《污水中豬藍(lán)耳病病毒的快速篩查RT-PCR法》編制說明

一、項(xiàng)目來源

根據(jù)《廣西標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)關(guān)于下達(dá)2023年第四十一批團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)制

修訂項(xiàng)目計(jì)劃的通知》（桂標(biāo)協(xié)〔2023〕140號(hào)）文件精神，由南寧

壯博生物科技有限公司、廣西揚(yáng)翔股份有限公司、金陵農(nóng)牧集團(tuán)有限

公司、巨星農(nóng)牧有限公司、深圳市京基智農(nóng)時(shí)代股份有限公司、濟(jì)凡

生物科技（常州）有限公司、廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)大學(xué)等單位共同起草

的團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《污水中豬藍(lán)耳病病毒的快速篩查RT-PCR法》（項(xiàng)目編

號(hào)：2023-4102）獲批立項(xiàng)。

二、項(xiàng)目背景及目的意義

農(nóng)業(yè)部關(guān)于印發(fā)《國家高致病性豬藍(lán)耳病防治指導(dǎo)意見（2017—

2020年）》的通知指出，各地要加大疫情監(jiān)測(cè)力度，及時(shí)準(zhǔn)確掌握病

原分布和疫情動(dòng)態(tài)，科學(xué)評(píng)估發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，及時(shí)發(fā)布預(yù)警信息。要選擇

一定數(shù)量的養(yǎng)殖場(chǎng)戶、屠宰場(chǎng)和交易市場(chǎng)作為固定監(jiān)測(cè)點(diǎn)，持續(xù)開展

監(jiān)測(cè)。

2021年，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部關(guān)于印發(fā)《非洲豬瘟等重大動(dòng)物疫病分區(qū)防

控工作方案（試行）》的通知指出，強(qiáng)化技術(shù)支撐，及時(shí)通報(bào)和共享動(dòng)

物疫病檢測(cè)數(shù)據(jù)和資源信息，推動(dòng)檢測(cè)結(jié)果互認(rèn)。完善專家咨詢機(jī)制，

組建大區(qū)重大動(dòng)物疫病防控專家智庫，定期組織開展重大動(dòng)物疫病風(fēng)

險(xiǎn)分析評(píng)估，研究提出分區(qū)防控政策措施建議。

豬藍(lán)耳病是常見于家豬和野豬群體間的傳染性疾病，因其可通過

直接接觸在群體之間傳染，因此這種疾病的出現(xiàn)對(duì)我國的養(yǎng)豬業(yè)帶來

了極大的影響。豬藍(lán)耳病又稱豬流行性流產(chǎn)和呼吸綜合征。此種疾病

傳染不但會(huì)威脅豬的健康，還會(huì)影響母豬的繁殖，造成流行性流產(chǎn)情

況的發(fā)生。

廣西開展豬藍(lán)耳病病毒檢測(cè)，主要進(jìn)行檢測(cè)的場(chǎng)所包括豬場(chǎng)種畜

場(chǎng)等，其中分布在南寧壯博生物科技有限公司、金陵農(nóng)牧集團(tuán)有限公

司種畜場(chǎng)、京基智農(nóng)種畜場(chǎng)、巨星農(nóng)牧種畜場(chǎng)等場(chǎng)所。

2022年7月3日，華南地區(qū)某生豬養(yǎng)殖場(chǎng)采集15個(gè)養(yǎng)殖單元的

污水樣品；2022年12月1日，華南地區(qū)某生豬養(yǎng)殖場(chǎng)采集2個(gè)養(yǎng)殖

單元的污水樣品；2022年12月6日，華南地區(qū)某生豬養(yǎng)殖場(chǎng)采集6

個(gè)養(yǎng)殖單元的污水樣品；2022年12月15日，華南地區(qū)某生豬養(yǎng)殖

場(chǎng)采集2個(gè)養(yǎng)殖單元的污水樣品；2023年1月12日，華南地區(qū)某

生豬養(yǎng)殖場(chǎng)采集1個(gè)養(yǎng)殖單元的污水樣品；2023年2月9日，華南

地區(qū)某生豬養(yǎng)殖場(chǎng)采集3個(gè)養(yǎng)殖單元的污水樣品，分布進(jìn)行豬藍(lán)耳病

病毒檢測(cè)，均檢測(cè)出陽性。經(jīng)污水檢出陽性后對(duì)養(yǎng)殖單元內(nèi)進(jìn)行個(gè)體

觀察和采集唾液拭子到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行核酸檢測(cè)，部分豬存在發(fā)熱、精神

