《植物提取物抗氧化活性評(píng)價(jià) 薄層色譜法》國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)編制說(shuō)明

《植物提取物抗氧化活性評(píng)價(jià)薄層色

譜法》國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)編制說(shuō)明

1任務(wù)來(lái)源

本國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的制定任務(wù)是根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)下達(dá)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)制定

計(jì)劃《植物提取物抗氧化活性評(píng)價(jià)薄層色譜法》項(xiàng)目（計(jì)劃號(hào)：20205075-T-424）

起草。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃《植物提取物抗氧化活性評(píng)價(jià)薄層色譜法》由424-cnis（中

國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院）歸口上報(bào)及執(zhí)行，主管部門(mén)為國(guó)家市場(chǎng)監(jiān)督管理總局(質(zhì)檢)。

本標(biāo)準(zhǔn)由江南大學(xué)，南昌大學(xué)，國(guó)家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中心，北京理化分析測(cè)

試中心、中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院、中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院等單位共同起草。本標(biāo)準(zhǔn)主

要起草人：陳益勝、徐學(xué)明、金征宇、席興軍、蘭韜、陶紅、黃彩虹、舒藍(lán)萍

等。

2起草的目的意義

2.1企業(yè)產(chǎn)品開(kāi)發(fā)和質(zhì)量控制的需要

抗氧化是抗衰老、抗疲勞、抗炎等生物活性的重要基礎(chǔ)。絕大部分以植物提

取物為原料的功能食品都含有大量抗氧化活物質(zhì)，例如蘆丁、槲皮素、花青素、

茶多酚等。目前，我國(guó)生產(chǎn)具有抗氧化功能產(chǎn)品（藥品、食品和保健品等）的

規(guī)模以上企業(yè)多達(dá)2000多家，已經(jīng)形成了2300多億元的產(chǎn)業(yè)規(guī)模。這些產(chǎn)品

的原料大部分來(lái)自農(nóng)業(yè)廢棄物。

槐米是目前最具有抗氧化活性潛力的農(nóng)業(yè)廢棄物之一?；泵资腔睒?shù)花蕾干燥

后的產(chǎn)物，其中含有豐富的黃酮、皂苷和甾醇等生物活性物質(zhì)。蘆?。≧utin），

又稱(chēng)為維生素P，是槐米中主要的黃酮類(lèi)化合物，具有良好的抗氧化活性。不

僅如此，蘆丁還具有降血清膽固醇、降血壓、降血脂、降血糖和提高免疫力等

多種保健功效。例如，蘆丁可以通過(guò)清除高血糖引發(fā)的過(guò)氧化物保護(hù)胰島細(xì)胞

免受損傷，從而降低II型糖尿病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。因此蘆丁是一種極具開(kāi)發(fā)前景的

糖尿病藥物治療先導(dǎo)化合物。我國(guó)槐樹(shù)資源豐富，但是槐米的綜合利用度很低。

因此，以槐米為資源開(kāi)發(fā)以蘆丁、槲皮素等為代表的抗氧化活性物質(zhì)可以廣泛

地應(yīng)用到食品、保健品和藥品工業(yè)領(lǐng)域，形成高附加值產(chǎn)品，不僅具有巨大的

經(jīng)濟(jì)價(jià)值，而且能夠?qū)崿F(xiàn)廢棄資源利用。由此可見(jiàn)，因此，測(cè)定抗氧化活性的

高低已經(jīng)成為評(píng)價(jià)植物提取物產(chǎn)品開(kāi)發(fā)和質(zhì)量控制的一個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

1

2.2制定完善國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的需要

目前，植物提取物中抗氧化活性評(píng)價(jià)方法主要根據(jù)受試對(duì)象分為體內(nèi)和體外

二大類(lèi)。體內(nèi)方法以丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱苷肽等為指標(biāo)，測(cè)定其含

量來(lái)評(píng)價(jià)體內(nèi)抗氧化活性的高低。體外抗氧化評(píng)價(jià)體系則以自由基清除法、氧

化還原法為主。體內(nèi)方法的優(yōu)勢(shì)是更接近人體結(jié)果，但一般費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且只能

反映某一指標(biāo)活性的高低。體外方法則很好地彌補(bǔ)了這一缺點(diǎn)。其中，1,1-二

苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法是應(yīng)用最廣泛的抗氧化測(cè)定方法。必須注意的是，

常規(guī)的比色皿模式的DPPH測(cè)定法將DPPH溶液與樣品直接混合，因此檢測(cè)得

到的是樣品總的抗氧化活性。然而，植物提取物原料通常是多元抗氧化活性物

質(zhì)混合物。當(dāng)這些物質(zhì)混合在一起被DPPH法測(cè)定的時(shí)候，相互之間可能存在

抗氧化拮抗或協(xié)同的效應(yīng)，導(dǎo)致檢測(cè)評(píng)估結(jié)果偏低或者偏高。此外，在很多評(píng)

價(jià)任務(wù)中，僅僅測(cè)定混合物樣品的總抗氧化性常規(guī)的抗氧化活性評(píng)價(jià)方法基于

DPPH分子與自由基混合后體系的顏色變化，利用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)監(jiān)測(cè)其

吸光度值變化可以實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中總抗氧化活性的定量分析。但必須注意的是，

這種抗氧化評(píng)價(jià)方法有一個(gè)固有的缺點(diǎn)：檢測(cè)選擇性差。更確切地說(shuō)，當(dāng)樣品

中含有兩種或者兩種以上的抗氧化活性物質(zhì)的時(shí)候，分析結(jié)果無(wú)法區(qū)分每一種

物質(zhì)的抗氧化活性高低。而基于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的抗氧化評(píng)價(jià)方法時(shí)間長(zhǎng)、成本

高且誤差大，因此難以形成國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

薄層色譜是近年來(lái)廣泛應(yīng)用到植物提取物分析的一項(xiàng)色譜分離技術(shù)。建立在

薄層色譜和DPPH顯色反應(yīng)聯(lián)用基礎(chǔ)上的抗氧化分析方法兼?zhèn)溥x擇性高和通用

性好的優(yōu)點(diǎn)。更重要的是，薄層色譜是目前唯一能與生化反應(yīng)直接聯(lián)用的色譜

工具。和傳統(tǒng)的試管法測(cè)試不同，薄層色譜的色譜分離結(jié)果開(kāi)放性和反應(yīng)載體

功能可以從根本上解決基于DPPH變色反應(yīng)的抗氧化評(píng)估方法選擇性差的問(wèn)

題。薄層分離使原本混在一起的不同抗氧化物質(zhì)按分子結(jié)構(gòu)的差異移動(dòng)到薄層

板上不同的位置形成物理隔離，因而可以有效避免各種物質(zhì)之間可存在的協(xié)同

或拮抗效應(yīng)；隨后，通過(guò)浸漬方式與薄層板耦合的DPPH溶液可以方便地實(shí)現(xiàn)

