Q-370522SXH 032-2016混合型飼料添加劑 微生物和蛋白酶被更新

1/1Q_370522SXH032-2016混合型飼料添加劑微生物和蛋白酶被更新Q/370522SXH山東信合生物制藥有限公司企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)Q/370522SXH0322016混合型飼料添加劑微生物和蛋白酶2016-08-01發(fā)布2016-09-01實施山東信合生物制藥有限公司發(fā)布Q/370522SXH0322016I前言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由山東信合生物制藥有限公司提出并起草。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：

趙慶新、王珊珊。

Q/370522SXH03220161混合型飼料添加劑微生物和蛋白酶1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了混合型飼料添加劑微生物和蛋白酶的術(shù)語和定義、產(chǎn)品分類和代號、要求、抽樣、試驗方法、檢驗規(guī)則、標(biāo)簽、包裝、運輸、貯存和保質(zhì)期。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于以本公司生產(chǎn)或購進(jìn)的飼料添加劑枯草芽孢桿菌、飼料添加劑地衣芽孢桿菌、飼料添加劑糞腸球菌、飼料添加劑釀酒酵母和飼料添加劑蛋白酶加飼料原料黃芪、飼料原料蒙脫石或飼料原料石粉或飼料原料膨潤土或飼料原料淀粉按一定比例混合制成的混合型飼料添加劑微生物和蛋白酶產(chǎn)品。

2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。

凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB4789.3食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗大腸菌群計數(shù)GB4789.5食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗志賀氏菌檢驗GB4789.10食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗金黃色葡萄球菌檢驗GB/T5917.1飼料粉碎粒度測定兩層篩篩分法GB/T6435飼料中水分的測定GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB10648飼料標(biāo)簽GB/T13079飼料中總砷的測定GB/T13080飼料中鉛的測定原子吸收光譜法GB/T13081飼料中汞的測定GB/T13082飼料中鎘的測定方法GB/T13083飼料中氟的測定離子選擇性電極法GB/T13091飼料中沙門氏菌的檢測方法GB/T13092飼料中霉菌總數(shù)的測定GB/T14699.1飼料采樣GB/T17480飼料中黃曲霉毒素B1的測定酶聯(lián)免疫吸附法GB/T28715飼料添加劑酸性、中性蛋白酶活力的測定分光光度法JJF1070定量包裝商品凈含量計量檢驗規(guī)則《中華人民共和國獸藥典》2005年國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局第75號令《定量包裝商品計量監(jiān)督管理辦法》3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

3.1酸性、中性蛋白酶活力單位Q/370522SXH03220162在一定溫度（40℃0.2℃）和相應(yīng)的PH條件下（酸性蛋白酶PH3.0，中性蛋白酶PH7.2），在1min內(nèi)水解酪蛋白產(chǎn)生相當(dāng)于1g酚基氨基酸（由酪氨酸等同物表示）的酶量，為1個酶活單位，以U表示。

3.2雜菌樣品稀釋液在麥康凱培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到的菌視為雜菌。

4產(chǎn)品分類和代號產(chǎn)品分類和代號見表1。

表1產(chǎn)品分類和代號通用名稱商品名稱產(chǎn)品代號適用動物混合型飼料添加劑微生物和蛋白酶健源態(tài)HT215仔豬混合型飼料添加劑微生物和蛋白酶佳肥HT216養(yǎng)殖動物5要求5.1感官指標(biāo)灰白至黃色粉末，無變質(zhì)、結(jié)塊及異味、異嗅。

