1.2.2微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)

第1章發(fā)酵工程第2節(jié)二、微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)必備知識(shí)一、微生物的選擇培養(yǎng)二、微生物的數(shù)量測(cè)定三、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)拓展延伸高考鏈接模擬演練闡明微生物選擇培養(yǎng)的原理2.進(jìn)行土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)一、微生物的選擇培養(yǎng)1.選擇培養(yǎng)基（1）概念：允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基（2）原理：人為提供有利于目的菌生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度和pH等)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物的生長(zhǎng)。2.自然界中目的菌的篩選（1）實(shí)例：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)中用到的耐高溫的DNA聚合酶，就是從熱泉中篩選出的水生棲熱菌中提取出來(lái)的。70～80℃3．微生物的選擇培養(yǎng)(1)方法：對(duì)樣品進(jìn)行充分稀釋?zhuān)缓髮⒕和坎嫉街苽浜玫倪x擇培養(yǎng)基上。(2)稀釋涂布平板法的操作過(guò)程①系列稀釋操作a．編號(hào)為1×102～1×107試管中分別盛有9mL無(wú)菌水。b．將10g土樣加入盛有90mL無(wú)菌水的錐形瓶中，充分搖勻。c．取1mL上清液加入盛有9mL無(wú)菌水的試管中，依次等比稀釋。②涂布平板操作A.取菌液：取0.1mL菌液，滴加到培養(yǎng)基表面B.涂布器消毒：將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中C.涂布器滅菌：將涂布器放在火焰上灼燒，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，再進(jìn)行涂布D.涂布平板：用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使涂布均勻(3)培養(yǎng)：待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，放入30～37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1～2d。微生物的數(shù)量測(cè)定1.稀釋涂布平板法①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)單菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。②計(jì)數(shù)原則：一般選擇菌落數(shù)為30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。樣品的稀釋度將直接影響平板上的菌落數(shù)目，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)。在同一稀釋度下，應(yīng)至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值。③計(jì)算公式每克樣品中的菌株數(shù)＝eq\f(某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù),涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積mL)×稀釋倍數(shù)2.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法一種常用的、快速直觀(guān)的測(cè)定微生物數(shù)量的方法。該方法利用特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下觀(guān)察、計(jì)數(shù)，然后再計(jì)算一定體積的樣品中微生物的數(shù)量，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和。三、微生物的純培養(yǎng)1.實(shí)驗(yàn)原理：①土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕浮＂谂渲埔阅蛩貫槲ㄒ惶荚吹呐囵B(yǎng)基，能夠在該培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌2．實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(1)土壤取樣①土壤要求：酸堿度接近中性且潮濕。②取樣部位：距地表約3～8cm的土壤層。(2)樣品的稀釋測(cè)定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用1×104、1×105和1×106倍稀釋的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，當(dāng)?shù)谝淮巫鲞@個(gè)實(shí)驗(yàn)時(shí)可以將稀釋的范圍放寬一點(diǎn)。(3)微生物的培養(yǎng)與觀(guān)察①培養(yǎng)：根據(jù)不同微生物的需要，控制適宜的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。細(xì)菌一般在30～37℃的溫度下培養(yǎng)1～2d。②觀(guān)察a．觀(guān)察方法：每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而遺漏部分菌落。b．記錄菌落的特征：包括菌落的形狀、大小和顏色等。3．操作提示(1)無(wú)菌操作：取土樣的用具在使用前都需要滅菌。(2)做好標(biāo)記：本實(shí)驗(yàn)使用的平板和試管較多，為了避免混淆，最好在使用前做好標(biāo)記。例如，在標(biāo)記培養(yǎng)皿時(shí)應(yīng)該注明組別、培養(yǎng)日期和平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度等。