對(duì)混合物中不同抗氧化組分的同時(shí)評(píng)估。因此，相對(duì)于傳統(tǒng)的方法，建立在薄

層色譜和DPPH顯色反應(yīng)基礎(chǔ)上的抗氧化評(píng)價(jià)方法更加可靠，且更易形成標(biāo)準(zhǔn)。

2

3薄層色譜研究、應(yīng)用與標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)狀

3.1薄層色譜研究

薄層色譜已發(fā)展具備一整套完整的儀器化操作平臺(tái)，在點(diǎn)樣、展開(kāi)、浸漬衍

生和掃描定量過(guò)程中均實(shí)現(xiàn)了半自動(dòng)甚至全自動(dòng)化，顯著擴(kuò)展了應(yīng)用范圍。其

中，半自動(dòng)薄層點(diǎn)樣儀在高壓氮?dú)饬鞯膮f(xié)助下，點(diǎn)樣針內(nèi)的液體樣品以極細(xì)的

液流形式被吹掃至色譜板上，點(diǎn)樣體積通常在1~10μL范圍內(nèi)。通過(guò)非接觸吹

掃法進(jìn)行條帶狀點(diǎn)樣，可以顯著提高分離后相鄰斑點(diǎn)的分辨率。薄層色譜分析

過(guò)程中，所有步驟獨(dú)立并配備相對(duì)應(yīng)設(shè)備，可同時(shí)進(jìn)行操作和分析，不僅提高

了工作效率，也增加了儀器選擇的靈活性。儀器化的操作平臺(tái)在很大程度上提

高了色譜分離的靈敏度及色譜展開(kāi)圖的分辨率，同時(shí)可視化成像后的光密度掃

描提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性

3.2薄層色譜在植物提取物活性評(píng)價(jià)方面的應(yīng)用

基于儀器化薄層色譜和生物傳感反應(yīng)的活性評(píng)價(jià)方法已經(jīng)成為分析化學(xué)領(lǐng)

域一個(gè)新的熱點(diǎn)前沿。與柱色譜的閉環(huán)工作原理不同，薄層色譜是一個(gè)去中心

化、開(kāi)放的分析系統(tǒng)，分離過(guò)程結(jié)束后分離結(jié)果被保留在色譜板上而非廢液瓶

中。這一獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)使得薄層色譜的分離結(jié)果可以方便地與很多無(wú)法與傳統(tǒng)柱

色譜系統(tǒng)兼容的檢測(cè)手段實(shí)現(xiàn)無(wú)障礙融合。因此，薄層色譜不僅是一種通量大、

操作簡(jiǎn)便和靈活性高的色譜工具，而且還可以作為多種離線檢測(cè)方法高效集成

融合的分析平臺(tái)，在分析通量、簡(jiǎn)便性、精密度和適用范圍等方面達(dá)到了較為

理想的平衡，因此在植物提取物活性評(píng)價(jià)方面有良好的應(yīng)用前景。

不過(guò)，薄層色譜在食物提取物活性成分檢測(cè)和功能評(píng)價(jià)方面的應(yīng)用還處于起

步階段，雖然有一些文獻(xiàn)報(bào)道，但還缺乏標(biāo)準(zhǔn)化的研究。

3.3薄層色譜標(biāo)準(zhǔn)

目前可查詢(xún)到的關(guān)于薄層色譜技術(shù)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)有兩項(xiàng)：《配合飼料中T-2

毒素的測(cè)定薄層色譜法》和《蜂蜜中高果糖淀粉糖漿測(cè)定方法薄層色譜法》。

未查到將薄層色譜與生物傳感聯(lián)合用于植物提取物中功效成分活性評(píng)估的國(guó)家

標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和地方標(biāo)準(zhǔn)。這一缺失，使得企業(yè)在利用植物廢棄物作為原料

生產(chǎn)抗氧化功效產(chǎn)品及其質(zhì)量控制缺乏技術(shù)支撐，無(wú)標(biāo)準(zhǔn)可用。

3

因此，有必要盡快制定《植物提取物抗氧化活性評(píng)價(jià)薄層色譜法》國(guó)家標(biāo)

準(zhǔn)，以滿足相關(guān)企業(yè)生產(chǎn)和品控的需要。

4主要起草過(guò)程

4.1成立標(biāo)準(zhǔn)制定工作組

國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)項(xiàng)目立項(xiàng)后，2017年11月10日在北京市西藏大廈召開(kāi)了國(guó)

家標(biāo)準(zhǔn)《植物提取物抗氧化活性評(píng)價(jià)薄層色譜法》第一次工作會(huì)。參加單位有

江南大學(xué)、中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院等。會(huì)議成立了由江南大學(xué)、中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院

等單位參加的標(biāo)準(zhǔn)工作組，主要由從事標(biāo)準(zhǔn)制修訂、儀器分析、具有豐富技術(shù)

經(jīng)驗(yàn)的專(zhuān)業(yè)研究人員組成，工作組制定了初步的標(biāo)準(zhǔn)編制工作計(jì)劃。

4.2確定工作計(jì)劃和標(biāo)準(zhǔn)制定原則

按照工作任務(wù)要求，工作組制定了標(biāo)準(zhǔn)起草工作計(jì)劃和任務(wù)分工。

在充分研究與討論的基礎(chǔ)上，制定了標(biāo)準(zhǔn)制定原則：

（1）先進(jìn)性：其可靠性、準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度達(dá)到較高水平。

（2）適用性：要適應(yīng)我國(guó)植物提取物產(chǎn)業(yè)發(fā)展的要求。

（3）可操作性：符合我國(guó)目前檢測(cè)儀器設(shè)備和試劑、材料的供應(yīng)條件。

（4）實(shí)用性：符合檢測(cè)從業(yè)人員的技術(shù)水平，能被國(guó)內(nèi)主要的環(huán)境分析實(shí)

驗(yàn)室所使用并達(dá)到所規(guī)定的要求。要有利于槐米提取物及其制品質(zhì)量，為企業(yè)

生產(chǎn)和品控控制部門(mén)服務(wù)。

4.3查詢(xún)國(guó)內(nèi)外相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)資料

2017年，開(kāi)始開(kāi)展“植物提取物抗氧化活性評(píng)價(jià)薄層色譜法”方法研究。

由于在現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)、團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)和企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中，均無(wú)相

應(yīng)的測(cè)定方法標(biāo)準(zhǔn)，所以我們查閱相關(guān)文獻(xiàn)并開(kāi)展研究工作。分析代表性抗氧

化活性化合物的分子結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，優(yōu)化色譜分離和DPPH顯色等關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)。