沉郁、咳嗽、食欲不振現(xiàn)象，存在有藍(lán)耳病的病癥，實(shí)驗(yàn)室也在采集

的唾液拭子中檢測(cè)出陽性。

在感染豬藍(lán)耳病后，豬的生殖能力受到了很大限制。公豬在感染

豬藍(lán)耳病后一般不會(huì)有明顯的癥狀出現(xiàn)，有少數(shù)公豬會(huì)伴有發(fā)燒、食

欲減退、精液量減少的情況發(fā)生。相對(duì)于公豬感染的反應(yīng)，母豬感染

后癥狀更明顯，會(huì)突然放棄進(jìn)食，并伴有嗜睡的情況出現(xiàn)，對(duì)于已經(jīng)

懷孕的母豬來說，會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的流產(chǎn)情形。母豬在懷孕初期因?yàn)榕咛?/p>

的保護(hù)作用，可對(duì)此種病毒有效的進(jìn)行阻隔，但在母豬的懷孕后期，

由于自身抵抗力下降導(dǎo)致感染病毒的幾率增強(qiáng)，引發(fā)母豬早產(chǎn)、流產(chǎn)

以及胎死腹中的情形發(fā)生。

由于母豬在妊娠過程中抵抗力的下降導(dǎo)致感染率增加，造成幼豬

的死廣率明顯增高，很多幼豬在沒有出生前便胎死腹中，即使母豬順

利的生產(chǎn)，也會(huì)造成幼豬身體素質(zhì)差且伴有呼吸困難的癥狀，同時(shí)幼

豬的身體較弱容易引發(fā)其他疾病從而造成幼豬的死亡。育肥豬在感染

豬藍(lán)耳病后生長速度緩慢，營養(yǎng)無法吸收導(dǎo)致體重增長遲緩，并會(huì)陸

續(xù)發(fā)生死亡的現(xiàn)象，給養(yǎng)豬者帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

與常規(guī)PCR檢測(cè)方式相比，以10%抽樣，5:1混檢，試劑盒費(fèi)用

80元為例，10000頭豬進(jìn)行一次抽檢的費(fèi)用是1.6萬元。假如每周抽

檢一次，即一年抽檢52次，全年的檢測(cè)費(fèi)用為83萬元，平均83元/

頭。根據(jù)石家莊市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心2022年8月的招標(biāo)成交公

告顯示，采用熒光定量PCR方法檢測(cè)3500頭豬，中標(biāo)檢測(cè)費(fèi)用為

591150元，折合169元/頭。2021年該項(xiàng)目中標(biāo)單價(jià)為180元/頭。

污水監(jiān)測(cè)費(fèi)用是常規(guī)抽檢熒光定量PCR的10%，大大減少了成

本。污水檢測(cè)發(fā)現(xiàn)陽性后，及時(shí)定位養(yǎng)殖單元，對(duì)養(yǎng)殖單元內(nèi)進(jìn)行個(gè)

體觀察和檢測(cè)，可實(shí)現(xiàn)早發(fā)現(xiàn)、早防控。建立全時(shí)段的防疫體系，實(shí)

現(xiàn)低費(fèi)用、高效率的疫情預(yù)警及防控。

因此，通過制定團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《污水中豬藍(lán)耳病病毒的快速篩查

RT-PCR法》，以標(biāo)準(zhǔn)為抓手，統(tǒng)一規(guī)范污水中豬藍(lán)耳病病毒快速篩查

的檢測(cè)技術(shù)，為豬藍(lán)耳病的預(yù)防、監(jiān)測(cè)提供重要依據(jù)。

三、項(xiàng)目編制過程

（一）成立標(biāo)準(zhǔn)編制工作組

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《污水中豬藍(lán)耳病病毒的快速篩查RT-PCR法》項(xiàng)目