(3)制定計(jì)劃：對(duì)于耗時(shí)較長(zhǎng)的生物實(shí)驗(yàn)，需要事先規(guī)劃時(shí)間，以便提高實(shí)驗(yàn)效率，在操作時(shí)有條不紊。4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià)內(nèi)容現(xiàn)象結(jié)果分析是否有雜菌污染對(duì)照組的培養(yǎng)基上無(wú)菌落生長(zhǎng)未被雜菌污染對(duì)照組的培養(yǎng)基上有菌落生長(zhǎng)被雜菌污染選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目明顯少于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目。選擇培養(yǎng)基具有篩選作用樣品的稀釋操作是否成功得到2個(gè)或2個(gè)以上的菌落數(shù)為30~300的平板操作成功重復(fù)組的結(jié)果若選取的是同一種土樣，統(tǒng)計(jì)的結(jié)果應(yīng)該接近5.菌種鑒定：分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶可以將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌，若指示劑變紅，可確定該種細(xì)菌能夠分解尿素。1．稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)法的比較項(xiàng)目稀釋涂布平板法顯微鏡直接計(jì)數(shù)法主要用具培養(yǎng)基等顯微鏡、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板或細(xì)菌計(jì)數(shù)板等計(jì)數(shù)依據(jù)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)菌株本身優(yōu)點(diǎn)計(jì)數(shù)的都是活菌計(jì)數(shù)方便、操作簡(jiǎn)單缺點(diǎn)操作復(fù)雜、有一定誤差死菌、活菌都計(jì)數(shù)在內(nèi)2．選擇培養(yǎng)基的類(lèi)型類(lèi)型條件分離得到的菌種改變培養(yǎng)條件70～80℃的高溫水生棲熱菌添加某種化學(xué)物質(zhì)加入青霉素酵母菌、霉菌等真菌高濃度食鹽金黃色葡萄球菌特殊碳源、氮源石油是唯一碳源能消除石油污染的微生物營(yíng)養(yǎng)缺陷不加碳源自養(yǎng)型微生物不加氮源固氮菌3.兩種純化方法的比較項(xiàng)目平板劃線(xiàn)法稀釋涂布平板法主要步驟接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線(xiàn)等比稀釋操作和涂布平板操作接種工具接種環(huán)涂布器單菌落的獲得從最后劃線(xiàn)的區(qū)域挑取稀釋度合適，整個(gè)平板上都可找到單菌落用途分離純化菌種，獲得單菌落①分離純化菌種，獲得單菌落；②用于計(jì)數(shù)菌落分布共同點(diǎn)都能將微生物分散到固體培養(yǎng)基表面，以獲得單細(xì)胞菌落，達(dá)到分離純化微生物的目的，也可用于觀(guān)察菌落特征4.選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基項(xiàng)目選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基特殊成分加入某種化學(xué)物質(zhì)加入某種指示劑或化學(xué)藥品目的抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)目的微生物生長(zhǎng)與微生物的代謝物或培養(yǎng)基中的成分發(fā)生特定反應(yīng)用途培養(yǎng)、分離出特定微生物鑒別不同的微生物舉例培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素，抑制細(xì)菌生長(zhǎng)；用以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)尿素分解菌可用伊紅—亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基鑒定飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有，菌落呈深紫色，并有金屬光澤)【例1】（2023·遼寧·統(tǒng)考高考真題）細(xì)菌氣溶膠是由懸浮于大氣或附著于顆粒物表面的細(xì)菌形成的。利用空氣微生物采樣器對(duì)某市人員密集型公共場(chǎng)所采樣并檢測(cè)細(xì)菌氣溶膠的濃度（菌落數(shù)/m3）。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．采樣前需對(duì)空氣微生物采樣器進(jìn)行無(wú)菌處理B．細(xì)菌氣溶膠樣品恒溫培養(yǎng)時(shí)需將平板倒置C．同一稀釋度下至少對(duì)3個(gè)平板計(jì)數(shù)并取平均值D．稀釋涂布平板法檢測(cè)的細(xì)菌氣溶膠濃度比實(shí)際值高【答案】D【分析】稀釋涂布平板計(jì)數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個(gè)菌落，即是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計(jì)的計(jì)數(shù)方法，即一個(gè)菌落代表一個(gè)單細(xì)胞。計(jì)數(shù)時(shí)，首先將待測(cè)樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開(kāi)，使成單個(gè)細(xì)胞存在（否則一個(gè)菌落就不只是代表一個(gè)細(xì)胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖形成菌落，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目，即可計(jì)算出樣品中的含菌數(shù)?！