該方法的要點(diǎn)有：（1）以甲醇為溶劑提取槐米提取物中的抗氧化活性成分，（2）

通過(guò)超聲進(jìn)行輔助提取，（3）采用硅膠薄層板為固定相，（4）乙酸乙酯+乙酸+

甲酸+水10+1.1+1.1+2mL為流動(dòng)相，（5）浸漬DPPH溶液顯色15分鐘，（6）

熒光模式，D2&W燈，激發(fā)光波長(zhǎng)530nm，無(wú)濾光片，狹縫尺寸3.00×0.30mm

(Micro)，掃描速度100mm/s,數(shù)據(jù)分辨率100μm/step。

4

中國(guó)知網(wǎng)、萬(wàn)方等中文數(shù)據(jù)庫(kù)中查詢(xún)到的公開(kāi)發(fā)表文獻(xiàn)中，關(guān)于植物提取物

抗氧化活性的測(cè)定幾乎都是依據(jù)或參考比色皿反應(yīng)DPPH變色的方法，可靠性

和實(shí)用性有限。通過(guò)Sciencedirect和AmericaChemistryAssociation等國(guó)外科研

數(shù)據(jù)局查詢(xún)，可以查到少量以薄層色譜為平臺(tái)，結(jié)合DPPH反應(yīng)檢測(cè)混合物中

不同抗氧化物質(zhì)功效活性的文獻(xiàn)。

薄層色譜評(píng)價(jià)槐米提取物中抗氧化物質(zhì)功效活性的方法具有選擇性好、可靠

性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，考慮到標(biāo)準(zhǔn)的適用性與可操作性，因此確定采用薄層

色譜與DPPH反應(yīng)顯色相結(jié)合的方法評(píng)價(jià)植物提取物抗氧化活性。以槐米提取

物為樣品，經(jīng)過(guò)初步試驗(yàn)，證明方法是可行的。而后對(duì)方法進(jìn)行優(yōu)化，對(duì)方法

進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果表明方法的準(zhǔn)確性、回收率、精密度等方面都能達(dá)到國(guó)家可標(biāo)

準(zhǔn)的要求，并且基本符合制定國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的條件，并于2020年向國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理

委員會(huì)提出立項(xiàng)申請(qǐng)。

4.4研究建立標(biāo)準(zhǔn)方法和開(kāi)展條件實(shí)驗(yàn)

標(biāo)準(zhǔn)工作組按照計(jì)劃任務(wù)書(shū)的要求，結(jié)合制定標(biāo)準(zhǔn)的要求，研究建立標(biāo)準(zhǔn)方

法的實(shí)驗(yàn)方案，并進(jìn)行方法前處理?xiàng)l件的選擇、儀器條件的確定和方法精密度、

準(zhǔn)確度及檢出限的測(cè)定等試驗(yàn)，并研究制定抗氧化活性指數(shù)的計(jì)算方法。

采集樣品后，開(kāi)始開(kāi)展實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證工作，建立槐米提取物中抗氧化活性成分

的薄層色譜分離和DPPH顯色方法，包括流動(dòng)相選擇、光密度參數(shù)設(shè)定、線性

范圍、相關(guān)系數(shù)、加標(biāo)回收率、準(zhǔn)確度、精密度、檢出限、定量限等；在光密

度掃描檢測(cè)數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上，提出抗氧化指數(shù)的計(jì)算方法。

4.5方法驗(yàn)證

2019年10～12月，由5家單位對(duì)“植物提取物抗氧化活性評(píng)價(jià)薄層色譜

法”進(jìn)行驗(yàn)證，分別是南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、浙江科技學(xué)

院、農(nóng)業(yè)部生物毒素檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、甘肅省天然藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和中國(guó)科學(xué)

院過(guò)程工程研究所生化工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，通過(guò)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)技術(shù)確認(rèn)外部實(shí)驗(yàn)

室試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4.6形成標(biāo)準(zhǔn)討論稿和編制說(shuō)明

2019年7月5日，起草工作組組織相關(guān)單位和專(zhuān)家，在山東青島中國(guó)科學(xué)

院蘭州化學(xué)物理研究所召開(kāi)第二次標(biāo)準(zhǔn)起草工作會(huì)。參會(huì)單位包括江南大學(xué)、

5

中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院、中國(guó)科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所、北京化工大學(xué)、浙江大

學(xué)等。

與會(huì)專(zhuān)家對(duì)《植物提取物抗氧化活性評(píng)價(jià)薄層色譜法》標(biāo)準(zhǔn)草案中的英文

名稱(chēng)、范圍、術(shù)語(yǔ)和定義、基本要求、主要技術(shù)指標(biāo)、附錄等章條提出了詳細(xì)

的意見(jiàn)，會(huì)后根據(jù)修改意見(jiàn)形成了《植物提取物抗氧化活性評(píng)價(jià)薄層色譜法》

標(biāo)準(zhǔn)討論稿及其編制說(shuō)明。

4.7形成標(biāo)準(zhǔn)草案

標(biāo)準(zhǔn)起草工作組查閱、收集和整理了國(guó)內(nèi)外有關(guān)研究進(jìn)展和專(zhuān)利、標(biāo)準(zhǔn)、法

規(guī)等文獻(xiàn)資料，掌握了相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的現(xiàn)狀；對(duì)文獻(xiàn)中抗氧化活性物質(zhì)測(cè)定方法進(jìn)

行了對(duì)比和總結(jié)，為標(biāo)準(zhǔn)文本的編制奠定理論基礎(chǔ)。在《植物提取物抗氧化活

性評(píng)價(jià)薄層色譜法》國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)第一次起草工作會(huì)議的基礎(chǔ)上，起草工作組相關(guān)

單位共同討論起草形成了《植物提取物抗氧化活性評(píng)價(jià)薄層色譜法》國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

的技術(shù)框架和主要內(nèi)容，初步形成了《植物提取物抗氧化活性評(píng)價(jià)薄層色譜法》

標(biāo)準(zhǔn)草案。

4.8形成標(biāo)準(zhǔn)征求意見(jiàn)稿和編制說(shuō)明

在前期工作的基礎(chǔ)上，起草工作組組織相關(guān)單位和專(zhuān)家于2019年10月22

日在北京中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院召開(kāi)第三次標(biāo)準(zhǔn)起草工作會(huì)。參會(huì)單位包括江南大

學(xué)、中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院、北京化工大學(xué)、浙江大學(xué)等。與會(huì)成員認(rèn)真討論《植

