【大葉醉魚草葉中木犀草素含量的測(cè)定探究5200字（論文）】

大葉醉魚草葉中木犀草素含量的測(cè)定研究TOC\o"1-2"\h\u28135前言 1181971.儀器與試藥 2301861.1儀器與設(shè)備 2108781.2材料與試劑 2145792.實(shí)驗(yàn)部分 2314122.1大葉醉魚草葉中木犀草素含量的測(cè)定 2227912.2單因素對(duì)測(cè)定結(jié)果的考察 4211152.3正交試驗(yàn)分析 6274612.4驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 725973.結(jié)論 8183654.應(yīng)用前景 832377參考文獻(xiàn) 9摘要：研究昭陽(yáng)區(qū)大葉醉魚草葉中木犀草素含量的提取工藝及測(cè)定方法。以索氏提取法進(jìn)行提取，研究乙醇濃度、回流次數(shù)、料液比3個(gè)因素對(duì)木犀草素百分含量的影響;采用紫外分光光度法測(cè)定其含量。索氏提取法提取大葉醉魚草葉中木犀草素含量的最佳工藝條件:乙醇濃度65%、回流次數(shù)12次、料液比1:70，在此條件下得到的木犀草素平均含量為5.6%。關(guān)鍵詞：大葉醉魚草；木犀草素；紫外分光光度法中圖分類號(hào)：R284.2前言大葉醉魚草(Buddlejadavidii)又稱酒藥花、紫花醉魚草，是玄參科醉魚草屬灌木植物。因其葉有毒,將撕碎的大葉醉魚草的枝葉撒入魚塘,可使魚被麻醉從而漂浮在水面上,故稱“醉魚草”[1]。云南的昭通、紅河、西雙版納等各地多有種植，并且存活性很高，花期很長(zhǎng)，可達(dá)3-4個(gè)月。大葉醉魚草作為一種常見的中藥材，其藥材微辛、味苦、有毒；具有祛風(fēng)除濕、止咳化痰、活血化瘀等功效[2]；可用于治療哮喘、燒燙傷、皮膚瘙癢等，被廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)療等領(lǐng)域[3]。除此之外，我國(guó)許多中醫(yī)藥材中記載了大葉醉魚草的藥用功效，并將其運(yùn)用于我們的日常生活中。大葉醉魚草中含有豐富的黃酮類、萜類、木脂素、甾體類化合物等，其中黃酮類化合物的含量較為豐富，包括木犀草素、槲皮素、芹菜素等[3]。并且經(jīng)查閱黃酮類化合物中的木犀草素的含量相對(duì)較高，因此大葉醉魚草葉是提取木犀草素的最佳原材料。木犀草素(lutelion)是一種天然的四羥基黃酮類化合物，在自然界中，廣泛分布于多種中草藥、蔬菜果實(shí)中，有廣泛的應(yīng)用價(jià)值和良好的開發(fā)前景[4]。生理功能有：抗氧化、抑制細(xì)菌增長(zhǎng)、抗炎、抗腫瘤等[5-8]。最新研究表明，木犀草素對(duì)治療肝癌、宮頸癌、糖尿病等疾病發(fā)揮著很重要的作用[9-13]。大葉醉魚草的提取劑可以用于農(nóng)林害蟲防治、貯存害蟲防治、衛(wèi)生害蟲防治、畜牧害蟲防治等[14,15]。彭雪晶等從大葉醉魚草的上部分分離到木犀草素及其葡萄糖苷衍生物[16,17]。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)的報(bào)道，木犀草素的來(lái)源除了有天然提取的方法外，還可以通過(guò)半合成或全合成的方法獲取[18,19]。目前提取和測(cè)定木犀草素的方法目前測(cè)定木犀草素的方法有紫外分光光度法、薄層色譜法、間接原子吸收法、毛細(xì)管電泳紫外檢測(cè)法等[20-23]，并且方法各有優(yōu)點(diǎn)。據(jù)很多發(fā)明專利來(lái)看，生活中針對(duì)抗癌、化妝、消炎、祛疤等領(lǐng)域都取用了大葉醉魚草。但就目前來(lái)看，昭陽(yáng)地區(qū)的大葉醉魚草的很多成分提取分離所得到產(chǎn)品純度都不是很高，導(dǎo)致昭陽(yáng)區(qū)的大葉醉魚草沒(méi)有得到有效的利用進(jìn)而造成資源浪費(fèi)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)昭陽(yáng)區(qū)大葉醉魚草葉中的木犀草素含量進(jìn)行測(cè)定研究，為昭陽(yáng)區(qū)大葉醉魚草的開發(fā)利用提供一定的數(shù)據(jù)參考。1.儀器與試藥1.1儀器與設(shè)備表1儀器與設(shè)備Table1.Instruments