驹斀狻緼、為防止雜菌感染，接種前需要對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、微生物采樣器進(jìn)行滅菌，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作者的雙手進(jìn)行消毒，A正確；B、純化培養(yǎng)時(shí)，為防止污染培養(yǎng)基和水分蒸發(fā)，培養(yǎng)皿應(yīng)倒置放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，B正確；C、微生物計(jì)數(shù)時(shí)在同一稀釋度下，應(yīng)至少需要對(duì)3個(gè)菌落數(shù)目在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，C正確；D、使用稀釋涂布平板法對(duì)微生物計(jì)數(shù)，數(shù)值往往偏小，原因是兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，在平板上只能觀(guān)察到一個(gè)菌落，D錯(cuò)誤。【變式11】（2023·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下列關(guān)于細(xì)菌和酵母菌實(shí)驗(yàn)的敘述正確的是（）A．通常酵母菌培養(yǎng)基比細(xì)菌培養(yǎng)基有更高的碳氮比B．通常細(xì)菌的生長(zhǎng)速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大C．通常細(xì)菌培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌法滅菌，酵母菌培養(yǎng)基用過(guò)濾除菌法除菌D．血細(xì)胞計(jì)數(shù)板既可用于酵母菌的數(shù)量測(cè)定，也可用于細(xì)菌的數(shù)量測(cè)定【答案】A【分析】培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽，此外還要滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。滅菌常用的方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。消毒常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外線(xiàn)或化學(xué)藥物消毒法等?！驹斀狻緼、細(xì)菌是原核生物，酵母菌是真核生物，不同微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣，通常酵母菌培養(yǎng)基比細(xì)菌培養(yǎng)基有更高的碳氮比，A正確；B、通常細(xì)菌的生長(zhǎng)速度比酵母菌快，但形成的菌落，不一定細(xì)菌的大于酵母菌的，與細(xì)菌的種類(lèi)有關(guān)，部分細(xì)菌的菌落小于酵母菌，B錯(cuò)誤；C、通常細(xì)菌和酵母菌的培養(yǎng)基都可以用高壓蒸汽滅菌法滅菌，C錯(cuò)誤；D、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板適用于真菌的計(jì)數(shù)，細(xì)菌計(jì)數(shù)板用于細(xì)菌的數(shù)量測(cè)定等，D錯(cuò)誤。【變式12】（2023·廣東·統(tǒng)考高考真題）研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線(xiàn)（如圖）和選擇培養(yǎng)基篩選原理來(lái)判斷，下列最可能篩選到目標(biāo)菌的條件組合是（

）A．a(chǎn)點(diǎn)時(shí)取樣、尿素氮源培養(yǎng)基B．b點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基C．b點(diǎn)時(shí)取樣、蛋白胨氮源培養(yǎng)基D．c點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基【答案】D【分析】篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，要用角蛋白氮源培養(yǎng)基?！驹斀狻垦芯磕康氖呛Y選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，因此既要耐高溫，又要能夠高效降解角蛋白，所以在c點(diǎn)取樣，并且用角蛋白氮源培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)，所以D正確，ABC錯(cuò)誤。故選D?！纠?】（2023·山東·高考真題）平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說(shuō)法正確的是（

）A．不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)B．平板涂布時(shí)涂布器使用前必須進(jìn)行消毒C．接種后未長(zhǎng)出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄D．利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物【答案】D【分析】1、培養(yǎng)基是人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，是進(jìn)行微生物培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。2、按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)。3、消毒和滅菌是兩個(gè)不同的概念，消毒是指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物的方法殺死物體表面或內(nèi)部的一部分微生物。滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子?！驹斀狻緼、不含氮源的平板可用于固氮菌的培養(yǎng)，A錯(cuò)誤；B、平板涂布時(shí)涂布器使用前必須浸在酒精中，然后在火焰上灼燒滅菌，這種操作屬于滅菌，不屬于消毒，B錯(cuò)誤；C、使用后的培養(yǎng)基即使未長(zhǎng)出菌落也要在丟棄前進(jìn)行滅菌處理，不能直接丟棄，以免污染環(huán)境，C錯(cuò)誤；D、脲酶可以催化尿素分解，在以尿素為唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素獲得氮源而進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖，但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而無(wú)法生長(zhǎng)，因此以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物，D正確。故選D?！咀兪?1】（2022·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下列是某同學(xué)分離高產(chǎn)脲酶菌的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，不合理的是（