任務(wù)下達(dá)后，南寧壯博生物科技有限公司牽頭組織成立了標(biāo)準(zhǔn)編制工

作組，制定了標(biāo)準(zhǔn)編寫方案，明確任務(wù)職責(zé)，確定工作技術(shù)路線，開

展標(biāo)準(zhǔn)研制工作，具體由南寧壯博生物科技有限公司、廣西揚(yáng)翔股份

有限公司、金陵農(nóng)牧集團(tuán)有限公司、巨星農(nóng)牧有限公司、深圳市京基

智農(nóng)時(shí)代股份有限公司、濟(jì)凡生物科技（常州）有限公司、廣西農(nóng)業(yè)

職業(yè)技術(shù)大學(xué)相關(guān)人員配合。

（二）收集整理文獻(xiàn)資料

標(biāo)準(zhǔn)編制工作組收集了國內(nèi)有關(guān)污水中豬藍(lán)耳病病毒快速篩查的

相關(guān)技術(shù)文獻(xiàn)資料。主要有：

GB19489-2008實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求

GB/T35912-2018豬繁殖與呼吸綜合征病毒熒光RT-PCR檢測(cè)

方法

WST799-2022污水中新型冠狀病毒富集濃縮和核酸檢測(cè)方法

標(biāo)準(zhǔn)

DB45∕T2138-2020水體中諾如病毒的核酸檢測(cè)方法實(shí)時(shí)熒光

RT-PCR法

專利《用于檢測(cè)豬藍(lán)耳病病毒的富集濃縮試劑盒》

（三）研討確定標(biāo)準(zhǔn)主體內(nèi)容

標(biāo)準(zhǔn)編制工作組在對(duì)收集的資料進(jìn)行整理研究之后，標(biāo)準(zhǔn)編制工

作組召開了標(biāo)準(zhǔn)編制會(huì)議，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)的整體框架結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究，并對(duì)

標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)鍵性內(nèi)容進(jìn)行了初步探討。經(jīng)過研究，標(biāo)準(zhǔn)的主體內(nèi)容確定

為原理、試劑和材料、儀器設(shè)備、樣品采集及前處理、實(shí)時(shí)熒光RT-PCR

檢測(cè)、結(jié)果評(píng)價(jià)、檢出限。

（四）調(diào)研及形成草案、征求意見稿

2023年7月，在前期工作的基礎(chǔ)之上，通過理清邏輯脈絡(luò)，整合

已有的參考資料中有關(guān)污水中豬藍(lán)耳病病毒的快速篩查RT-PCR法的

要求，并結(jié)合污水中豬藍(lán)耳病病毒的快速篩查RT-PCR法實(shí)際要求的

基礎(chǔ)上，按照簡化、統(tǒng)一等原則編制完成團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《污水中豬藍(lán)耳病

病毒的快速篩查RT-PCR法》（草案）。

2023年8月-10月，標(biāo)準(zhǔn)編制工作組對(duì)前期的研究和數(shù)據(jù)進(jìn)了整

理并結(jié)合前期技術(shù)咨詢會(huì)、征求意見會(huì)的內(nèi)容針對(duì)污水中豬藍(lán)耳病病

毒快速篩查進(jìn)行多次討論、研究，最終形成團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《污水中豬藍(lán)耳

病病毒的快速篩查RT-PCR法》（征求意見稿）和編制說明。

四、標(biāo)準(zhǔn)制定原則

（一）實(shí)用性原則

本文件是在充分收集相關(guān)資料和文獻(xiàn)，分析污水中豬藍(lán)耳病病毒

的快速篩查當(dāng)前現(xiàn)狀，調(diào)研污水中豬藍(lán)耳病病毒的快速篩查的分析方

法情況，在現(xiàn)有國家、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)污水中各種病毒測(cè)定方法要求的

基礎(chǔ)上，結(jié)合多年經(jīng)驗(yàn)而總結(jié)起草的。符合當(dāng)前使用RT-PCR法測(cè)定

污水中豬藍(lán)耳病病毒的方向與需求，有利于行業(yè)的長遠(yuǎn)發(fā)展，具有較

強(qiáng)的實(shí)用性和可操作性。

（二）協(xié)調(diào)性原則

本文件編寫過程中注意了與污水中豬藍(lán)耳病病毒的測(cè)定相關(guān)法律

法規(guī)的協(xié)調(diào)問題，在內(nèi)容上與現(xiàn)行法律法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)一致。

