實(shí)驗(yàn)三 培養(yǎng)基的配制與滅菌

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培育基的制備與滅菌

1、了解培育基的配制原理，掌控制備培育基的過程。

2.掌控高壓蒸汽滅菌及干熱滅菌的方法及考前須知

二、試驗(yàn)原理：培育基是用人工方法，將多種物質(zhì)按微生物生長所需而調(diào)制成的一種營養(yǎng)基質(zhì)，用來分別和培育微生物。培育基可分為天然培育基、合成培育基和半合成培育基三類。依據(jù)是否含有凝固劑又可分為液體培育基、固體培育基(1.8-2.0%)、半固體培育基(0.30.5%),

凝固劑一般是瓊脂(洋菜),也有用硅膠與明膠。一般來說，培育基包括有水份、碳源、氮源、無機(jī)鹽類以及生長因素等五大類營養(yǎng)成份。此外還得有相宜的pH值，肯定的滲透壓(即濃度)以及氧化還原電位等。三、試驗(yàn)材料：三角瓶、試管、燒杯、分裝器、玻棒、天平、藥匙、pH試紙，搪瓷杯、量筒、紗布、棉花、橡皮筋、牛皮紙、角匙、稱量紙、各種生化試劑等。

1、葡萄糖發(fā)酵培育基蛋白胨10gNaCl5g葡萄糖10g水1000mL1.6%溴甲酚紫水pH7.4-7.6將蛋白胨、NaCl、葡萄糖加入水中，加熱調(diào)pH至7.4-7.6,加入1.6%溴甲酚紫水溶液。分裝試管內(nèi)倒置一杜氏小管，塞上硅膠塞，滅菌。2、乳糖發(fā)酵培育基蛋白胨20g乳糖10g水1000mL1.6%溴甲酚紫水溶液1mLpH7.4-7.6將蛋白胨、乳糖加入水中，加熱調(diào)pH至7.4-7.6,加入1.6%溴甲酚紫水溶液。分裝試管內(nèi)倒置一杜氏小管，塞上硅膠塞，滅菌。3、M.R.與V.P.試驗(yàn)培育基蛋白胨5g葡萄糖5gK2HPO45g水1000mL分裝試管，塞上硅膠塞，滅菌。

4、明膠培育基牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl5gpH7.0-7.2分裝試管，塞上硅膠塞，滅菌。5、硝酸鹽培育基明膠150g水1000mL

蛋白胨10gNaNO31g水1000mLpH7.6分裝試管，塞上硅膠塞，滅菌。6、產(chǎn)生H2S試驗(yàn)的培育基

牛肉膏3g酵母浸膏3g蛋白胨10gFeSO40.2gNaCl5g硫代硫酸鈉0.3g瓊脂12g水1000mLpH7.4分裝試管，塞上硅膠塞，滅菌。

7、吲哚試驗(yàn)培育基

牛肉膏5g蛋白胨10gNaCl5g分裝試管，塞上硅膠塞，滅菌。8、檸檬酸鹽培育基

水1000mLpH7.2

檸檬酸鈉5gNaCl5gMgSO42gK2HPO41g(NH4)2HPO41g瓊脂20g1%溴百里酚蘭液8mL水1000mLpH6.8調(diào)pH后，加入1%溴百里酚蘭液，分裝試管，塞上硅膠塞，滅菌。9、淀粉培育基

牛肉膏3g蛋白胨5gNaCl5g15g水1000mLpH7.2分裝三角瓶，塞上硅膠塞，滅菌。

可溶性淀粉2g瓊脂

四、方法步驟1、培育基的配制：稱藥溶解加指示劑分裝塞棉花高壓蒸汽滅菌2、高壓蒸汽滅菌詳細(xì)操作步驟：調(diào)pH裝入竹簍

1.加入足夠量的水于滅菌鍋中(至水位線)。2.擺入上述包裝好的待滅菌培育基，但不能擺得太擠，以免影響蒸汽通過和滅菌

效果。3.加蓋旋緊螺旋，使蒸汽鍋密閉不漏氣(假設(shè)為手提式應(yīng)對(duì)角螺旋勻稱旋緊)。

4.打開排氣閥，通入熱源，自開始產(chǎn)生蒸汽至蒸汽猛烈的噴出而無空氣時(shí)關(guān)緊放氣閥。5.升溫升壓：繼續(xù)加熱，至壓力計(jì)讀數(shù)達(dá)0.1Mpa(121.5)后保持30分鐘。6.到時(shí)間后停止加熱，待壓力下降至常壓后，漸漸打開排汽口，然后打開鍋蓋，出滅菌物。留意取在壓力未降至0時(shí)，切勿打開鍋蓋，否那么突然降壓，會(huì)招致玻璃器皿破損或培育基沸騰，沾濕棉塞沖出管外7.取出滅菌物后，假設(shè)試管應(yīng)在瓊脂未凝固之時(shí)將試管擺成斜面