and

equipment儀器名稱儀器型號(hào)生產(chǎn)廠家電子分析天平CP214奧豪斯（上海）儀器有限公司可見光分光光度計(jì)UV-7200尤尼柯儀器有限公司高速多功能粉碎機(jī)YB-150永康市速峰工貿(mào)有限公司1.2材料與試劑大葉醉魚草采摘于云南省昭通市昭陽(yáng)區(qū)；表2材料與設(shè)備Table2.Materials

and

reagents試劑名稱規(guī)格生產(chǎn)廠家木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量純度≧98%合肥博美化學(xué)試劑有限責(zé)任公司無(wú)水乙醇分析純上海國(guó)際集團(tuán)化學(xué)試劑科技有限公司2.實(shí)驗(yàn)部分2.1大葉醉魚草葉中木犀草素含量的測(cè)定2.1.1木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備用電子分析天平精密稱取木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品35mg，加無(wú)水乙醇充分溶解，定容至100mL容量瓶，搖勻，即得35ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。2.1.2供試品溶液的制備將采摘的大葉醉魚草的葉自然風(fēng)干、揉碎、密封保存?zhèn)溆?；用電子分析天平精密稱取粉末2g,并加溶劑，用索氏提取器提取，冷卻過(guò)濾,定容至250mL容量瓶，搖勻備用。2.1.3測(cè)定方法準(zhǔn)確移取1.5mL“2.1.2”項(xiàng)下供試品溶液稀釋定容至100mL容量瓶中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下的方法操作，測(cè)定其吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行計(jì)算，并按下式計(jì)算大葉醉魚草葉中木犀草素的百分含量[24]。公式中C為大葉醉魚草葉中木犀草素提取液的質(zhì)量濃度（ug/mL）；V為大葉醉魚草葉提取液的總體積（mL）；D為稀釋倍數(shù)；m為稱取的大葉醉魚草葉粉末的質(zhì)量（g）。2.1.4木犀草素標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制用5mL吸量管精密移取配制好的標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mL,分別置10mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇定容，搖勻，以無(wú)水乙醇作為空白，在波長(zhǎng)350nm處按紫外-可見光分光光度法的測(cè)量方法，測(cè)定其吸光度；以木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果，從濃度1.75ug/mL~12.25ug/mL，共7個(gè)點(diǎn)；擬合得線性回歸方程：A=0.0659C-0.0063,R2=0.9998,其中C為濃度（ug/mL），A為吸光度值。測(cè)定結(jié)果表明：木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度在1.75ug/mL~12.25ug/mL之間與吸光度呈高度線性相關(guān)，制得的標(biāo)準(zhǔn)曲線準(zhǔn)確且穩(wěn)定。見圖1：圖1木犀草素標(biāo)準(zhǔn)曲線（濃度-吸光度）Fig1.Standardcurveofluteolin(concentration-absorbance)2.1.5精密度考察精密移取配制好的木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品溶液,按“2.1.3”項(xiàng)下的測(cè)定方法重復(fù)測(cè)定6次，記錄吸光度值。吸光度值分別為：0.221、0.221、0.222、0220、0.220、0.221，通過(guò)計(jì)算，吸光度的RSD為0.23%，說(shuō)明此方法的精密度良好。