（三）規(guī)范性原則

本文件嚴(yán)格參照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：

標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的要求和規(guī)定編寫本標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容，保

證標(biāo)準(zhǔn)的編寫質(zhì)量。

（四）前瞻性原則

本文件在兼顧當(dāng)前區(qū)內(nèi)采用污水中豬藍(lán)耳病病毒的快速篩查現(xiàn)實(shí)

檢驗(yàn)情況的同時(shí)，還考慮到了污水中豬藍(lán)耳病病毒的測(cè)定方法快速發(fā)

展的趨勢(shì)和需要，在標(biāo)準(zhǔn)中體現(xiàn)了個(gè)別特色性、前瞻性和先進(jìn)性條款，

作為對(duì)污水中豬藍(lán)耳病病毒快速篩查的指導(dǎo)。

五、標(biāo)準(zhǔn)主要章節(jié)內(nèi)容及確定依據(jù)

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《污水中豬藍(lán)耳病病毒的快速篩查RT-PCR法》主要

內(nèi)容包括原理、試劑和材料、儀器設(shè)備、樣品采集及前處理、實(shí)時(shí)熒

光RT-PCR檢測(cè)、結(jié)果評(píng)價(jià)、檢出限。

（一）原理

參考DB45∕T2138-2020《水體中諾如病毒的核酸檢測(cè)方法實(shí)時(shí)

熒光RT-PCR法》。向污水中加入富集濃縮試劑，富集濃縮試劑可使

病毒顆粒形成多聚體，通過離心作用將水溶液與病毒顆粒多聚體分開，

收集病毒顆粒多聚體形成的沉淀，采用核酸提取和實(shí)時(shí)熒光RT-PCR

檢測(cè)。

（二）試劑和材料

除另有說明外，所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682

中一級(jí)水的要求。

用到的試劑和材料有：磷酸鹽緩沖液（1mol/LPBS，pH值7.2）、

富集濃縮試劑、病毒核酸提取試劑盒、無核酸酶水：分子生物學(xué)級(jí)、

離心管（1.5mL、50mL）、無菌移液器吸頭（10μL、200μL、1mL，

帶濾芯，無核酸酶）、無菌聚乙烯瓶、透明薄壁PCR管（0.2mL）。

儀器設(shè)備：冰箱（0℃～20℃）、電子天平（精度0.01g）、高速

臺(tái)式冷凍離心機(jī)（可控溫至-4℃，離心速度≥13000g）、低速離心

機(jī)（離心速度12000r/min）、金屬水浴鍋、振蕩混勻器、高壓滅菌器、

實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增儀、二級(jí)生物安全柜。

（三）樣品采集及前處理

水樣采集、運(yùn)送和保存：

根據(jù)采樣場(chǎng)所排水系統(tǒng)分布情況，重點(diǎn)選取污水排水口、內(nèi)部管

網(wǎng)匯集處等關(guān)鍵位置，對(duì)未經(jīng)消殺處的污水進(jìn)行采樣。根據(jù)現(xiàn)場(chǎng)條件

和檢測(cè)需求確定水樣采集方式，如瞬時(shí)水樣或混合水樣。用無菌聚乙

烯瓶采集污水樣本，采樣體積為200mL～300mL。樣本采集后，應(yīng)

在現(xiàn)場(chǎng)使用75％酒精對(duì)采樣瓶外表面進(jìn)行消毒，并及時(shí)將樣本送至實(shí)

驗(yàn)室，運(yùn)輸過程中水樣溫度保持在0℃～4℃。實(shí)驗(yàn)室接到水樣后應(yīng)

盡快進(jìn)行檢測(cè)，如未及時(shí)檢測(cè)，應(yīng)將水樣置于-4℃冰箱保存待檢。

對(duì)比其它行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中離心溫度是4℃，本標(biāo)準(zhǔn)是-4℃，因?yàn)椴?/p>

毒會(huì)在低溫下生存，不會(huì)凍死，低溫下停止活動(dòng)并進(jìn)入休眠狀態(tài)。大

多數(shù)病毒耐低溫，但不耐高溫，在低于0℃的溫度下可以存活很長時(shí)

