近幾年發(fā)育生物學(xué)實(shí)驗(yàn) 目的基因的發(fā)育表達(dá)圖式全文課件

最新發(fā)育生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)康幕虻陌l(fā)育表達(dá)圖式精品課件第一頁(yè)，編輯于星期六：十四點(diǎn)五十五分。地高辛（DIG）標(biāo)記的UTP

ALP標(biāo)記的Anti-DIG抗體

ALP堿性磷酸酶顯色

DIGAnti-DIG抗體ALPALP底物RNA原位雜交原理：主要是利用堿基互補(bǔ)原理，將體外合成的帶有標(biāo)記的單鏈反義RNA與組織或細(xì)胞中待測(cè)的mRNA發(fā)生雜交，從而將探針定位在特定基因的表達(dá)區(qū)域內(nèi)。顯色觀察，確認(rèn)其表達(dá)部位。標(biāo)記物的種類分為2種，即非放射性的標(biāo)記物（地高辛(DIG)和生物素(BIO)）或帶有放射性的同位素(32P)。第二頁(yè)，編輯于星期六：十四點(diǎn)五十五分。vasa基因——生殖細(xì)胞的標(biāo)記分子櫛孔扇貝胚胎和幼蟲單環(huán)刺螠胚胎和幼蟲三、實(shí)驗(yàn)材料第三頁(yè)，編輯于星期六：十四點(diǎn)五十五分。第四頁(yè)，編輯于星期六：十四點(diǎn)五十五分。四、胚胎原位雜交的實(shí)驗(yàn)流程RNA探針設(shè)計(jì)合成

思考：如何確保探針特異性？

反義RNA探針

正義RNA探針

HindⅢ線性化質(zhì)粒1μgEcoRⅠ線性化質(zhì)粒1μg10×轉(zhuǎn)錄緩沖液2μl10×轉(zhuǎn)錄緩沖液2μl10×NTP2μl10×NTP2μlRNase抑制劑1μlRNase抑制劑1μlT7RNA聚合酶2μlSP6RNA聚合酶2μlDEPC處理水至20μlDEPC處理水至20μl胚胎固定：4％多聚甲醛(PBS配制)，保存于100%甲醇中（-20℃）

體外轉(zhuǎn)錄帶有T7/SP6噬菌體轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)子的載體第五頁(yè)，編輯于星期六：十四點(diǎn)五十五分。雜交流程（第一天）(12-16h)第六頁(yè)，編輯于星期六：十四點(diǎn)五十五分。以上過(guò)程，為防止RNA酶污染，操作時(shí)需戴手套和口罩。試劑和容器處理：DEPC（焦碳酸二乙酯）或180℃復(fù)水、消化、后固定雜交、預(yù)雜交第七頁(yè)，編輯于星期六：十四點(diǎn)五十五分。雜交流程（第二天）(顯色：30min–2h)第八頁(yè)，編輯于星期六：十四點(diǎn)五十五分。第九頁(yè)，編輯于星期六：十四點(diǎn)五十五分。·胚胎預(yù)處理·預(yù)雜交和雜交·洗脫和抗體孵育·顯色和觀察實(shí)驗(yàn)主要階段思考：各關(guān)鍵步驟的目的和原理，如何確定最佳條件第十頁(yè)，編輯于星期六：十四點(diǎn)五十五分。第十一頁(yè)，編輯于星期六：十四點(diǎn)五十五分。作業(yè)電子版上交vasamRNA在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)圖式；根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，提出實(shí)