2.1.6穩(wěn)定性考察精密移取配制好的木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品溶液和同一次提取的供試品溶液，按“2.1.3”項(xiàng)下的測(cè)定方法分別在0、8、16、24、32、40min測(cè)定，記錄吸光度值。木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值在40min內(nèi)分別為：0.221、0.219、0.219、0.217、0.216、0.215，計(jì)算出的RSD為0.69%，供試品溶液在40min內(nèi)的吸光度值分別為：0.412、0.410、0.410、0.409、0.409、0.408，計(jì)算出的RSD為0.24%，說(shuō)明木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品試液和供試品溶液在40min內(nèi)穩(wěn)定。2.1.7重復(fù)性考察精密稱取相同質(zhì)量粉碎的大葉醉魚草葉粉末6份,按“2.1.2”項(xiàng)下方法制備供試液，按“2.1.3”項(xiàng)下的方法測(cè)定，記錄吸光度值。吸光度值分別為0.421、0.416、0.414、0.420、0.423、0.422，計(jì)算出吸光度的RSD為0.48%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。2.2單因素對(duì)試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果的考察探究大葉醉魚草葉中木犀草素分別在乙醇濃度、回流次數(shù)、料液比3個(gè)單因素條件影響下的提取效果。2.2.1乙醇濃度對(duì)提取效果的影響精密稱取大葉醉魚草葉的粉末5份，每份2g，確定回流次數(shù)為8次，料液比為1：50，乙醇濃度分別為55%、65%、75%、85%、95%，按“2.1.2”項(xiàng)和“2.1.3”項(xiàng)的方法進(jìn)行操作，計(jì)算木犀草素的百分含量。結(jié)果見圖2：圖2乙醇濃度對(duì)木犀草素百分含量的影響Fig2.Effectofethanolconcentrationonthepercentageofluteolin由圖2的數(shù)據(jù)可以看出，隨著乙醇濃度的不斷升高，木犀草素的百分含量呈先上升再下降的趨勢(shì)；當(dāng)乙醇濃度為65%時(shí)，木犀草素的百分含量最高，提取效果也最好；但當(dāng)濃度超過(guò)65%時(shí)，木犀草素的百分含量逐漸減弱。提取溶劑濃度的選擇要適宜，而不是濃度越高提取效果越好，因此考慮到提取效果和節(jié)約成本的多種因素，選取乙醇的最佳濃度為65%。2.2.2回流次數(shù)對(duì)提取效果的影響精密稱取大葉醉魚草葉的粉末5份，每份2g，確定乙醇濃度為65%，料液比為1：50，回流次數(shù)分別為6、8、10、12、14次，按“2.1.2”項(xiàng)和“2.1.3”項(xiàng)的方法進(jìn)行操作，計(jì)算木犀草素的百分含量。結(jié)果見圖3：圖3回流次數(shù)對(duì)木犀草素百分含量的影響Fig3.Effectof

reflux

timesonthepercentageofluteolin由圖3可以看出，隨著回流次數(shù)的增加木犀草素的百分含量在不斷增加，當(dāng)回流次數(shù)為10次的時(shí)候呈現(xiàn)較小的下降趨勢(shì)，當(dāng)回流次數(shù)接近12次時(shí)，木犀草素的測(cè)得量接近飽和，當(dāng)達(dá)到14次時(shí)呈下降趨勢(shì)。通過(guò)多次反復(fù)驗(yàn)證，為了達(dá)到較好的試驗(yàn)效果，因此選取合適的回流次數(shù)為12次。2.2.3料液比對(duì)提取效果的影響精密稱取大葉醉魚草葉的粉末5份，每份2g，確定乙醇濃度為65%，回流次數(shù)為12次，料液比分別為1:40、1:50、1:60、1:70、1:80，按“2.1.2”項(xiàng)和“2.1.3”項(xiàng)的方法進(jìn)行操作，計(jì)算木犀草素的百分含量。結(jié)果見圖4：圖4料液比對(duì)木犀草素百分含量的影響Fig4.Effectofsolid-liquid