間并保持其傳染性，用-4℃離心能確保病毒的活性。

病毒富集濃縮：

病毒富集濃縮是本標(biāo)準(zhǔn)中較為關(guān)鍵的步驟，具體提操作如下：

——將污水樣品混合均勻，取同一廠各3管40mL的污水分別置

于3個(gè)50ml離心管中，在-4℃、2500r/min的條件下離心30min。

剩余污水樣本作為備份。

——將7.2.1中所得上清液分別轉(zhuǎn)移至試劑盒提供的預(yù)混試劑離

心管中，充分混合，震蕩搖勻30min。

——在-4℃、12000r/min的條件下離心120min，離心機(jī)降速

時(shí)不應(yīng)使用制動(dòng)力。將離心管從離心機(jī)上取出，傾倒并棄除離心管中

的上清液，至無上清液倒出。該過程需減少沉淀的溶解與損失，以提

高病毒濃縮富集效率。

——在-4℃、12000r/min的條件下離心5min，離心機(jī)降速時(shí)

不應(yīng)使用制動(dòng)力。將離心管從離心機(jī)上取下，用移液器從每個(gè)離心管

中吸出剩余的上清液。注意避免吸管尖端接觸沉淀。

——將200uL磷酸鹽緩沖液（5.1）加入至離心管中，反復(fù)吹吸

沉淀，最終形成混懸液（該水樣的濃縮液），同一廠3管污水懸混液合

為1管濃縮液。

——將濃縮液轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中，于0℃～4℃條件下保

存，并于24h內(nèi)完成核酸提取和擴(kuò)增。

（四）實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)

核酸提取：

在二級(jí)生物安全柜中打開裝有污水樣本濃縮液的離心管，按照病

毒核酸提取試劑盒說明，取適量濃縮液進(jìn)行核酸提取，提取完成后應(yīng)

立即封蓋并進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)。剩余的濃縮液和核酸樣本應(yīng)

于-4℃條件下凍存。

核酸擴(kuò)增：

參照豬繁殖與呼吸系統(tǒng)綜合征（藍(lán)耳病）熒光PCR檢測(cè)試劑盒

說明書（見附頁）進(jìn)行。每個(gè)樣本設(shè)置3個(gè)平行。

（五）結(jié)果評(píng)價(jià)

陽性結(jié)果評(píng)價(jià)：

——陽性對(duì)照FAM通道與VIC通道Ct值均＜35且出現(xiàn)特異性擴(kuò)

增曲線。陰性對(duì)照應(yīng)無Ct值，且無特異性擴(kuò)增曲線，試驗(yàn)結(jié)果有效；

否則應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。

——FAM通道Ct值≤38且出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線，判定為病毒核

酸陽性。

——FAM通道Ct值38＜Ct≤45,判定為可疑，應(yīng)對(duì)樣本進(jìn)行復(fù)測(cè)，

若復(fù)測(cè)結(jié)果Ct值仍在38～45之間有明顯指數(shù)增長，則判定為陽性，

否則為陰性。

陰性結(jié)果評(píng)價(jià)：

——通道無Ct值或無典型S型擴(kuò)增曲線，同時(shí)VIC通道CT值

＜38，判為陰性，表明樣品中未檢出病毒核酸。

——FAM通道無Ct值或無典型S型擴(kuò)增曲線，同時(shí)VIC通道CT

值＞38或無CT值，則該樣本檢測(cè)結(jié)果無效，應(yīng)重新安排采樣檢測(cè)。

（六）檢出限

檢出限按本標(biāo)準(zhǔn)的試驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證，選取10個(gè)空白平行樣品，

通過分析，計(jì)算得出豬藍(lán)耳病病毒的方法檢出限為1copies/mL。具體

試驗(yàn)驗(yàn)證數(shù)據(jù)如下表所示：

廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)大學(xué)檢出限測(cè)試數(shù)據(jù)表