物提取物抗氧化活性評(píng)價(jià)薄層色譜法》標(biāo)準(zhǔn)討論稿后，根據(jù)討論結(jié)果修改形成

了《植物提取物抗氧化活性評(píng)價(jià)薄層色譜法》征求意見(jiàn)稿及編制說(shuō)明。會(huì)議同

時(shí)討論了下一階段征求意見(jiàn)的單位和專(zhuān)家名單。

4.9征求意見(jiàn)并形成標(biāo)準(zhǔn)送審稿和編制說(shuō)明

2020年月日-2020年月日，起草工作組根據(jù)討論的專(zhuān)家和單位名單，分

別向相關(guān)的行業(yè)主管部門(mén)、科研機(jī)構(gòu)、檢測(cè)部門(mén)和企業(yè)等30個(gè)單位和專(zhuān)家發(fā)出

了標(biāo)準(zhǔn)征求意見(jiàn)稿，向相關(guān)單位和專(zhuān)家征求標(biāo)準(zhǔn)修改意見(jiàn)。截止到2019年月日，

共收集到中科院過(guò)程所、…等25家科研機(jī)構(gòu)、檢測(cè)機(jī)構(gòu)、管理部門(mén)、生產(chǎn)企業(yè)

等單位提出的反饋意見(jiàn)40條。起草工作組對(duì)提出的意見(jiàn)經(jīng)過(guò)反復(fù)研究、討論和

處理后，修改形成了《植物提取物抗氧化活性評(píng)價(jià)薄層色譜法》送審稿及編制

說(shuō)明。具體意見(jiàn)匯總和處理表見(jiàn)《植物提取物抗氧化活性評(píng)價(jià)薄層色譜法》征

6

求意見(jiàn)稿及編制說(shuō)明。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)征求意見(jiàn)匯總處理表。

5本標(biāo)準(zhǔn)與國(guó)內(nèi)外分析方法的關(guān)系

本標(biāo)準(zhǔn)研究旨在建立一項(xiàng)滿足我國(guó)常見(jiàn)農(nóng)業(yè)廢棄物抗氧化活性的高效可靠

評(píng)價(jià)方法。通過(guò)查閱國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)資料，制定條件優(yōu)化方案，確保本方法前

處理所采用的裝置操作簡(jiǎn)便，能夠滿足國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室的條件要求。本標(biāo)準(zhǔn)擬采用

儀器化薄層色譜和DPPH顯色反應(yīng)相結(jié)合測(cè)定定量評(píng)價(jià)槐米抗氧化活性。樣品

的前處理，即槐米提取物中抗氧化活性物質(zhì)的提取采用超聲法；選擇合適的色

譜分離和光譜檢測(cè)條件。力求方法在穩(wěn)定、可靠和實(shí)用的基礎(chǔ)上，達(dá)到國(guó)際先

進(jìn)水平，以適應(yīng)我國(guó)植物提取物抗氧化活性評(píng)價(jià)、質(zhì)控與管理的需要。

6主要技術(shù)指標(biāo)依據(jù)與說(shuō)明

6.1標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)

本標(biāo)準(zhǔn)主要解決植物提取物中抗氧化活性評(píng)價(jià)的技術(shù)問(wèn)題，所以將本標(biāo)準(zhǔn)的

名稱(chēng)定為：《植物提取物抗氧化活性評(píng)價(jià)薄層色譜法》，英文翻譯為“Antioxidant

capacityassessmentofplantextract-Thinlayerchromatographymethod”。

6.2前言

明確了本標(biāo)準(zhǔn)的歸口單位及主要起草單位、起草人。

6.3主體內(nèi)容

標(biāo)準(zhǔn)的主體內(nèi)容包括：范圍、規(guī)范性引用文件、原理、試劑、儀器和設(shè)備、

測(cè)定步驟、空白試驗(yàn)、結(jié)果計(jì)算與表示、精密度和回收率、檢出限、檢驗(yàn)報(bào)告

等。

6.4“范圍”的界定

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了薄層色譜聯(lián)用1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)顯色反應(yīng)評(píng)估

植物提取物抗氧化能力的方法(以槐米提取物為例，蘆丁為標(biāo)準(zhǔn))。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于同時(shí)評(píng)價(jià)植物性食品原料中多元抗氧化物質(zhì)的抗氧化能力。

6.5原理

用硅膠薄層色譜對(duì)槐米提取物的甲醇溶液進(jìn)行展開(kāi)，實(shí)現(xiàn)對(duì)其中多種抗氧化

7

物質(zhì)的色譜分離，然后通過(guò)浸漬的方式將停留在硅膠薄層上的分離結(jié)果與

DPPH顯色反應(yīng)相耦合，顯色反應(yīng)結(jié)果用光密度掃描儀定量檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果以

蘆丁為內(nèi)標(biāo)加權(quán)定量計(jì)算評(píng)估槐米樣品綜合抗氧化能力。

6.6試劑

1)除非另有說(shuō)明，在分析中所使用試劑均為分析純，用水為GB/T6682規(guī)

定的一級(jí)水

2)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，分析純

3)甲醇，色譜純

4)乙酸乙酯，色譜純

5)乙酸，分析純

6)DPPH，分析純

7)高壓氮?dú)?，純?9.9%

8)硅膠薄層板，分析型

9)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液

a)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精確稱(chēng)取10mg±0.1mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，溶于10mL甲醇中。

制得1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于棕色容量瓶中，在4℃冰箱中恒溫避光保藏,

保質(zhì)期1周

b)標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.0mL，與9.0mL甲醇混合稀釋?zhuān)?/p>

使該混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為0.1mg/mL。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)工作液測(cè)試當(dāng)天新鮮配置

10)DPPH衍生液

準(zhǔn)確稱(chēng)取25.0mgDPPH(4.6)，溶于75mL甲醇溶液中。DPPH衍生液測(cè)試

當(dāng)天新鮮配置。

11)槐米提取物

12)濾膜：孔徑0.45μm

13)離心管：15～25mL

6.7儀器和設(shè)備

1)實(shí)驗(yàn)室常用玻璃器皿

2)分析天平：靈敏度0.0001g。

3)渦旋混勻器

8

4)超聲清洗儀：超聲頻率40～80kHz

5)離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000rpm

6)雙光束紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)：檢測(cè)范圍190-900nm

7)薄層色譜工作站，包括：薄層點(diǎn)樣儀、薄層展開(kāi)儀、自動(dòng)浸漬器、光密

度掃描儀

6.8主要測(cè)定步驟

6.8.1槐米提取液制備

用電子天平(5.2)精確稱(chēng)取50.0mg槐米提取物(4.11)粉末樣品與10mL甲醇

混合。將混合物在渦旋混勻器(5.3)上震蕩1min，然后置于超聲清洗機(jī)(5.4)水浴

30min。隨后，將樣品液在離心機(jī)(5.5)中以3000r/min離心10min，取上清液2

mL，用注射器過(guò)0.45μm纖維素濾膜去除其中的固體微粒。過(guò)濾后，用0.1

mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)工作液作為參比，用雙光束紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)(5.6)測(cè)定濾

