腸桿菌科細(xì)菌鑒定

關(guān)于腸桿菌科細(xì)菌鑒定腸桿菌科細(xì)菌一般性鑒定程序未知腸桿菌分離培養(yǎng)挑取可疑菌落純培養(yǎng)革蘭染色鏡檢生化實(shí)驗(yàn)鑒定藥敏試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)第2頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天一.分離培養(yǎng)無(wú)菌操作用接種環(huán)提取可疑腸道桿菌，在EMB上分區(qū)劃線(xiàn)接種。送37℃培養(yǎng)24小時(shí)。第3頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天二.純培養(yǎng)（一）確定可疑菌落。1.觀察EMB表面的菌落特征：（1）.凡紫黑色的單個(gè)菌落可初步定為可疑大腸桿菌菌落，標(biāo)號(hào)為。（2）.凡光滑無(wú)色透明的單個(gè)小菌落可初步定為痢疾桿菌屬菌落或傷寒桿菌屬菌落，標(biāo)號(hào)為。第4頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天（二）.可疑菌落純化培養(yǎng)

無(wú)菌操作用接種針挑取已編號(hào)可疑菌落，分別接種在雙糖鐵高層瓊脂斜面和半固體培養(yǎng)基上，送37℃溫箱培養(yǎng)24~48小時(shí)。（三）.雙糖鐵瓊脂斜面培養(yǎng)特征觀察與動(dòng)力觀察

初步確定為傷寒桿菌初步確定為大腸桿菌第5頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天革蘭染色鏡檢挑取純培養(yǎng)后的可疑菌落進(jìn)行革蘭染色，確定為革蘭陰性菌后進(jìn)行細(xì)菌的生化培養(yǎng)基接種。革蘭陰性菌短桿狀，分散排列第6頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天生化試驗(yàn)鑒定將需全面鑒定的可疑細(xì)菌從雙糖鐵瓊脂斜面挑菌分別接種于各種生化反應(yīng)培養(yǎng)基。每株可疑菌需接種的培養(yǎng)基計(jì)有糖發(fā)酵管（葡.乳.麥.甘.蔗）各1支，蛋白胨水1支（I），葡萄糖蛋白胨水2支（M.Vp），枸櫞酸鹽瓊脂斜面1支（C）。接種完畢后，試管置于試管架上，送37℃溫箱培養(yǎng)24~48小時(shí)后觀察記錄結(jié)果。第7頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天1.不變黃，小管無(wú)氣泡：糖發(fā)酵為陰性（—）。2.黃色，小管有氣泡（產(chǎn)酸，產(chǎn)氣）：糖發(fā)酵為陽(yáng)性（+）。黃色，小管無(wú)氣泡（產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣）：糖發(fā)酵為陽(yáng)性（+）。糖發(fā)酵試驗(yàn)第8頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天結(jié)果：紅色為吲哚試驗(yàn)陽(yáng)性（+），無(wú)變化為陰性（-）紅色為甲基紅試驗(yàn)陽(yáng)性（+），桔黃色為陰性（-）吲哚試驗(yàn)(I)甲基紅試驗(yàn)(MR)試驗(yàn)第9頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天VP試驗(yàn)枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)(C)斜面上有菌苔，且變成深藍(lán)色，為陽(yáng)性；斜面上無(wú)菌苔，仍是綠色為陰性。紅色為VP陽(yáng)性。第10頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天表1腸桿菌科細(xì)菌生化反應(yīng)鑒定結(jié)果記錄表表2腸桿菌科細(xì)菌生化反應(yīng)鑒定數(shù)據(jù)參考表第11頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天

實(shí)驗(yàn)原理：含有定量抗菌藥物的紙片貼在己接種測(cè)試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后便不斷地向紙片周?chē)鷧^(qū)域擴(kuò)散，形成遞減的梯度濃度。在紙片周?chē)志鷿舛确秶鷥?nèi)的細(xì)菌的生長(zhǎng)被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映測(cè)試菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度，并與該藥對(duì)測(cè)試菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負(fù)相關(guān)，即抑菌圈愈大，MIC愈小。

藥物敏感試驗(yàn)第12頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)方法（一）接種肉湯培養(yǎng)基（二）菌液均勻涂抹平板培養(yǎng)基（三）分別夾取青霉素、鏈霉素、慶大霉素和頭孢拉定四種抗生素紙片貼在平板上進(jìn)行培養(yǎng)第13頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天實(shí)驗(yàn)結(jié)果第14頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25日，星期天●實(shí)驗(yàn)結(jié)果

三種菌對(duì)鏈霉素和慶大霉素敏感，但對(duì)青霉素和頭孢拉定耐藥。第15頁(yè),共17頁(yè)，2024年2月25