5.2水分不高于10%5.3粉碎粒度全部通過0.90mm分析篩，0.60mm分析篩篩上物不大于10%。

5.4衛(wèi)生指標(biāo)衛(wèi)生指標(biāo)見表2。

表2混合型飼料添加劑微生物和蛋白酶衛(wèi)生指標(biāo)項目指標(biāo)黃曲霉毒素B1,g/kg10.0砷（以總砷計），mg/kg2.0鉛（以Pb計），mg/kg5.0氟（以F計），mg/kg1000汞（以Hg計）,mg/kg0.1鎘（以Cd計），mg/kg0.5雜菌率，％0.5大腸菌群，個/kg1.0105霉菌總數(shù)，個/kg＜2.0107沙門氏菌（CFU/25克）0Q/370522SXH03220163表2續(xù)混合型飼料添加劑微生物和蛋白酶衛(wèi)生指標(biāo)項目指標(biāo)致病菌（腸道致病菌及致病性球菌）不得檢出5.5技術(shù)指標(biāo)技術(shù)指標(biāo)見表3。

表3混合型飼料添加劑微生物和蛋白酶技術(shù)指標(biāo)產(chǎn)品代號枯草芽孢桿菌,CFU/g地衣芽孢桿菌,CFU/g糞腸球菌,CFU/g釀酒酵母,CFU/g中性蛋白酶活力，U/gHT2152.01071.01075.01071.01071.0103HT2162.01075.01075.01075.01071.01035.6凈含量符合標(biāo)簽標(biāo)注，偏差符合《定量包裝商品計量監(jiān)督管理辦法》的規(guī)定。

6抽樣6.1組批原料不變，同一配方、同一工藝、同一生產(chǎn)日期生產(chǎn)的同種產(chǎn)品為一個批次。

6.2采樣按GB/T14699.1的規(guī)定進(jìn)行樣品采集。

采樣樣品具有代表性，避免采樣時交叉污染。

采樣工具經(jīng)無菌處理，如已滅菌牛皮紙袋或廣口瓶、金屬勺和刀。

7試驗方法7.1感官指標(biāo)將樣品放置在白瓷盤內(nèi)，在非直射日光、光線充足、無異味的環(huán)境中，用眼觀的方法觀察其色澤、是否有霉變、結(jié)塊。

用鼻嗅的方法檢查其氣味。

7.2水分按GB/T6435的規(guī)定執(zhí)行。

7.3粉碎粒度按GB/T5917.1的規(guī)定執(zhí)行。

7.4砷方法一：

按GB/T13079的規(guī)定執(zhí)行（仲裁法）。

方法二：

按《中華人民共和國獸藥典》的規(guī)定執(zhí)行。

Q/370522SXH032201647.5鉛方法一：

按GB/T13080的規(guī)定執(zhí)行（仲裁法）。

方法二：

按《中華人民共和國獸藥典》的規(guī)定執(zhí)行。

7.6汞按GB/T13081的規(guī)定執(zhí)行。

7.7鎘按GB/T13082的規(guī)定執(zhí)行。

7.8氟按GB/T13083的規(guī)定執(zhí)行。

7.9黃曲霉毒素B1按GB/T17480的規(guī)定執(zhí)行。

7.10大腸桿菌按GB4789.3的規(guī)定執(zhí)行。

7.11霉菌總數(shù)按GB/T13092的規(guī)定執(zhí)行。

7.12沙門氏菌按GB/T13091的規(guī)定執(zhí)行。

7.13志賀氏菌按GB4789.5的規(guī)定執(zhí)行。

7.14葡萄球菌按GB4789.10的規(guī)定執(zhí)行。

7.15枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、糞腸球菌、釀酒酵母按附錄A的規(guī)定執(zhí)行。

7.16雜菌率按附錄A的規(guī)定執(zhí)行。

7.17蛋白酶活力按GB/T28715的規(guī)定執(zhí)行。

7.18凈含量按JJF1070的規(guī)定執(zhí)行。

Q/370522SXH032201658檢驗規(guī)則8.1檢驗分類檢驗分為出廠檢驗和型式檢驗。

8.2出廠檢驗8.2.1出廠檢驗項目為感官指標(biāo)、水分、粒度、枯草芽孢桿菌活菌數(shù)、地衣芽孢桿菌活菌數(shù)、糞腸球菌活菌數(shù)、釀酒酵母活菌數(shù)、蛋白酶活力。