液在360nm波長(zhǎng)的吸光度，以此為指導(dǎo)，用甲醇對(duì)濾液進(jìn)行逐步稀釋?zhuān)蛊?/p>

吸光度在0.7-1.0之間。稀釋后的濾液直接用于薄層點(diǎn)樣分析。

6.8.2色譜分離衍生和定量測(cè)定

a)點(diǎn)樣：以0.5kPa氮?dú)鉃檩d氣，用薄層點(diǎn)樣儀(5.7)將5μL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)工作

液(4.9b)和5μL槐米提取液(6.1)以條帶的形式吹掃到硅膠薄層板上。如圖1所

示，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)工作液和槐米提取液各點(diǎn)3個(gè)平行。具體參數(shù)為：條帶高度10mm，

條帶寬度6mm，第一條帶距板左邊15mm，點(diǎn)樣速度150ng/s，預(yù)留體積0.2μL。

圖1樣品提取液和標(biāo)準(zhǔn)工作液的在硅膠薄層板上的點(diǎn)樣布局

b)展開(kāi)：將點(diǎn)好后的硅膠薄層板用薄層自動(dòng)展開(kāi)儀(5.7)中色譜展開(kāi)。

為了保證標(biāo)準(zhǔn)方法的規(guī)范性，本研究采用CAMAGADC-2進(jìn)行色譜展開(kāi)，

全自動(dòng)化的預(yù)飽和硅膠板平衡有效避免了展開(kāi)前沿變形的問(wèn)題。在乙酸乙酯/

9

甲酸/乙酸/水體積比為10/1.1/1.1/2時(shí)，蘆丁的比移值Rf為0.45，槲皮素的比移

值Rf為0.65，,同一軌道上的不同抗氧化活性成分實(shí)現(xiàn)良好的分離（圖2）。因

此，可以確定本方法針對(duì)槐米提取物具有良好的選擇性。

圖2白光可視透射模式下的分離-顯色結(jié)果：1-3.蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品100ng/斑點(diǎn)

（每個(gè)斑點(diǎn)含有100ng蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品），4-6.槐米樣品1-3

c)浸漬衍生：用薄層自動(dòng)浸漬儀(5.7)將展開(kāi)干燥后的硅膠板浸入DPPH溶

液(4.10)，浸漬速度2mm/s，停留時(shí)間1s。取出后將硅膠板避光靜置待顯色反

應(yīng)結(jié)束。

抗氧化代表物蘆丁與DPPH作用顯色是一個(gè)隨時(shí)間變化的過(guò)程。因此，為

了確定薄層板上DPPH顯色反應(yīng)的最佳反應(yīng)時(shí)間，對(duì)浸漬衍生后的薄層板上目

標(biāo)物斑點(diǎn)的信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行了監(jiān)測(cè)(每張照片時(shí)間間隔為5min)。如圖4所示，在

浸漬后的前15min內(nèi)，蘆丁形成的抗氧化斑點(diǎn)信號(hào)強(qiáng)度均快速上升并達(dá)到最高

值，此后呈緩慢下降趨勢(shì)。因此可以確定薄層板上DPPH顯色反應(yīng)的最佳反應(yīng)

時(shí)間為15min。

10

圖3薄層板上不同濃度蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品抗氧化斑點(diǎn)信號(hào)強(qiáng)度隨時(shí)間變化規(guī)律

d)光密度掃描定量：用薄層光密度掃描儀(5.7)對(duì)已經(jīng)顯色的硅膠薄層板進(jìn)

行掃描檢測(cè)。

由圖4可知，硅膠板上蘆丁的最大吸收在530nm。最初光密度掃描是采用

吸收模式，掃描結(jié)果為反向吸收峰，數(shù)據(jù)無(wú)法分析，之后改用無(wú)濾光片的熒光

模式重新掃描。在這一條件下，由于激發(fā)光被背景中沒(méi)有消耗反應(yīng)的DPPH分

子吸收，形成低強(qiáng)度基線信號(hào)，而含有蘆丁的目標(biāo)物區(qū)域大部分DPPH被反應(yīng)

還原，能夠反射大部分入射光，不使用濾光片就能避免反射光被截住而得不到

檢測(cè)信號(hào)。除了掃描模式，光源也是影響光密度掃描結(jié)果的重要因素。一般情

況下，熒光模式下會(huì)選用掃描結(jié)果具有高信噪比的汞燈作為光源。但是本研究

中使用汞燈無(wú)法得到色譜峰信號(hào)，所以改用D2&W燈作為激發(fā)光源，以得到具

有良好信噪比的色譜峰信號(hào)（圖5）。狹縫尺寸、掃描速度和數(shù)據(jù)分辨率非關(guān)鍵

參數(shù)，依照常規(guī)經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行設(shè)置。因此，最終確定的光密度掃描定量分析的具體

參數(shù)為：反射—熒光模式，D2&W燈，激發(fā)光波長(zhǎng)530nm，無(wú)濾光片，狹縫尺

寸3.00mm×0.30mm(Micro)，掃描速度100mm/s，數(shù)據(jù)分辨率100μm/s

11

圖4槐米提取物樣品分離結(jié)果在不同波長(zhǎng)下的光密度掃描結(jié)果：激發(fā)波長(zhǎng)

分別為510，520，530，540，550nm

圖5以波長(zhǎng)530nm為激發(fā)波長(zhǎng)的光密度掃描結(jié)果：1-3.蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品100ng/

斑點(diǎn)（即軌道上每個(gè)斑點(diǎn)含有100ng蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品），4-6.槐米樣品1-3；虛線框

內(nèi)為抗氧化活性斑點(diǎn)

12

6.8.3標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖6蘆丁的標(biāo)準(zhǔn)曲線

以蘆丁濃度為橫坐標(biāo)（x）相應(yīng)的光密度掃描峰面積為縱坐標(biāo)（y），做標(biāo)準(zhǔn)

曲線。在蘆丁濃度50-500ng/斑點(diǎn)范圍內(nèi)作圖，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程標(biāo)準(zhǔn)曲線

y=31.698x-65.953，線性關(guān)系良好，R2=0.9995。

6.8.4檢測(cè)限和定量限

使用合適濃度的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，逐漸減少點(diǎn)樣量，進(jìn)行薄層色譜-DPPH顯

色反應(yīng)，根據(jù)光密度掃描結(jié)果計(jì)算峰高與基線噪音高的比，S/N=3（S為對(duì)照品

峰高，N為基線噪音高）時(shí)的對(duì)照品濃度為檢出限（LOD），得到蘆丁的檢測(cè)