ratio

of

onthepercentageofluteolin由圖4可以看出，隨著料液比的增加，木犀草素的百分含量一直在增加，當(dāng)液料比為1：50~1：60時(shí)，木犀草素含量增加趨于平穩(wěn)，當(dāng)料液比達(dá)1:70時(shí)木犀草素測(cè)得量達(dá)最大值，當(dāng)料液比大于1:70時(shí)呈明顯的下降趨勢(shì)，并且與1:40時(shí)較為接近；當(dāng)提取劑用量達(dá)到一定時(shí)，大葉醉魚草葉中木犀草素已基本提取完全，因此綜合提取效果和節(jié)約成本等方面考慮，也考慮到實(shí)驗(yàn)條件等因素，選擇最佳的料液比為1:70。2.3正交試驗(yàn)分析根據(jù)單因素試驗(yàn)的結(jié)果，選取乙醇濃度(A)、回流次數(shù)(B)、料液比(C)為研究對(duì)象，考察這3個(gè)因素的交叉影響作用，因此按L9(33)設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，其因素水平表見表3，試驗(yàn)結(jié)果見表4。表3因素水平表Table3.Factorsandlevelstest水平因素A乙醇濃度(%）B回流次數(shù)（次）C料液比（g/mL）155%101:60265%121:70375%141:80表4正交試驗(yàn)結(jié)果及分析Table4.Resultsandanalysisoforthogonaltest實(shí)驗(yàn)號(hào)因素木犀草素百分含量%ABC11115.022215.533315.041225.552325.563125.571334.682134.893235.0K15.1675.0335.100K25.5005.2675.333K34.8005.1675.033K11.7221.6781.700K21.8331.7561.778K31.6001.7221.678R0.2330.0780.100主次順序A>C>B最佳水平A2B2C2由表3和表4的正交試驗(yàn)結(jié)果以及方差分析可以得出：三因素試驗(yàn)中影響木犀草素百分含量的因素從強(qiáng)到弱排序依次為A＞C＞B,即乙醇濃度＞料液比＞回流次數(shù)。同時(shí)結(jié)合計(jì)算的方差比較，得出的優(yōu)選實(shí)驗(yàn)方案為A2B2C2。即乙醇濃度為65%，回流次數(shù)為12次，料液比為1:70。2.4驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)根據(jù)正交試驗(yàn)所得的最優(yōu)組合A2B2C2進(jìn)行重復(fù)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，平行3次。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。表5驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table5.Verificationoftest次數(shù)木犀草素測(cè)得量（%）15.625.635.7平均值5.6通過(guò)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的結(jié)果來(lái)看，在最優(yōu)組合條件下的提取下，所測(cè)的木犀草素的百分含量均高于正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)中的結(jié)果。3.結(jié)論本文采用索氏提取法對(duì)昭陽(yáng)區(qū)大葉醉魚草葉中的木犀草素進(jìn)行提取，同時(shí)運(yùn)用紫外分光光度法測(cè)定其含量。通過(guò)單因素考察及正交試驗(yàn)，篩選出最優(yōu)提取工藝組合A2B2C2，即乙醇濃度為65%，回流次數(shù)為12次，料液比1:70。在此條件下大葉醉魚草葉中木犀草素的平均百分含量為5.6%，提取效果都高于之前的每一個(gè)試驗(yàn)。并且在提取工藝過(guò)程中均未使用毒性試劑，提取效力較高，所以該條件切實(shí)可行，也為后期昭陽(yáng)區(qū)大葉醉魚草的開發(fā)研究提供一定的數(shù)據(jù)參考。