8.2.2檢驗由本企業(yè)化驗室進(jìn)行。

8.2.3檢驗合格的，簽發(fā)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗合格證。

8.3型式檢驗8.3.1型式檢驗項目為本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的全部項目。

8.3.2型式檢驗每年至少進(jìn)行一次。

有下列情況之一必須進(jìn)行型式檢驗：

a)主要原料變化及配方有較大改變，可能影響產(chǎn)品性能時；b)工藝變化、設(shè)備改造后；c)停產(chǎn)6個月以上，重新恢復(fù)生產(chǎn)時；d)行業(yè)主管部門提出進(jìn)行型式檢驗要求時；e)主成分指標(biāo)與上次型式檢驗有較大差異時。

8.3.3型式檢驗由本企業(yè)化驗室檢驗或委托檢驗。

8.4判定規(guī)則8.4.1按照本標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定執(zhí)行。

有一項指標(biāo)不符合本規(guī)則要求，再從雙倍量的包裝中抽取樣品進(jìn)行復(fù)檢，復(fù)檢結(jié)果仍有一項指標(biāo)不合格，則判該批產(chǎn)品為不合格品。

衛(wèi)生指標(biāo)中的微生物指標(biāo)不得復(fù)檢，直接判定該批產(chǎn)品為不合格產(chǎn)品。

各項技術(shù)指標(biāo)中的極限數(shù)值采用修約值比較法。

8.4.2若供需雙方對產(chǎn)品質(zhì)量發(fā)生爭議時，可由雙方協(xié)商，或選定法定機(jī)構(gòu)按照本標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定。

9標(biāo)簽符合GB10648的要求。

10包裝、運輸、貯存和保質(zhì)期10.1包裝包裝采用無毒三復(fù)合高密度編織袋包裝，包裝必須符合保質(zhì)、保量、運輸安全和分類、分等儲存的要求，嚴(yán)防污染。

10.2運輸運輸過程防雨、防潮、防止污染，保持包裝的完整性。

10.3貯存存放在通風(fēng)、陰涼、干燥、無污染的地方，避免污染。

Q/370522SXH0322016610.4保質(zhì)期在符合運輸、貯存條件的情況下，自生產(chǎn)之日起，原包裝產(chǎn)品12個月。

Q/370522SXH03220167AA附錄A（規(guī)范性附錄）枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、糞腸球菌、釀酒酵母的計數(shù)和雜菌率的測定A.1原理枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、糞腸球菌、釀酒酵母在指定培養(yǎng)基平板上長出的菌落個數(shù)即為樣品中的菌落數(shù)。

根據(jù)菌落形態(tài)可以分辨出是否為枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、糞腸球菌、釀酒酵母。

A.2試劑與材料除非另有說明，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑和符合GB/T6682規(guī)定的三級水或相當(dāng)純度的水。

按本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法配制培養(yǎng)基或購買商品化的產(chǎn)品。

A.2.1枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌培養(yǎng)基A.2.1.1成分酵母膏5.0g；蛋白胨10.0g；NaCl10.0g；葡萄糖5.0g；瓊脂粉18g；蒸餾水1000mL。

A.2.1.2制法將上述成分加于蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH7.0～7.2，分裝試管或錐形瓶，121℃滅菌15min。

A.2.2糞腸球菌培養(yǎng)基A.2.2.1成分蛋白胨10g；牛肉膏5g；酵母提取物4g；K2HPO42g；檸檬酸三銨2g；乙酸鈉5g；葡萄糖20g；Tween801mL；MgSO47H2O0.2g；MnSO44H2O0.05g；瓊脂20g；蒸餾水1000mL。

A.2.2.2制法將上述成分加于蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH6.2-6.6，分裝試管或錐形瓶，121℃滅菌15min。

A.2.3釀酒酵母菌培養(yǎng)基A.2.3.1成分馬鈴薯200克；葡萄糖20克；瓊脂18克；蒸餾水1000mL。

A.2.3.2制法將馬鈴薯洗凈去皮，稱取200g切成小塊，煮沸20-30分鐘，用四層紗布過濾，再加18g瓊脂，繼續(xù)加熱攪拌混勻，待瓊脂溶解完后，加入葡萄糖，攪拌均勻，稍冷卻后再補(bǔ)足水分至1000毫升，PH自然，分裝試管或錐形瓶，121℃滅菌15min。