限12ng/斑點(diǎn)，S/N=10時(shí)的濃度為定量限（LOQ），得到蘆丁的定量限39ng/

斑點(diǎn)。

6.8.5精密度和準(zhǔn)確度

通過(guò)測(cè)定槐米提取物中蘆丁的添加回收率（分別進(jìn)行了3個(gè)添加水平試驗(yàn)，

50，100，150mg/g，每個(gè)添加水平重復(fù)3次）對(duì)優(yōu)化得到的分離-檢測(cè)方法的

精確度和準(zhǔn)確度進(jìn)行驗(yàn)證。表1所示，方法的添加回收率為82%-97%，精密度

RSD<10%。這表明本標(biāo)準(zhǔn)所使用的提取方法和分離檢測(cè)手段具有良好的準(zhǔn)確度

和精密度。

13

表1檢測(cè)方法的精度和準(zhǔn)確度驗(yàn)證

樣品原有濃度添加濃度檢測(cè)濃度添加回收

（mg/mL）（mg/mL）（mg/mL）率(%)

1525092±990±10

100132±887±6

150178±1288±7

212650160±1591±9

100201±1789±8

150256±1593±6

38750133±1397±10

100154±1082±6

150197±1483±7

6.8.6抗氧化活性指數(shù)計(jì)算

按照公式(1)計(jì)算3個(gè)平行蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品斑點(diǎn)峰面積的平均值P蘆均

……(1)

按照公式(2)計(jì)算每個(gè)槐米提取液軌道斑點(diǎn)峰面積P槐，按式公式(1)計(jì)算：

……(2)

i—抗氧化斑點(diǎn)編號(hào)

n—抗氧化斑點(diǎn)數(shù)量

Pi—第i個(gè)抗氧化斑點(diǎn)峰面積

按照公式(3)計(jì)算3個(gè)平行槐米樣品平均斑點(diǎn)峰面積P槐均

……(3)

按照公式(4)計(jì)算槐米樣品的抗氧化指數(shù)Ai

……(4)

14

提取物樣品中往往不止一種抗氧化活性成分。而實(shí)現(xiàn)對(duì)提取物樣品中所有抗

氧化成分的綜合活性評(píng)價(jià)，比精確定量測(cè)抗氧化活性物質(zhì)含量可以更加客觀地

表征提取物作為藥品和食品原料品質(zhì)。因此，我們通過(guò)使用蘆丁作為伴隨外標(biāo)，

對(duì)所有樣品分離得到的所有抗氧化峰信號(hào)面積進(jìn)行歸一化計(jì)算，得到抗氧化指

數(shù)，可以對(duì)該樣品的抗氧化活性進(jìn)行整體評(píng)價(jià)。因此本方法更容易形成穩(wěn)定可

靠的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

15

6.8.7小結(jié)

本實(shí)驗(yàn)以槐米提取物中蘆丁為例，研究建立了薄層色譜與DPPH顯色反應(yīng)選

擇性定量評(píng)價(jià)植物提取物中抗氧化活性物質(zhì)的方法。薄層板上蘆丁與DPPH變色

反應(yīng)的濃度-信號(hào)關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)合硅膠板經(jīng)光密度掃描、計(jì)算后得到的峰面

積值，達(dá)到快速測(cè)定提取物中蘆丁的含量的目的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，DPPH在硅膠

板上對(duì)蘆丁的最優(yōu)顯色時(shí)間為15min；最佳提取溶劑為甲醇；通過(guò)使用乙酸乙酯

/甲酸/乙酸/水(10/1.1/1.1/2，體積比)的混合物為流動(dòng)相，可以實(shí)現(xiàn)提取物中不同

抗氧化活性成分的完全分離；隨后使用光密度掃描儀(反射—熒光模式，D2&W

燈，530nm激發(fā)波長(zhǎng)，無(wú)濾光片)對(duì)色譜顯色結(jié)果進(jìn)行精確檢測(cè)。該方法不僅簡(jiǎn)

便可靠、抗干擾能力強(qiáng)，而且具有較好的定量能力。檢測(cè)限和定量限分別為12，

39ng/斑點(diǎn)可以在50-500ng/斑點(diǎn)范圍內(nèi)獲得良好的線性(R2=0.9995)。在此基礎(chǔ)

上，以蘆丁作為外標(biāo)，通過(guò)歸一化計(jì)算方法，得到不同槐米提取物的抗氧化指數(shù)，

有助于不同提取物樣品的整體抗氧化活性評(píng)價(jià)比較，因此本方法更容易形成穩(wěn)定

可靠的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

綜上所述，本標(biāo)準(zhǔn)方法能夠滿足植物提取物中抗氧化活性評(píng)價(jià)的要求。

6.9方法驗(yàn)證

6.9.1參加驗(yàn)證的實(shí)驗(yàn)室

選擇5家具有資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室參加方法的驗(yàn)證工作（表2）。向驗(yàn)證單位提供方

法草案、驗(yàn)證方案、標(biāo)準(zhǔn)溶液和驗(yàn)證報(bào)告格式。驗(yàn)證單位按照方法草案準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)

用品，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)完成驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)并反饋驗(yàn)證結(jié)果報(bào)告。在方法驗(yàn)證前，參加驗(yàn)

證的操作人員應(yīng)熟悉和掌握方法原理、操作步驟及流程。方法驗(yàn)證過(guò)程中所用的

試劑和材料、儀器和設(shè)備及分析步驟應(yīng)符合方法相關(guān)要求。

16

表2驗(yàn)證單位與儀器型號(hào)

序號(hào)定值單位薄層色譜色譜板

1甘肅省天然藥物實(shí)驗(yàn)室CAMAG薄層色德國(guó)默克硅膠板F254(10

譜工作站×20cm)

2南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)CAMAG薄層色德國(guó)默克硅膠板F254(10

國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室譜工作站×20cm)

3農(nóng)業(yè)部生物毒素檢測(cè)重點(diǎn)CAMAG薄層色德國(guó)默克硅膠板F254(10

實(shí)驗(yàn)室譜工作站×20cm)

4浙江科技學(xué)院CAMAG薄層色德國(guó)默克硅膠板F254(10

譜工作站×20cm)

5中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究CAMAG薄層色德國(guó)默克硅膠板F254(10

所生化工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)譜工作站×20cm)

室

6.9.2方法驗(yàn)證結(jié)果

5家實(shí)驗(yàn)室對(duì)三種槐米提取物樣品的抗氧化指數(shù)進(jìn)行檢測(cè)計(jì)算，如表3所示。

不同實(shí)驗(yàn)室之間的測(cè)定數(shù)據(jù)精密度如表4所示。

17

表3不同驗(yàn)證單位對(duì)槐米提取物抗氧化指數(shù)的測(cè)定計(jì)算結(jié)果

定值單位樣品序號(hào)抗氧化指數(shù)測(cè)定值RSD(%)

