三角褐指藻RNA干擾序列的研究的開題報告

三角褐指藻RNA干擾序列的研究的開題報告題目：基于RNA干擾技術(shù)構(gòu)建三角褐指藻RNA干擾序列用于基因功能研究背景和意義：三角褐指藻（Phaeodactylumtricornutum）是一種重要的海洋單細胞藻類，具有高生物量、多種生理活性物質(zhì)和生態(tài)環(huán)境適應(yīng)性等特點。然而，由于其基因組大小達到34兆堿基對，基因功能的研究和利用受到了限制。RNA干擾技術(shù)作為一種基因沉默技術(shù)，可以通過人工合成的RNA引導序列對目標基因進行特異性沉默，從而實現(xiàn)對基因功能進行研究。當前，RNA干擾技術(shù)已廣泛應(yīng)用于多個生物領(lǐng)域，但在三角褐指藻的研究中卻鮮有報道。因此，本研究旨在構(gòu)建可用于三角褐指藻基因功能研究的RNA干擾序列，為深入探究三角褐指藻的生物學特性和應(yīng)用提供技術(shù)支持。研究內(nèi)容：1.利用生物信息學方法篩選適合的RNA干擾序列設(shè)計目標基因；2.采用基因克隆技術(shù)構(gòu)建RNA干擾載體，并通過轉(zhuǎn)化實驗在三角褐指藻中表達RNA干擾序列；3.對RNA干擾序列在三角褐指藻中的沉默效果進行測定和分析；4.通過系統(tǒng)生物學方法分析RNA干擾后的基因表達變化及生物功能。預(yù)期成果：1.成功構(gòu)建三角褐指藻RNA干擾序列；2.系統(tǒng)研究RNA干擾后的基因表達變化及生物功能；3.為三角褐指藻基因功能研究提供技術(shù)支持。研究難點：1.篩選適合的RNA干擾序列設(shè)計目標基因；2.構(gòu)建可在三角褐指藻中表達的RNA干擾載體；3.有效地將RNA干擾載體轉(zhuǎn)化至三角褐指藻中；4.系統(tǒng)分析RNA干擾后的基因表達變化及生物功能。研究方法：1.生物信息學分析方法；2.基因克隆技術(shù)；3.原代質(zhì)粒轉(zhuǎn)化技術(shù)；4.Real-timePCR；5.基因組學及系統(tǒng)生物學方法。時間安排：第一年：確定RNA干擾序列設(shè)計目標基因，構(gòu)建RNA干擾載體；第二年：實驗室驗證RNA干擾載體在三角褐指藻中的表達效果和沉默效果；第三年：分析RNA干擾后的基因表達變化及生物功能，并進行數(shù)據(jù)整合和論文撰稿。參考文獻：1.LiuJ,SunZ,GerkenHG.RNAinterferenceofdiatomPhaeodactylumtricornutumusingartificialmiRNAs.PLoSOne.2014;9(2):e89938.2.WangG,HuQ,SommerfeldM,ChenF.RNAi-mediatedsilencingofphosphoenolpyruvatecarboxylaseincreaseslipidaccumulationinthediatomPhaeodactylumtricornutum.BiotechnolBioeng.2014;111(2):314-21.3.LiZ,HeC,ZouS,GaoY,SongR,FengY,etal.EncapsulationofamiRNA-21inhibitorinnanoparticlesenhancesradiosensitivit