分解尿素的細(xì)菌

分解尿素的細(xì)菌1、尿素得利用尿素就是一種重要得農(nóng)業(yè)氮肥。尿素不能直接被農(nóng)作物吸收。土壤中得細(xì)菌將尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、細(xì)菌利用尿素得原因土壤中得細(xì)菌分解尿素就是因?yàn)樗齻兡芎铣呻迕窩O(NH2)脲酶+CO2NH3+H2O實(shí)驗(yàn)室中微生物得篩選原理:人為提供有利于目得菌株生長得條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等),同時(shí)抑制或阻止其她微生物生長。選擇性培養(yǎng)基15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4土壤中分解尿素得細(xì)菌得分離與計(jì)數(shù)所需培養(yǎng)基:①從物理性質(zhì)看此培養(yǎng)基屬于哪類？固體培養(yǎng)基②在此培養(yǎng)基中哪些作為碳源、氮源？碳源:葡萄糖、尿素氮源:尿素培養(yǎng)基得氮源為尿素,只有能合成脲酶得微生物才能分解尿素,以尿素作為氮源。缺乏脲酶得微生物由于不能分解尿素,缺乏氮源而不能生長發(fā)育繁殖,而受到抑制,所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素得微生物。5、培養(yǎng)基選擇分解尿素得微生物得原理6、怎樣證明此培養(yǎng)基具有選擇性呢？以尿素為唯一氮源得培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

就是分離尿素細(xì)菌判斷該培養(yǎng)基有無選擇性實(shí)驗(yàn)組對照組培養(yǎng)基類型是否接種

目的

結(jié)果只生長尿素細(xì)菌生長多種微生物就是1、顯微鏡直接計(jì)數(shù):利用血球計(jì)數(shù)板,在顯微鏡下計(jì)算一定容積里樣品中微生物得數(shù)量。㈡、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目:不能區(qū)分死菌與活菌;不適于對運(yùn)動細(xì)菌得計(jì)數(shù);需要相對高得細(xì)菌濃度;個(gè)體小得細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察;缺點(diǎn)2、間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)⑴原理:在稀釋度足夠高時(shí),微生物在固體培養(yǎng)基上所形成得一個(gè)菌落就是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成得,即一個(gè)菌落代表原先得一個(gè)單細(xì)胞。⑵常用方法:稀釋涂布平板法。每克樣品中得菌落數(shù)＝(C÷V)×M其中,C代表某一稀釋度下平板上生長得平均菌落數(shù),V代表涂布平板時(shí)所用得稀釋液得體積(ml),M代表稀釋倍數(shù)。注意事項(xiàng)①為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,一般選擇菌落數(shù)在30——300得平板上進(jìn)行計(jì)數(shù)。②為使結(jié)果接近真實(shí)值可將同一稀釋度加到三個(gè)或三個(gè)以上得平皿中,經(jīng)涂布,培養(yǎng)計(jì)算出菌落平均數(shù)。③統(tǒng)計(jì)得菌落往往比活菌得實(shí)際數(shù)目低。設(shè)置對照得主要目得就是排除實(shí)驗(yàn)組中非測試因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果得影響,提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果得可信度。㈢、設(shè)置對照:大家學(xué)習(xí)辛苦了，還是要堅(jiān)持繼續(xù)保持安靜實(shí)例:在做分解尿素得細(xì)菌得篩選與統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目得實(shí)驗(yàn)時(shí),A同學(xué)從對應(yīng)得106

倍稀釋得培養(yǎng)基中篩選出大約150個(gè)菌落,但就是其她同學(xué)在同樣得稀釋度下只選擇出大約50個(gè)菌落。分析其原因。原因:⑴土樣不同,⑵培養(yǎng)基污染或操作失誤(或者就是混入了其她得含氮物質(zhì))二、實(shí)驗(yàn)得具體操作

㈠、土壤取樣

從肥沃、濕潤得土壤中取樣。先鏟去表層土3cm左右,再取樣,將樣品裝入事先準(zhǔn)備好得信封中?！羧⊥翗佑玫眯¤F鏟和盛土樣得得信封在使用前都要滅菌。㈡、制備培養(yǎng)基:制備以尿素為唯一氮源得選擇培養(yǎng)基?！魬?yīng)在火焰旁稱取土壤10g?！粼谙♂屚寥廊芤旱眠^程中,每一步都要在火焰旁進(jìn)行[三]樣品得稀釋㈣、取樣涂布◆實(shí)驗(yàn)時(shí)要對培養(yǎng)皿作好標(biāo)記。注明培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時(shí)間、稀釋度、培養(yǎng)物等。㈣、取樣涂布◆分離不同得微生物采用不同得稀釋度稀釋倍數(shù)目得細(xì)菌104、105、106保證獲得菌落數(shù)在30～300之間、適于計(jì)數(shù)得平板放線菌103、104、105真菌102、103、104原因:不同微生物在土壤中含量不同㈤、微生物得培養(yǎng)與觀察在菌落計(jì)數(shù)時(shí),每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)得記錄作為結(jié)果,以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落得數(shù)目。

培養(yǎng)不同微生物往往需要不同培養(yǎng)溫度。細(xì)菌:30～37℃培養(yǎng)1～2d放線菌:25～28℃培養(yǎng)5～7d霉菌:25～28℃得溫度下培養(yǎng)3～4d。微生物得培養(yǎng)與觀察課外延伸在以尿素為唯一氮源得培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。培養(yǎng)某種細(xì)菌后,如果PH升高,指示劑將