微生物常用染色法

關于微生物常用染色法細菌染色的一般程序涂片(干燥)---固定---染色---脫色---復染第2頁,共23頁，2024年2月25日，星期天涂片制備血液,分泌物,排泄物,穿刺液和液體培養(yǎng)物,直接在載玻上作薄涂片.固體培養(yǎng)基上的菌落或菌苔的制片,用接種環(huán)取1環(huán)9g/L氯化鈉溶液置載玻片中央.再用無菌接種環(huán)取少量的培養(yǎng)物在氯化鈉溶液中磨勻,涂成人1CM*1CM大小的涂面.置室溫下自然干燥或火慢慢烘干.第3頁,共23頁，2024年2月25日，星期天固定目的是殺菌.凝固細菌蛋白及結構,便于染色.避免在水洗過程中被水沖掉.通常用火焰加熱固定,將涂片在火焰中迅速通過3次,以手背皮膚接觸玻片不燙為佳.第4頁,共23頁，2024年2月25日，星期天染色根據檢驗目的不同,選擇不同染色方法進行染色.染色時滴加染色液以覆蓋涂面為佳，染色時間則隨時間而定第5頁,共23頁，2024年2月25日，星期天媒染使染料固定于被染物引起細胞膜通透性改變.常用明礬,鞣酸,金屬鹽和碘作為媒染劑.也可用加熱法促進著色.第6頁,共23頁，2024年2月25日，星期天脫色使已著色的被染物脫去顏色.常用乙醇,丙酮等作為脫色劑.脫色劑可以查出細菌與染料結合的穩(wěn)定程度,作為鑒別染色用.第7頁,共23頁，2024年2月25日，星期天復染復染液作為復染以便觀察,復染不宜太強,以免掩蓋初染的顏色.第8頁,共23頁，2024年2月25日，星期天常用染色法單染色法只用一種染料染色,常用呂氏美藍,結晶紫和稀釋石碳酸復紅等.復染色法用兩種或以上的不同顏色的染料進行染色，可將不同細菌或同一細菌的不同結構染成不同顏色第9頁,共23頁，2024年2月25日，星期天革蘭染色細菌涂片經火焰固定,加結晶紫染液1min,清水沖去染液.加碘液媒染1min,水洗,甩干.用95%乙醇脫色,輕輕搖動約30S,至無紫色洗落為止,水洗,甩干.加稀釋石碳酸復紅或沙黃染液數滴進行復染,約30S,水洗.干后顯微鏡下鏡檢觀察結果.革蘭陽性菌染成紫色,革蘭陰性為紅色.第10頁,共23頁，2024年2月25日，星期天BASO革蘭染液第11頁,共23頁，2024年2月25日，星期天抗酸染色萋__納抗酸染色法步驟:細菌涂片經火焰固定,加石碳酸復紅溶液,加熱至有蒸氣出現,切不可沸騰.染液因蒸發(fā)減少時,應隨時補充,防止染液蒸干.持續(xù)5min,水洗,甩干.滴加3%鹽酸乙醇脫色,不時搖動玻片至紅色脫落為止,水洗,甩干.加呂氏美藍復染液數滴復染1min,水洗.干后置顯微鏡下鏡檢.

抗酸桿菌呈紅色,非抗酸桿菌呈藍色.第12頁,共23頁，2024年2月25日，星期天BASO抗酸染液第13頁,共23頁，2024年2月25日，星期天染色法原理單染色可選用任何一種堿性染料使細菌著色,觀察到不同細菌形態(tài)大小及排列的特征.第14頁,共23頁，2024年2月25日，星期天染色法原理復合染色用兩種以上的染料染色,不同的細菌著色不同,不但通過形態(tài)及排列,可通過染色反應性來鑒別細菌,稱為鑒別染色.常用有革蘭染色和抗酸染色.第15頁,共23頁，2024年2月25日，星期天革蘭染色染色方法:先以結晶紫液初染,后以盧戈氏碘液媒染,使脫色的細菌顯紅色,為G-菌.末脫色細菌呈紫色為G+菌.第16頁,共23頁，2024年2月25日，星期天涂片見G-桿菌，形似腸桿菌第17頁,共23頁，2024年2月25日，星期天涂片見G+球菌，呈葡萄狀排列第18頁,共23頁，2024年2月25日，星期天涂片見G+球菌，呈鏈狀排列第19頁,共23頁，2024年2月25日，星期天染色原理:最廣泛接受觀點認為與細菌細胞壁結構及化學組成有關.G+菌細菌壁結構致密,肽聚糖層厚,脂質含量少,形成結晶紫_碘復合物.脫色過程中,雖然溶解細菌壁脂質成分形成小孔.脫水作用使細胞壁收縮又構成屏障,阻止結晶紫—碘復合物被乙醇溶出,細菌保持紫色.G-菌細菌壁疏松,肽聚糖層較薄,脂質含量高,乙醇溶解脂質,經復染細菌呈紅色.第20頁,共23頁，2024年2月25日，星期天應用用革蘭氏染色將幾乎所有細菌分為G+和G-細菌兩部分.不同染色反應細菌細胞壁結構差異較大,致病性各有特點,對不同抗生素的敏感性也有差別.在抗生素敏感試驗中有直接的指導意義.第21頁,共23頁，2024年2月25日，星期天抗