幾種環(huán)境因子及藥物殘留對(duì)刺參體內(nèi)活性氧產(chǎn)生的影響研究.x

幾種環(huán)境因子及藥物殘留對(duì)刺參體內(nèi)活性氧產(chǎn)生的影響研究由于缺乏獲得性免疫,仿刺參等棘皮動(dòng)物主要依靠天然免疫進(jìn)行自身防御,保護(hù)宿主免受非己物質(zhì)如病菌、真菌和異物的侵害。仿刺參免疫系統(tǒng)中,體腔細(xì)胞的吞噬作用具有重要意義。而吞噬作用的關(guān)鍵就是吞噬過(guò)程中所分泌的相關(guān)溶酶體酶和活性氧類物質(zhì);活性氧在消除非己物質(zhì)如病菌、真菌和大顆粒物質(zhì)時(shí)發(fā)揮舉足輕重的作用。本文利用化學(xué)發(fā)光法,研究了酵母體外誘導(dǎo)仿刺參體腔細(xì)胞產(chǎn)生活性氧類物質(zhì)的過(guò)程。實(shí)驗(yàn)確定了仿刺參體腔細(xì)胞化學(xué)發(fā)光的最優(yōu)反應(yīng)體系:體腔細(xì)胞濃度在106/mL時(shí),酵母終濃度為0.5mg/mL,魯米諾終濃度為2.5×10-4mol/L。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示,檢測(cè)溫度對(duì)體腔細(xì)胞的影響比較大,理想檢測(cè)溫度在17℃左右。刺參注射脂多糖后,體腔細(xì)胞體外吞噬酵母時(shí)活性氧的產(chǎn)生先升高,在第9h達(dá)到峰值,然后降低。本文研究了環(huán)境因子溫度,鹽度和pH對(duì)仿刺參體腔細(xì)胞吞噬過(guò)程中活性氧產(chǎn)生的影響。不同環(huán)境條件處理暫養(yǎng)一周的仿刺參,于不同時(shí)間點(diǎn)抽取體腔液,然后用魯米諾化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)仿刺參體腔細(xì)胞體外吞噬酵母細(xì)胞時(shí)活性氧的產(chǎn)生。結(jié)果表明與對(duì)照組相比(17℃),6℃和26℃水溫中的仿刺參分別從第1d和第15d極大地增加了活性氧的產(chǎn)生。鹽度25和鹽度35兩組海參體腔細(xì)胞比對(duì)照組吞噬過(guò)程產(chǎn)生更多的活性氧,而鹽度16和40兩組第1d時(shí)活性氧的產(chǎn)生也顯著增強(qiáng)。較低pH同樣極大增強(qiáng)了吞噬作用中活性氧的產(chǎn)生。結(jié)果表明,溫度、鹽度和pH均可影響仿刺參體腔細(xì)胞吞噬過(guò)程中活性氧的產(chǎn)生。本文為進(jìn)一步研究仿刺參在適應(yīng)不同環(huán)境時(shí)的生理生化過(guò)程及無(wú)脊椎動(dòng)物免疫機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。水產(chǎn)動(dòng)物抗菌消炎類藥物已經(jīng)廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖。但由于抗菌藥物的亂用濫用給生態(tài)環(huán)境及人類健康帶來(lái)了極大的安全隱患。本實(shí)驗(yàn)設(shè)置仿刺參3組,分別連續(xù)3天注射呋喃唑酮、氯霉素和紅霉素,于不同時(shí)間抽取仿刺參體腔液,用魯米諾化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)體腔細(xì)胞經(jīng)酵母誘導(dǎo)后的化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象。結(jié)果顯示,整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,靜息狀態(tài)下,呋喃唑酮和紅霉素均抑制了體腔細(xì)胞活性氧的產(chǎn)生。注射紅霉素組,仿刺參體腔細(xì)胞經(jīng)酵母誘導(dǎo)的化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象均有所增強(qiáng),且最大值出現(xiàn)在第15天。注射呋喃唑酮后,仿刺參體腔細(xì)胞吞噬過(guò)程活性氧的產(chǎn)生先增強(qiáng),隨后在第七天時(shí)發(fā)光值低于對(duì)照