）A．選擇農(nóng)田或公園土壤作為樣品分離目的菌株B．在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源C．適當(dāng)稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落D．可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)脲酶菌【答案】D【分析】為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，配制的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，含脲酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)，其它微生物在該培養(yǎng)基上因缺乏氮源而不能生長(zhǎng)，可用于分離含脲酶的微生物?！驹斀狻緼、農(nóng)田或公園土壤中含有較多的含脲酶的微生物，A正確；B、為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，配制的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，含脲酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)，B正確；C、當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，C正確；D、在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的pH升高，酚紅指示劑將變紅，因此在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，能對(duì)分離的菌種做進(jìn)一步鑒定，D錯(cuò)誤。故選D?！咀兪?2】（2022·湖南·高考真題）黃酒源于中國(guó)，與啤酒、葡萄酒并稱(chēng)世界三大發(fā)酵酒。發(fā)酵酒的釀造過(guò)程中除了產(chǎn)生乙醇外，也產(chǎn)生不利于人體健康的氨基甲酸乙酯（EC）。EC主要由尿素與乙醇反應(yīng)形成，各國(guó)對(duì)酒中的EC含量有嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)?；卮鹣铝袉?wèn)題:(1)某黃酒釀制工藝流程如圖所示，圖中加入的菌種a是，工藝b是（填“消毒”或“滅菌”），采用工藝b的目的是。(2)以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入指示劑，根據(jù)顏色變化，可以初步鑒定分解尿素的細(xì)菌。尿素分解菌產(chǎn)生的脲酶可用于降解黃酒中的尿素，脲酶固定化后穩(wěn)定性和利用效率提高，固定化方法有（答出兩種即可）。(3)研究人員利用脲酶基因構(gòu)建基因工程菌L，在不同條件下分批發(fā)酵生產(chǎn)脲酶，結(jié)果如圖所示。推測(cè)是決定工程菌L高脲酶活力的關(guān)鍵因素，理由是。(4)某公司開(kāi)發(fā)了一種新的黃酒產(chǎn)品，發(fā)現(xiàn)EC含量超標(biāo)。簡(jiǎn)要寫(xiě)出利用微生物降低該黃酒中EC含量的思路?！敬鸢浮?1)酵母菌消毒目的是殺死啤酒的中大多數(shù)微生物，并延長(zhǎng)其保存期(2)酚紅化學(xué)結(jié)合法、包埋法、物理吸附法(3)pH兩圖中脲酶活力隨時(shí)間變化的曲線(xiàn)基本一致，而維持pH在6.5不變與pH從6.5降為4.5相比較而言，酶活力值始終要高(4)方案一：配置一種選擇培養(yǎng)基，篩選出產(chǎn)生EC降解酶的細(xì)菌，從細(xì)菌中分離得到EC降解酶，純化的EC降解酶進(jìn)行固定化操作后，加入該黃酒中。方案二：配置一種選擇培養(yǎng)基，篩選出產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌，從細(xì)菌中分離得到脲酶，純化的脲酶進(jìn)行固定化操作后，在黃酒工藝流程的發(fā)酵環(huán)節(jié)中加入?！痉治觥坑捎诩?xì)菌分解在尿素的過(guò)程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會(huì)使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，pH升高，所以可以用檢測(cè)pH的變化的方法來(lái)判斷尿素是否被分解，可在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素被分解后產(chǎn)生氨，pH升高，指示劑變紅。【詳解】（1）制造果酒利用的是酵母菌的無(wú)氧呼吸，加入的菌種a是酵母菌。過(guò)濾能除去啤酒中部分微生物，工藝b是消毒，目的是殺死啤酒的中大多數(shù)微生物，并延長(zhǎng)其保存期。（2）由于細(xì)菌分解尿素的過(guò)程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會(huì)使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，pH升高，所以可以用檢測(cè)pH的變化的方法來(lái)判斷尿素是否被分解，故在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑可以鑒別尿素分解菌。固定化酶實(shí)質(zhì)上是將相應(yīng)酶固定在不溶于水的載體上，實(shí)現(xiàn)酶的反復(fù)利用，并提高酶穩(wěn)定性，酶的各項(xiàng)特性（如高效性、專(zhuān)一性和作用條件的溫和性）依然保持。固定化酶的方法包括化學(xué)結(jié)合法、包埋法、物理吸附法等。（3）對(duì)比兩坐標(biāo)曲線(xiàn)，兩圖中脲酶活力隨時(shí)間變化的曲線(xiàn)基本一致，說(shuō)明培養(yǎng)時(shí)間不是決定因素；而維持pH在6.5不變與pH從6.5降為4.5相比較而言，酶活力值始終要高，說(shuō)明pH為6.5時(shí)，有利于酶結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定，故pH是決定工程菌L高脲酶活力的關(guān)鍵因素。