通過(guò)試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，昭陽(yáng)區(qū)的大葉醉魚草葉中木犀草素的含量較高。4.應(yīng)用前景大葉醉魚草作為一種傳統(tǒng)的中藥材，國(guó)內(nèi)外對(duì)其果實(shí)的研究報(bào)道逐漸增多，并且大葉醉魚草以及相關(guān)的醉魚草屬植物大多數(shù)運(yùn)用于醫(yī)療、化妝、治療炎癥等諸多方面。隨著環(huán)境發(fā)展的不斷提高，難免會(huì)存在殺蟲、除草等農(nóng)藥方面的影響，而這就避免不了傳統(tǒng)化學(xué)農(nóng)藥的污染問(wèn)題；所以研發(fā)危害性能較小、污染能力較弱的植物性殺蟲劑就會(huì)受到越來(lái)越多學(xué)者的高度重視。大葉醉魚草中含有較高的木犀草素，而木犀草素在針對(duì)殺蟲這方面有著很大的用途。綜合諸多功能來(lái)看，大葉醉魚草的發(fā)展前景會(huì)越來(lái)越廣闊。本研究通過(guò)紫外分光光度法測(cè)定昭陽(yáng)區(qū)大葉醉魚草葉中木犀草素的含量，建立了大葉醉魚草葉中木犀草素的含量測(cè)定方法，為大葉醉魚草這一傳統(tǒng)中藥材的資源得到綜合利用提供了一定參考依據(jù)。參考文獻(xiàn)曉鐘.大葉醉魚草栽培要點(diǎn)[N].中國(guó)花卉報(bào),2019-08-29(A04).《全國(guó)中草藥匯編》編寫組.全國(guó)中草藥匯編(下冊(cè)),人民衛(wèi)生出版社,2004:941-942應(yīng)程.醉魚草屬兩種植物藥的鑒定與黃酮類成分含量測(cè)定[D].中南民族大學(xué),2012.張偉敏,張盛林,鐘耕.木犀草素的研究概況[J].中國(guó)食品添加劑,2005,(2):11-16.呂暢,王紅芳,閻雪瑩.木犀草素抗氧化作用研究進(jìn)展[J].黑龍江醫(yī)藥,2015,28(5):1019-1022.王月華,李愛(ài)峰,付崇羅.木犀草素抗腫瘤活性研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2016,27(7):1587-1590.趙長(zhǎng)祺,郭志義.木犀草素的藥理作用研究進(jìn)展[J].承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2015,32(02):148-150.宋雪嬌,劉曉琳,金安妍,等.木犀草素抗菌及消除耐藥作用的研究進(jìn)展[J].中國(guó)家禽,2015,37(17):44-46.陳娟,鄧敏,周煥,等.木犀草素抑制PKM2繼而促進(jìn)自噬誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡[J/OL].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志:1-9[2021-04-07]./kcms/detail/42.1204.R.20210407.1409.008.html.曹建,朱曉燃,楊振寰,等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討清肝化瘀顆粒治療肝癌的作用機(jī)制[J].中草藥,2021,52(07):2039-2052.彭艷輝,段智,李濤.木犀草素對(duì)K562細(xì)胞增殖與凋亡的影響及其機(jī)制[J].天津醫(yī)藥,2021,49(03):236-241.程艷剛,譚金燕,裴妙榮.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的木犀草素治療2型糖尿病作用機(jī)制研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2021,39(03):51-55+262.王學(xué)博,符攀峰,任紅娟,等.木犀草素聯(lián)合下調(diào)miR-425-5p對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[J].安徽醫(yī)學(xué),2021,42(02):119-123.詹壽發(fā),陳曄,樊有賦,等.大葉醉魚草提取物對(duì)黃脊竹蝗的生物活性[J].