見炎性浸潤；易善復(fù)組肝組織腫脹，細(xì)胞胞漿內(nèi)可見偶見脂滴，偶有炎性浸潤；調(diào)脂積組肝組織腫脹，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)尚穩(wěn)定，細(xì)胞胞漿內(nèi)偶見較小的脂滴，偶見炎性浸潤。

病理切片經(jīng)光鏡下觀察示，造模各組脂肪變性明顯，炎癥活動(dòng)明顯，無纖維化改變。

與模型組相比，調(diào)脂積組大鼠脂肪變性明顯降低（P0.01），炎癥活動(dòng)減少（P0.05或P0.01）。

見表2。

正常對(duì)照組大鼠見主動(dòng)脈內(nèi)膜光滑、完整，無隆起，中膜平滑肌細(xì)胞排列整齊,未見平滑肌細(xì)胞增生,外膜未見異常；模型組大鼠可見主動(dòng)脈內(nèi)膜輕度增厚,局部隆起,中膜平滑肌細(xì)胞增生,排列不規(guī)整,內(nèi)皮下層及中膜可見空泡變,外膜未見異常；易善復(fù)組內(nèi)膜隆起，局部增厚，排列不規(guī)整，內(nèi)膜及中膜偶可見空泡變；調(diào)脂積組內(nèi)膜隆起，局部增厚，排列不規(guī)整，內(nèi)膜及中膜偶可見空泡變。

病理切片經(jīng)光鏡下觀察示，造模各組內(nèi)膜隆起明顯（P0.01），增厚明顯（P0.01），中膜脂質(zhì)沉積明顯7（P0.01），中膜及內(nèi)膜空泡明顯（P0.01）。

與模型組相比，調(diào)脂積組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)膜隆起程度、增厚程度明顯降低（P0.01），空泡明顯減少（P0.01）。

見表3。

2.4勻漿脂質(zhì)檢測：

肝臟及主動(dòng)脈經(jīng)勻漿后提取上清液測定TC、TG，結(jié)果示：

造模各組肝臟、主動(dòng)脈勻漿TC、TG均明顯高于正常對(duì)照組（P0.01）；與模型組相比，調(diào)脂積治療干預(yù)組主動(dòng)脈TC、TG無明顯差異，肝勻漿TC、TG明顯降低（P0.01）；與易善復(fù)治療干預(yù)組相比，調(diào)脂積組主動(dòng)脈TC較低，但無明顯差異，主動(dòng)脈TG較高，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，肝勻漿TC、TG無明顯差異。

見表4。

3討論脂質(zhì)代謝異常是動(dòng)脈粥樣硬化與脂肪肝肝纖維化共同的發(fā)病機(jī)理之一。

肝篩對(duì)脂質(zhì)代謝具有嚴(yán)格的選擇性，各種損肝因素所致的肝篩結(jié)構(gòu)和功能變化，可引起脂溶性維生素、膽固醇、TG和乳糜微粒異常，進(jìn)而參與肝臟、腎臟和動(dòng)脈血管壁等纖維化的發(fā)生。

脂肪變性的肝臟合成及釋放人血增多的不飽和脂肪酸、脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物和PAI-1等促動(dòng)脈粥樣硬化因子，不但參與脂肪肝本身的進(jìn)展，而且會(huì)加速促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病的發(fā)生［4］。

高TG血癥和脂肪肝是影響早期動(dòng)脈脂質(zhì)斑塊形成的重要因素。

調(diào)脂積沖劑臨床應(yīng)用十幾年，對(duì)高脂血癥、脂肪肝、肝8纖維化等疾病的治療取得了良好的療效。

能明顯改善臨床癥狀，降低血脂、改善脂肪性炎癥、逆轉(zhuǎn)肝纖維化進(jìn)程。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明：

調(diào)脂積沖劑不僅有效降低血脂、肝脂，保護(hù)肝功能，而且可有效阻止肝組織SOD的耗竭和脂質(zhì)過氧化終產(chǎn)物MDA的升高。

說明該藥可通過降脂，清除機(jī)體氧自由基，增強(qiáng)抗氧化能力，減輕抗過氧化損傷，達(dá)到減輕肝脂肪變性，治療脂肪肝的目的。

而脂肪肝與脂代謝紊亂和血糖代謝紊亂密切相關(guān)，脂肪變性的肝臟合成的飽和脂肪酸、脂質(zhì)過氧化物終產(chǎn)物等促動(dòng)脈硬化因子釋放入血，不但參與脂肪肝本身的進(jìn)展，并且會(huì)加速動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病的發(fā)生。

本研究中，大鼠肝組織及主動(dòng)脈病理切片觀察發(fā)現(xiàn)，與模型組相比，調(diào)脂積治療干預(yù)組肝脂肪變性、炎癥活動(dòng)明顯減少，主動(dòng)脈脂質(zhì)沉積減少，肝勻漿TC、TG明顯降低。

充分證實(shí)了調(diào)脂積沖劑減緩動(dòng)脈脂質(zhì)沉積的作用。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，調(diào)脂積沖劑在治療脂肪肝方便具有可靠性和穩(wěn)定性，并且在治療脂肪肝的同時(shí)，也存在減緩主動(dòng)脈脂質(zhì)沉積的作用。

調(diào)脂積沖劑對(duì)大鼠主動(dòng)脈脂質(zhì)的影響，為中藥改善脂質(zhì)代謝異常這一重要的病理生理基礎(chǔ)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

4參考文獻(xiàn)［1］范建高,曾民德,王均溶,等.上海市機(jī)關(guān)職員脂肪肝流行病學(xué)研究［J］.中