（4）從坐標(biāo)圖形看，利用脲酶消除其前體物質(zhì)尿素可降低該黃酒中EC含量。配置一種選擇培養(yǎng)基，篩選出產(chǎn)生EC降解酶的細(xì)菌，從細(xì)菌中分離得到EC降解酶，純化的EC降解酶進(jìn)行固定化操作后，加入該黃酒中?；蛘吲渲靡环N選擇培養(yǎng)基，篩選出產(chǎn)生脲酶的細(xì)菌，從細(xì)菌中分離得到脲酶，純化的脲酶進(jìn)行固定化操作后，在黃酒工藝流程的發(fā)酵環(huán)節(jié)中加入。1．微生物合成的油脂是制備生物柴油的新型原料。為篩選出產(chǎn)油脂的細(xì)菌，某小組進(jìn)行了如圖所示的實(shí)驗(yàn)。物質(zhì)甲可將菌體內(nèi)的油脂染成黑色。下列分析正確的是（）A．應(yīng)將土壤菌液系列稀釋、滅菌后再涂布到培養(yǎng)基A上B．培養(yǎng)基A、B、C都以油脂作為唯一的碳源C．培養(yǎng)基B中的菌落2和菌落4是產(chǎn)油脂的目的菌D．挑選培養(yǎng)基B中的目的菌接種到固體培養(yǎng)基中擴(kuò)大培養(yǎng)【答案】C【分析】選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基?！驹斀狻緼、滅菌會(huì)殺死土壤菌液中的目的菌，A錯(cuò)誤；B、該實(shí)驗(yàn)的目的是篩選能合成油脂的細(xì)菌，因此選擇培養(yǎng)基中不能加入油脂，B錯(cuò)誤；C、依據(jù)題圖可知，菌落2和菌落4的細(xì)胞被染成黑色，說(shuō)明這兩個(gè)菌落的微生物都產(chǎn)生了油脂，C正確；D、一般微生物的擴(kuò)大培養(yǎng)采用液體培養(yǎng)基，D錯(cuò)誤。2．尿酸氧化酶能分解尿酸（C5H4N4O3）。為獲取尿酸氧化酶高產(chǎn)菌株用以研制治療高尿酸血癥的酶類(lèi)藥物，科研人員從某泥土中取樣后富集培養(yǎng)，3天后吸取培養(yǎng)液梯度稀釋到106，然后接種到固體培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)。挑取單菌落檢測(cè)尿酸氧化酶的酶活力（用每分鐘轉(zhuǎn)化1μmol尿酸所需要的酶量表示），結(jié)果如表所示。下列最適合作為實(shí)驗(yàn)?zāi)康木涞氖牵?/p>

）菌落1234酶活力100501420A．菌落1 B．菌落2 C．菌落3 D．菌落4【答案】C【分析】微生物分離時(shí)，利用該分離對(duì)象對(duì)某一營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的“嗜好”，專(zhuān)門(mén)在培養(yǎng)基中加入該營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，使該微生物大量增殖．這些物質(zhì)主要是一些特殊的碳源、氮源，如纖維素可用來(lái)富集纖維素分解微生物，尿素可用來(lái)富集尿素分解微生物?！驹斀狻糠治鲱}意，酶活力用每分鐘轉(zhuǎn)化1μmol尿酸所需要的酶量表示，故所需酶量越少，說(shuō)明酶活力越大，可知菌落3的酶活力最高，可作為實(shí)驗(yàn)所需的目的菌，C符合題意。故選C。3．下列有關(guān)微生物培養(yǎng)的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A．涂布接種時(shí)，需將涂布器沾酒精后在酒精燈外焰上引燃，冷卻后再使用B．分離計(jì)數(shù)時(shí)，可用稀釋涂布平板法對(duì)需計(jì)數(shù)的微生物進(jìn)行分離C．觀(guān)察菌落時(shí)，不需要將培養(yǎng)皿蓋拿掉D．培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度越高，對(duì)微生物的生長(zhǎng)越有利【答案】D【分析】稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)梯度稀釋后，進(jìn)行涂布接種，將涂布器沾酒精后在酒精燈外焰上引燃，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。稀釋涂布平板法除可以用于分離微生物外，也常用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目。當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)單菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)為30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)?！驹斀狻緼、涂布接種時(shí)，涂布器應(yīng)從盛酒精的燒杯中取出，并在火焰上引燃，冷卻后再進(jìn)行涂布接種，A正確；B、稀釋涂布平板法除可以用于分離微生物外，也常用來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，因此可用稀釋涂布平板法對(duì)需計(jì)數(shù)的微生物進(jìn)行分離，B正確；C、為防止空氣中的雜菌污染培養(yǎng)物，觀(guān)察菌落時(shí)，不能打開(kāi)培養(yǎng)皿的蓋子，C正確；D、按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，培養(yǎng)基中各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度適宜，對(duì)微生物的生長(zhǎng)有利，如果營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致微生物失水，影響其生長(zhǎng)繁殖，D錯(cuò)誤。故選D。4．物質(zhì)Y是一種會(huì)污染土壤的含氮有機(jī)物，Y在培養(yǎng)基中達(dá)到一定量時(shí)培養(yǎng)基表現(xiàn)為不透明。某研究小組欲從土壤中篩選出能降解Y的細(xì)菌。在篩選目的菌的培養(yǎng)基中觀(guān)察到幾個(gè)菌落（如圖所示）。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A．應(yīng)首選菌落①中的菌株進(jìn)一步純化B．將所選取土壤滅菌后用無(wú)菌水稀釋涂布于培養(yǎng)基C．圖中菌落都具有能夠降解Y的能力D．