中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所生化12.243.57

工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

22.372.95

32.336.01

農(nóng)業(yè)部生物毒素檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室12.235.83

22.287.02

32.494.82

南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)12.293.06

實(shí)驗(yàn)室

22.413.73

32.414.56

甘肅省天然藥物實(shí)驗(yàn)室12.416.22

22.124.24

32.284.39

浙江科技學(xué)院12.185.04

22.255.78

32.377.17

18

表4不同驗(yàn)證單位之間檢測(cè)數(shù)據(jù)精密度分析

定值單位抗氧化指數(shù)測(cè)定值

樣品1樣品2樣品3

中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所生化工程國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室2.242.372.33

農(nóng)業(yè)部生物毒素檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室2.232.282.49

南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室2.292.412.41

甘肅省天然藥物實(shí)驗(yàn)室2.412.122.28

浙江科技學(xué)院2.182.252.37

平均值2.272.2862.376

RSD(%)3.854.953.36

6.9.3驗(yàn)證結(jié)論

5家實(shí)驗(yàn)室對(duì)3個(gè)槐米提取物樣品的抗氧化指數(shù)進(jìn)行了檢測(cè)計(jì)算（表3），表

3表明，針對(duì)單個(gè)樣品的RSD值<7.17%。通過(guò)不同驗(yàn)證單位之間檢測(cè)數(shù)精密度

分析得到，同一槐米提取物樣品的RSD值<4.95%。上述分析結(jié)果表明，本標(biāo)準(zhǔn)

提出的評(píng)價(jià)方法可以具有良好的可比性，可以在不同測(cè)試單位得到可靠的抗氧化

定量評(píng)價(jià)結(jié)果

驗(yàn)證結(jié)論：本方法具有良好的可靠性和可比性，同時(shí)方法簡(jiǎn)單、耗時(shí)短，該

方法用于實(shí)際樣品中抗氧化活性的定量評(píng)價(jià)得到了滿意的結(jié)果。

19

7采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)程度，以及與國(guó)際、國(guó)外同類(lèi)標(biāo)

準(zhǔn)水平的對(duì)比情況

目前植物提取物抗氧化活性評(píng)價(jià)無(wú)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)可參照。本標(biāo)準(zhǔn)

在制訂過(guò)程中對(duì)以槐米提取物抗氧化活性制品的質(zhì)量、檢測(cè)和市場(chǎng)進(jìn)行了充分

的調(diào)查研究，并廣泛征求和采納了國(guó)內(nèi)相關(guān)領(lǐng)域?qū)＜业囊庖?jiàn)和建議，所制定的

標(biāo)準(zhǔn)適合我國(guó)國(guó)情，具有先進(jìn)性、科學(xué)性、實(shí)用性和可操作性，

8與現(xiàn)行法律法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系

標(biāo)準(zhǔn)所確定的各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)和內(nèi)容符合我國(guó)現(xiàn)行的有關(guān)方針、政策，并與相

關(guān)法律、法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)吻合。

本標(biāo)準(zhǔn)頒布實(shí)施后，填補(bǔ)我國(guó)企業(yè)生產(chǎn)抗氧化活性產(chǎn)品和質(zhì)量控制方法的空

白，更有利于行業(yè)應(yīng)用；與現(xiàn)行的法律、法規(guī)及其他國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)沒(méi)有矛盾。

9標(biāo)準(zhǔn)作為強(qiáng)制性或推薦性標(biāo)準(zhǔn)的意見(jiàn)

建議本標(biāo)準(zhǔn)作為推薦性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布。

10實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)的建議

如果本標(biāo)準(zhǔn)被批準(zhǔn)并發(fā)布，為了貫徹好本標(biāo)準(zhǔn)，使其有效發(fā)揮作用，建議在

標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布后，在相關(guān)企業(yè)和檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行宣傳和貫徹，并組織有關(guān)部門(mén)和人員

進(jìn)行學(xué)習(xí)和培訓(xùn)。

11參考文獻(xiàn)

[1]M.Gutiérrez-Larraínzar,J.Rúa,D.deArriaga,P.d.Valle,M.R.

García-Armesto,Invitroassessmentofsyntheticphenolicantioxidantsforinhibition

offoodborneStaphylococcusaureus,BacilluscereusandPseudomonasfluorescens,

FoodControl,30(2013)393-399.

[2]M.Eskandani,H.Hamishehkar,J.EzzatiNazhadDolatabadi,Cytotoxicity

andDNAdamagepropertiesoftert-butylhydroquinone(TBHQ)foodadditive,Food

20

Chem.,153(2014)315-320.

[3]G.M.Williams,M.J.Iatropoulos,J.Whysner,SafetyAssessmentofButylated

HydroxyanisoleandButylatedHydroxytolueneasAntioxidantFoodAdditives,Food

andChemicalToxicology,37(1999)1027-1038.

[4]L.Rashidi,Z.Gholami,S.Nanvazadeh,Z.Shabani,RapidMethodfor

ExtractingandQuantifyingSyntheticAntioxidantsinAllEdibleFatsandOils,Food

AnalyticalMethods,9(2016)2682-2690.

[5]M.A.Farajzadeh,M.Abbaspour,M.R.A.Mogaddam,H.Ghorbanpour,

DeterminationofSomeSyntheticPhenolicAntioxidantsandBisphenolAinHoney

UsingDispersiveLiquid–LiquidMicroextractionFollowedbyGas

Chromatography-FlameIonizationDetection,FoodAnalyticalMethods,8(2015)

2035-2043.

[6]T.-X.Tang,X.-J.Xu,D.-M.Wang,Z.-M.Zhao,L.-P.Zhu,D.-P.Yang,A

RapidandGreenLimitTestMethodforFiveSyntheticColorantsinFoodsUsing

PolyamideThin-layerChromatography,FoodAnalyticalMethods,8(2015)

459-466.

[7]Q.Li,X.Yu,Y.Yang,X.Liu,SimpleDeterminationofDiacylglycerols

UsingThinLayerChromatographyandVisibleSpectrophotometry,FoodAnalytical

Methods,11(2018)236-242.

[8]P.Agrawal,K.Laddha,Developmentofvalidatedhigh-performancethin

layerchromatographyforquantificationofaristolochicacidindifferentspeciesof

theAristolochiaceaefamily,J.FoodDrugAnal.,25(2017)425-429.

[9]D.DeLucia,S.Manfredini,T.Bernardi,S.Vertuani,High-Performance

Thin-LayerChromatography(HPTLC):aNewGreenApproachtoSolubleFiber

DeterminationinPlantMatrices,FoodAnalyticalMethods,8(2015)32-39.