倒平板時添加氯霉素或土霉素，加入量為0.2g/L備用。

Q/370522SXH03220168A.2.4麥康凱培養(yǎng)基A.2.4.1成分蛋白胨17g；月示胨3g；豬（牛、羊）膽鹽5g；氯化鈉5g；瓊脂17g；蒸餾水1000mL；乳糖10g；0.01%結(jié)晶紫水溶液10mL；0.5%中性紅水溶液5mL。

A.2.4.2制法將蛋白胨、月示胨、膽鹽和氯化鈉溶于400mL蒸餾水內(nèi)，調(diào)節(jié)PH值至7.2；將瓊脂于600mL蒸餾水中煮沸溶解；合并兩液，分裝燒瓶內(nèi)，121℃滅菌15min備用；臨用時加熱溶化上述瓊脂，趁熱加入乳糖，冷至50～55℃時加入結(jié)晶紫和中性紅水溶液搖勻后傾注平板。

注：

結(jié)晶紫和中性紅水溶液配好后須經(jīng)高壓滅菌。

A.2.5稀釋液A.2.5.1成分氯化鈉8.5g；蒸餾水1000mL。

A.2.5.2制法稱取8.5ｇ氯化鈉溶于1000mL蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min。

A.3儀器與設(shè)備A.3.1天平：

感量：

0.01g。

A.3.2震蕩器。

A.3.3高壓滅菌器：

121℃。

A.3.4生化培養(yǎng)箱：

精度1℃。

A.3.5冰箱：

2℃～5℃。

A.3.6無菌吸管：

1mL、10mL或微量移液器及吸頭。

A.3.7無菌錐形瓶：

容量250mL、500mL。

A.3.8無菌培養(yǎng)皿：

直徑90mm。

A.3.9pH計或pH比色管或精密pH試紙。

A.4樣品制備按GB/T14699.1的規(guī)定，采取有代表性的樣品不少于500g，用于制備試樣，四分法將原始樣品縮至200g,制作兩份樣品，裝入滅菌樣品袋，貼上標(biāo)簽，一份留樣，一份待檢，至于干燥處。

A.5測定步驟A.5.1樣品稀釋從樣品中稱取10g（精確到0.01g），加入帶玻璃珠的盛有90mL滅菌生理鹽水的三角瓶中，靜置20min后在旋轉(zhuǎn)式搖床上200r/min充分振蕩30min，即成母液的菌懸液。

用無菌吸管吸取1mL上述母液Q/370522SXH03220169的菌懸液加入盛有9mL的生理鹽水的試管中，均勻成1:10稀釋的菌懸液，這樣依次稀釋，分別得到1:102、1:103、1:108、1:109等濃度（每個稀釋度必須更換無菌吸管）。

A.5.2涂布用無菌吸管選擇2個適宜的連續(xù)稀釋度的菌懸液0.1mL，分別加至直徑為9cm的相應(yīng)培養(yǎng)基平皿的培養(yǎng)基表面，用無菌玻璃刮刀將菌懸液均勻涂于培養(yǎng)基表面。

每個樣品取兩個稀釋梯度，每一稀釋度重復(fù)3次，同時用無菌水作為空白對照。

A.5.3培養(yǎng)涂布好的平皿蓋好，置室溫中放置15min是菌懸液完全被瓊脂吸收，翻轉(zhuǎn)上述平皿置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌于37℃1℃培養(yǎng)16～24h，可計數(shù)枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌；糞腸球菌于37℃1℃培養(yǎng)24～48h，可計數(shù)糞腸球菌；釀酒酵母于28℃1℃培養(yǎng)，培養(yǎng)36～48h，可計數(shù)釀酒酵母。

A.5.4菌落特征枯草芽孢桿菌在平板上，菌落呈圓形、較厚；常呈乳白或污