圖中培養(yǎng)基可用牛肉膏、蛋白胨配制【答案】A【分析】篩選培養(yǎng)基是指根據(jù)某種微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或?qū)δ承┗瘜W(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的，能選擇性地區(qū)分這種微生物的培養(yǎng)基。利用選擇培養(yǎng)基，可使混合菌群中的目標(biāo)菌種變成優(yōu)勢(shì)種群，從而提高該種微生物的篩選效率。【詳解】A、據(jù)圖可知，①菌落最小，周?chē)该魅ψ畲?，說(shuō)明①菌落分解Y的能力最強(qiáng)，所以應(yīng)該選擇①菌落進(jìn)一步純化，A正確；B、土壤稀釋液中含有接種的微生物，不能滅菌，B錯(cuò)誤；C、據(jù)圖可知，圖中菌落③周?chē)葱纬赏该魅?，不能降解Y，C錯(cuò)誤；D、實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖呛Y選出能降解Y的細(xì)菌，所以不能加入牛肉膏、蛋白胨，只能以Y作為唯一氮源，D錯(cuò)誤。故選A。5．黃河入?？谑徒到饩暮Y選是修復(fù)石油污染，保護(hù)黃河的重要工作，如圖表示篩選石油降解菌的過(guò)程。下列敘述正確的是（

）A．圖示接種方法為稀釋涂布平板法，據(jù)結(jié)果推測(cè)1g土壤中石油分解菌數(shù)最多為1.6×106個(gè)B．分離、純化石油分解菌時(shí)，還可采用平板劃線(xiàn)法且該方法也需要進(jìn)行③步驟操作C．稀釋涂布時(shí)，利用涂布器從盛有菌液的試管中蘸取菌液，進(jìn)行涂布D．進(jìn)行步驟⑤時(shí)，應(yīng)用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)④中的石油降解菌，并檢測(cè)菌的數(shù)量和石油降解能力【答案】D【分析】1、每克樣品中的菌株數(shù)=（C÷V）×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)。2、常用的接種方法有稀釋涂布平板法和平板劃線(xiàn)法，其中稀釋涂布平板法分離純化土壤中微生物的步驟為土壤取樣→溶化→梯度稀釋→涂布平板。3、由題圖可知，①稱(chēng)取10g土壤；②10g土壤加入盛有90mL無(wú)菌水的錐形瓶中制備土壤懸浮液，稀釋了101；③進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)匆来蜗♂屩?01、102、103稀釋度；④使用稀釋涂布平板法篩選菌株，接種了104稀釋度菌液0.1mL，長(zhǎng)出16個(gè)菌落；推測(cè)1g土壤中石油分解菌數(shù)=16÷0.1×104÷10=1.6×105個(gè)；⑤鑒別優(yōu)質(zhì)菌種，保存?zhèn)溆茫茰y(cè)使用甘油管藏法或臨時(shí)保存法。【詳解】A、根據(jù)題圖分析可知，圖示接種方法為稀釋涂布平板法，涂布平板的稀釋度為104，據(jù)結(jié)果推測(cè)1g土壤中石油分解菌數(shù)=16÷0.1×104÷10=1.6×105個(gè)，A錯(cuò)誤；B、根據(jù)題圖分析可知，③進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)m然分離、純化石油分解菌時(shí)，可以采用稀釋涂布平板法，也可以采用平板劃線(xiàn)法，但平板劃線(xiàn)法不需要進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)簿褪遣恍枰M(jìn)行③步驟操作，B錯(cuò)誤；C、稀釋涂布時(shí)，先取少量菌夜（不超過(guò)0.1ml）滴加到培養(yǎng)基表面，再將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻，用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面，而不是利用涂布器從盛有菌液的試管中蘸取菌液，進(jìn)行涂布，C錯(cuò)誤；D、根據(jù)題圖分析可知，⑤鑒別優(yōu)質(zhì)菌種和保存?zhèn)溆?，無(wú)論使用甘油管藏法或臨時(shí)保存法，都要應(yīng)用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)④中的石油降解菌，獲得菌液，而鑒別優(yōu)質(zhì)菌種就是要檢測(cè)菌的數(shù)量和石油降解能力，D正確。故選D。6．為探究校內(nèi)植物園土壤中的細(xì)菌種類(lèi)，某興趣小組采集園內(nèi)土壤樣本并開(kāi)展相關(guān)實(shí)驗(yàn)。下列有關(guān)敘述正確的是（

）A．采樣時(shí)只需采集植物園中某一地點(diǎn)的土壤樣本B．活細(xì)菌數(shù)目可通過(guò)稀釋涂布平板法和平板劃線(xiàn)法來(lái)測(cè)定C．土壤溶液稀釋倍數(shù)越低，越容易得到單菌落D．可根據(jù)菌落的顏色、形態(tài)和大小來(lái)初步鑒定細(xì)菌種類(lèi)【答案】D【分析】微生物常見(jiàn)的接種的方法：①平板劃線(xiàn)法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線(xiàn)，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線(xiàn)的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線(xiàn)的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落；②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落?！驹斀狻緼、本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖翘骄啃?nèi)植物園土壤中的細(xì)菌種類(lèi)，故應(yīng)隨機(jī)采集植物園中多個(gè)不同地點(diǎn)的土壤樣本，A錯(cuò)誤；B、平板劃線(xiàn)法不能用于統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目，B錯(cuò)誤；C、土壤溶液稀釋倍數(shù)足夠高時(shí)，才能將聚集的細(xì)菌分散開(kāi)，有助于在培養(yǎng)基表面形成單菌落，而非稀釋倍數(shù)越低越越易得到，C錯(cuò)誤；D、不同種類(lèi)細(xì)菌的菌落特征一般不同，鑒定細(xì)菌種類(lèi)時(shí)，可根據(jù)菌落的顏色、形態(tài)和大小來(lái)初步鑒定細(xì)菌種類(lèi)，D正確。故選D。7．下列有關(guān)微生物培養(yǎng)與應(yīng)用技術(shù)的敘述，正確的是（）A．