金陵農(nóng)牧集團(tuán)檢出限測(cè)試數(shù)據(jù)表

廣西揚(yáng)翔股份檢出限測(cè)試數(shù)據(jù)表

南寧壯博生物科技有限公司檢出限測(cè)試數(shù)據(jù)表

（七）精密度

定性分析的精密度通常表現(xiàn)為假陽性或假陰性。依據(jù)RT-PCR法

進(jìn)行測(cè)定，判斷污水樣品的測(cè)定結(jié)果為陰性或陽性。三家實(shí)驗(yàn)室的精

密度測(cè)試數(shù)據(jù)如下：

廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)大學(xué)精密度測(cè)試結(jié)果

金陵牧業(yè)集團(tuán)有限公司精密度測(cè)試結(jié)果

廣西揚(yáng)翔股份有限公司精密度測(cè)試結(jié)果

南寧壯博生物科技有限公司精密度測(cè)試結(jié)果

（八）實(shí)驗(yàn)室間方法確認(rèn)

根據(jù)方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證要求，選擇3家實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室間方法確認(rèn)，

確認(rèn)方法的“選擇性”、“檢出限”和“精密度”。

1、確定4家實(shí)驗(yàn)室參加。分別是廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)大學(xué)、金陵牧

業(yè)集團(tuán)有限公司、廣西揚(yáng)翔股份有限公司。

2、實(shí)驗(yàn)室方法確認(rèn)的污水樣品共7份（每家實(shí)驗(yàn)室的污水樣品相

同），污水樣品編號(hào)為01至07。

3、通過3家實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)比對(duì)（驗(yàn)證方案見附頁），4家實(shí)驗(yàn)室對(duì)

7份污水樣品的判定結(jié)果一致。

通過以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，4家實(shí)驗(yàn)室都對(duì)方法的“選擇性”、“檢出限”、

“精密度”都進(jìn)行了確認(rèn)，說明污水中豬藍(lán)耳病病毒的快速篩查

RT-PCR法可行、穩(wěn)定，滿足污水中豬藍(lán)耳病病毒的快速篩查。

六、國內(nèi)外同類標(biāo)準(zhǔn)制修訂情況及與法律法規(guī)、強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)關(guān)系

經(jīng)查閱，與“污水中豬藍(lán)耳病病毒快速篩查”有關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)有：GB/T

18090-2023豬繁殖與呼吸綜合征診斷方法（即將實(shí)施）；GB/T

18090-2008豬繁殖與呼吸綜合征診斷方法（現(xiàn)行）；GB/T

36875-2018豬瘟病毒RT-nPCR檢測(cè)方法；GB/T34729-2017豬

瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測(cè)方法；GB/T27540-2011豬瘟病毒實(shí)時(shí)

熒光RT-PCR檢測(cè)方法；GB/T35912-2018豬繁殖與呼吸綜合征病

毒熒光RT-PCR檢測(cè)方法；NY/T3237-2018豬繁殖與呼吸綜合征

間接ELISA抗體檢測(cè)方法；DB33/T822-2010高致病性豬藍(lán)耳病

RT-PCR檢測(cè)技術(shù)；DB65/T3899-2016高致病性豬藍(lán)耳病RT-PCR

檢測(cè)方法；DB13/T5345-2021豬繁殖與呼吸綜合征病毒和豬圓環(huán)病

毒2型二重PCR檢測(cè)方法；DB21/T2827.1-2017畜禽疫病防治與

凈化技術(shù)規(guī)范第1部分：豬繁殖與呼吸綜合征病毒經(jīng)典株與高致病性

變異株RT-PCR鑒別檢測(cè)方法；DB21/T3257-2020豬繁殖與呼吸

綜合征病毒抗體酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法遼寧省市場(chǎng)監(jiān)督管理局

2020-05-30現(xiàn)行；DB32/T3775-2020豬繁殖與呼吸綜合征病毒

RT-LAMP檢測(cè)方法；DB35/T1335-2013豬繁殖與呼吸綜合征抗體

檢測(cè)方法免疫金試紙法；DB35/T1852-2019豬繁殖與呼吸綜合征

病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)方法；DB37/T3085-2017高致病性豬

繁殖與呼吸綜合征病毒株和經(jīng)典毒株的RT-PCR鑒別檢測(cè)技術(shù)；

DB45/T1010-2014美洲型及歐洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒的檢

測(cè)多重?zé)晒舛糠崔D(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法；T/CVMA12-2018豬繁殖

與呼吸綜合征病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)方法；T/CVMA6-2018