[10]D.Szikra,I.P.Nagy,AttenuatedTotalReflectanceasanAlternativeof

DiffuseReflectanceInfraredDetectionintheIdentificationofCompounds

SeparatedbyThinLayerChromatography,J.Liq.Chromatogr.RelatedTechnol.,31

(2007)161-168.

[11]L.Wang,X.-M.Xu,Y.-S.Chen,J.Ren,Y.-T.Liu,HPTLC-FLD-SERSasa

21

facileandreliablescreeningtool:Exemplarilyshownwithtyramineincheese,J.

FoodDrugAnal.,(2017).

[12]Z.Xie,Y.Wang,Y.Chen,X.Xu,Z.Jin,Y.Ding,N.Yang,F.Wu,Tuneable

surfaceenhancedRamanspectroscopyhyphenatedtochemicallyderivatized

thin-layerchromatographyplatesforscreeninghistamineinfish,FoodChem.,230

(2017)547-552.

[13]L.Zhang,J.Shi,J.Tang,Z.Cheng,X.Lu,Y.Kong,T.Wu,Directcoupling

ofthin-layerchromatography-bioautographywithelectrostaticfieldinducedspray

ionization-massspectrometryforseparationandidentificationoflipaseinhibitorsin

lotusleaves,Anal.Chim.Acta,967(2017)52-58.

[14]Y.Chen,G.E.Morlock,Layer-InducedSensitivityEnhancementinPlanar

Chromatography–Bioluminescence–MassSpectrometry:ApplicationtoAlkaloids,

Chromatographia,79(2016)89-96.

[15]Y.Chen,W.Schwack,HPTLC-Bioautography/MassSpectrometry:A

TailoredToolforScreeningVeterinaryAntibioticResidues,Deutsche

Lebensmittel-Rundschau,111(2015)125-128.

[16]Y.Chen,W.Schwack,High-performancethin-layerchromatography

screeningofmulticlassantibioticsinanimalfoodbybioluminescentbioautography

andelectrosprayionizationmassspectrometry,J.Chromatogr.A,1356(2014)

249-257.

[17]V.Baumgartner,C.Hohl,W.Schwack,Rolling—Anewapplication

techniqueforluminescentbacteriaonhigh-performancethin-layerchromatography

plates,J.Chromatogr.A,1218(2011)2692-2699.

[18]I.M.Choma,E.M.Grzelak,Bioautographydetectioninthin-layer

chromatography,J.Chromatogr.A,1218(2011)2684-2691.

[19]S.Buchinger,D.Spira,K.Br?der,M.Schlüsener,T.Ternes,G.

Reifferscheid,DirectCouplingofThin-LayerChromatographywithaBioassayfor

theDetectionofEstrogenicCompounds:ApplicationsforEffect-DirectedAnalysis,

Anal.Chem.,85(2013)7248-7256.

[20]S.Agatonovic-Kustrin,D.W.Morton,P.Ristivojevi?,Assessmentof

22

antioxidantactivityinVictorianmarinealgalextractsusinghighperformance

thin-layerchromatographyandmultivariateanalysis,J.Chromatogr.A,1468(2016)

228-235.

[21]L.Gu,T.Wu,Z.Wang,TLCbioautography-guidedisolationofantioxidants

fromfruitofPerillafrutescensvar.acuta,LWT-FoodScienceandTechnology,42

(2009)131-136.

[22]L.Gu,S.Zheng,T.Wu,G.Chou,Z.Wang,High-PerformanceThin-Layer

Chromatographic-BioautographicMethodfortheSimultaneousDeterminationof

MagnololandHonokiolinMagnoliaeofficinalisCortex,J.PlanarChromatogr.,27

(2014)5-10.

[23]S.B.Kedare,R.P.Singh,GenesisanddevelopmentofDPPHmethodof

antioxidantassay,JournalofFoodScienceandTechnology,48(2011)412-422.

[24]M.Olech,?.Komsta,R.Nowak,?.Cie?la,M.Waksmundzka-Hajnos,

Investigationofantiradicalactivityofplantmaterialbythin-layerchromatography

withimageprocessing,FoodChem.,132(2012)549-553.

[25]I.A.Sima,D.Casoni,C.Sarbu,HighsensitiveandselectiveHPTLC

methodassistedbydigitalimageprocessingforsimultaneousdeterminationof

catecholaminesandrelateddrugs,Talanta,114(2013)117-123.

[26]M.N.Safdar,T.Kausar,S.Jabbar,A.Mumtaz,K.Ahad,A.A.Saddozai,

Extractionandquantificationofpolyphenolsfromkinnow(CitrusreticulateL.)peel

usingultrasoundandmacerationtechniques,J.FoodDrugAnal.,25(2017)488-500.

[27]S.-N.Lou,Y.-S.Hsu,C.-T.Ho,Flavonoidcompositionsandantioxidant

activityofcalamondinextractspreparedusingdifferentsolvents,J.FoodDrugAnal.,

22(2014)290-295.

[28]C.C.Denardin,G.E.Hirsch,R.F.daRocha,M.Vizzotto,A.T.Henriques,

J.C.F.Moreira,F.T.C.R.Guma,T.Emanuelli,Antioxidantcapacityandbioactive

compoundsoffourBraziliannativefruits,J.FoodDrugAnal.,23(2015)387-398.

[29]M.?.Muruzovi?,K.G.Mladenovi?,O.D.Stefanovi?,S.M.Vasi?,L.R.

?omi?,ExtractsofAgrimoniaeupatoriaL.assourcesofbiologicallyactive

compoundsandevaluationoftheirantioxidant,antimicrobial,andantibiofilm

23

activities,J.FoodDrugAnal.,24(2016)539-547.

[30]H.Dehghan,Y.Sarrafi,P.Salehi,Antioxidantandantidiabeticactivitiesof

11herbalplantsfromHyrcaniaregion,Iran,J.FoodDrugAnal.,24(2016)179-188.

[31]K.H.Musa,A.Abdullah,A.Al-Haiqi,DeterminationofDPPHfreeradical

scavengingactivity:Applicationofartificialneuralnetworks,FoodChem.,194

(2016)705-711.

[32]王天楠,張煌,陳益勝等.HPTLC-DPPH法定性定量分析保健品中蘆丁

[J].食品與機(jī)械,2019,第35卷(1):92-96，142.

24

1任務(wù)來(lái)源...............................................................................................................1

2起草的目的意義...................................................................................................1

2.1企業(yè)產(chǎn)品開(kāi)發(fā)和質(zhì)量控制的需要............................................................1

2.2制定完善國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的需要........................................................................2

3薄層色譜研究、應(yīng)用與標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)狀.......................................................................3

3.1薄層色譜研究.........................