培養(yǎng)微生物所用的培養(yǎng)基中都必須含有水、無(wú)機(jī)鹽、碳源和氮源等基本營(yíng)養(yǎng)成分B．若要檢測(cè)飲水機(jī)的直飲水中大腸桿菌是否超標(biāo),待檢測(cè)水樣需要經(jīng)過(guò)滅菌后再檢測(cè)C．采用稀釋涂布平板法接種后,不同濃度的菌液均可在培養(yǎng)基表面形成單菌落D．分離土壤中分解尿素菌純培養(yǎng)后,利用含酚紅的尿素培養(yǎng)基可作進(jìn)一步鑒定【答案】D【分析】無(wú)菌技術(shù)的主要內(nèi)容①對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒；②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌；③為避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行；④實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周?chē)奈锲废嘟佑|?！驹斀狻緼、自養(yǎng)型微生物不需要提供碳源，A錯(cuò)誤；B、若要檢測(cè)飲水機(jī)的直飲水中大腸桿菌是否超標(biāo)，待檢測(cè)水樣需要直接進(jìn)行檢測(cè)，待檢測(cè)水樣不能進(jìn)行滅菌處理，B錯(cuò)誤；C、采用稀釋涂布平板法接種后，稀釋到合適的濃度的菌液才可在培養(yǎng)基表面形成單菌落，C錯(cuò)誤；D、分解尿素的細(xì)菌能合成脲酶，催化尿素分解產(chǎn)生的NH3可以作為細(xì)菌生長(zhǎng)的氮源。如果培養(yǎng)基中加入了酚紅指示劑，尿素分解的產(chǎn)物NH3會(huì)使培養(yǎng)基的pH升高，酚紅指示劑將變紅，因此，可用酚紅指示劑對(duì)分解尿素的微生物進(jìn)行鑒定，D正確。故選D。8．以下說(shuō)法正確的是（

）A．土壤中的尿素分解菌之所以能分解尿素是因?yàn)樗鼈兡芎铣赡蛩孛窧．用尿素為唯一氮源加入酚紅指示劑的培養(yǎng)基，培養(yǎng)細(xì)菌后指示劑變成紅色C．用尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基加入酚紅指示劑的目的是做細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)成分D．檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)的操作時(shí)，應(yīng)選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行計(jì)數(shù)【答案】B【分析】土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中，需要使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，計(jì)數(shù)的關(guān)鍵是經(jīng)梯度稀釋后的倍數(shù)要合適，計(jì)數(shù)時(shí)通常選擇30300之間的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。【詳解】A、土壤中的尿素分解菌之所以能分解尿素是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕?，A錯(cuò)誤；B、由于細(xì)菌分解在尿素的過(guò)程中合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，會(huì)使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，指示劑變成紅色，B正確；C、酚紅指示劑不能作為細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)成分，C錯(cuò)誤；D、檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)的操作時(shí)，應(yīng)選擇菌落數(shù)在30300之間的實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤。故選B。9．下列有關(guān)“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)的敘述，正確的是（）A．實(shí)驗(yàn)中采集的土樣經(jīng)高溫滅菌后，可以用于制取土壤稀釋液B．測(cè)定土壤樣品中的活菌數(shù)目，常用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法C．分離土壤中能分解尿素的細(xì)菌時(shí)，應(yīng)選擇以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基D．若實(shí)驗(yàn)組菌落平均數(shù)為37個(gè)/平板，空白對(duì)照平板上有3個(gè)菌落，則本組菌落數(shù)的平均值為34個(gè)/平板【答案】C【分析】絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的微生物。稀釋涂布平板法：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋?zhuān)缓髮⒉煌♂尪鹊木悍謩e涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。【詳解】A、實(shí)驗(yàn)中采集的土樣經(jīng)高溫滅菌后會(huì)殺死所有微生物，無(wú)法分離得到分解尿素的細(xì)菌，A錯(cuò)誤；B、測(cè)定土壤樣品中的活菌數(shù)目，常用稀釋涂布平板法，B錯(cuò)誤；C、以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基上，尿素分解菌可以分解尿素作為氮源而能存活下來(lái)，其他不能分解尿素的微生物因?yàn)槿狈Φ炊鵁o(wú)法生存，從而達(dá)到篩選、分離尿素分解菌的目的，C正確；D、空白對(duì)照平板上有菌落，說(shuō)明培養(yǎng)基滅菌不合格，那么實(shí)驗(yàn)組平板上得到的菌落數(shù)據(jù)也是不準(zhǔn)確的，D錯(cuò)誤。故選C。10．如圖是研究人員從紅棕壤中篩選高效分解尿素細(xì)菌的過(guò)程示意圖。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．步驟②的液體培養(yǎng)基含有的唯一氮源是尿素B．步驟③的平板培養(yǎng)基是加入了適量尿素的LB固體培養(yǎng)基C．步驟③采用稀釋涂布平板法接種，期待獲得能分解尿素細(xì)菌的單菌落D．步驟④挑?、壑芯浞謩e接種，可通過(guò)溶液pH的變化比較細(xì)菌分解尿素的能力【答案】B【分析】微生物常見(jiàn)的接種的方法：①平板劃線(xiàn)法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線(xiàn)，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線(xiàn)的開(kāi)始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線(xiàn)的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過(guò)大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)基表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落?！驹斀狻緼、步驟②為選擇培養(yǎng)，該液體培養(yǎng)基中含有的唯一氮源是尿素，A正確；B、步驟③的平板培養(yǎng)基是應(yīng)該是以尿素作為唯一氮源的固體培養(yǎng)基，其目的是篩選出分解尿素的微生物，而LB固體培養(yǎng)基中本身就含有氮源，B錯(cuò)誤；C、步驟③采用稀釋涂布平板法接種，其目的是通過(guò)梯度稀釋獲得能分解尿素細(xì)菌的單菌落，C正確；D、步驟④挑?、壑芯浞謩e接種，可通過(guò)溶液pH的變化比較細(xì)菌分解尿素的能力，尿素在分解過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生氨和二氧化碳，進(jìn)而會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基中pH發(fā)生變化，D正確。故選B。11．尿素含氮量高，化學(xué)性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定，是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中一種重要的氮肥，進(jìn)入土壤能被某類(lèi)細(xì)菌分解。研究人員擬從土壤中分離該類(lèi)細(xì)菌并大量培養(yǎng)，操作流程如下圖。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A．不同的微生物均選104、105、106倍的土壤稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)B．為了確保結(jié)果準(zhǔn)確，對(duì)每個(gè)平板的菌落都要計(jì)數(shù)并取平均值C．在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑可以初步鑒定尿素分解菌D．④每次劃線(xiàn)前都需要灼燒接種環(huán)，其目的都是防止雜菌污染【答案】C【分析】培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，故選擇應(yīng)以尿素作為唯一氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物。【詳解】A、由于土壤中細(xì)菌比真菌多，在測(cè)定土壤中細(xì)菌數(shù)量時(shí)，一般選用104、105、106倍稀釋的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)，A錯(cuò)誤；B、對(duì)微生物進(jìn)行分離、計(jì)數(shù)常用的接種方法是稀釋涂布平板法，估算每毫升樣品中的細(xì)菌數(shù)時(shí)，往往選取30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，B錯(cuò)誤；C、要分離獲得分解尿素的細(xì)菌，培養(yǎng)基應(yīng)以尿素為唯一氮源，在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，可初步鑒定尿素分解菌，C正確；D、每次劃線(xiàn)前均需灼燒接種環(huán)，其中第一次劃線(xiàn)前的灼燒是為了殺死接種環(huán)上的雜菌，之后劃線(xiàn)前的灼燒都是為了殺死上次劃線(xiàn)殘留的菌種，D錯(cuò)誤。故選C。12．某生物興趣小組完成了“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)，具體操作流程如圖所示。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．振蕩的目的是增加尿素分解菌的濃度B．純化培養(yǎng)階段使用選擇培養(yǎng)基，應(yīng)以尿素為唯一氮源C．中間試管涂布的3個(gè)平板的菌落平均數(shù)大于160個(gè)D．由圖中數(shù)據(jù)可知土樣中的菌株數(shù)約為個(gè)【答案】A【分析】每克樣品中的菌株數(shù)=（c÷V）×M，其中c代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)。【詳解】A、振蕩的目的是提高培養(yǎng)液中溶解氧的含量，使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)充分接觸微生物，提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率，其目的并不是增加尿素分解菌的濃度，A錯(cuò)誤；B、只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，該實(shí)驗(yàn)的目的是對(duì)土壤中分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)，故應(yīng)選用尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，B正確；C、由圖觀(guān)察可知，用于計(jì)數(shù)的試管稀釋倍數(shù)大于中間試管的稀釋倍數(shù)，據(jù)此推測(cè)，中間試管涂布的3個(gè)平板的菌落平均數(shù)大于160個(gè)，C正確；D、平均菌落數(shù)為160個(gè)，該過(guò)程中稀釋的倍數(shù)為，為，取進(jìn)行涂布操作，因此由圖示菌落計(jì)數(shù)結(jié)果可知10克土樣中的菌株數(shù)約為個(gè)，D正確。故選A。13．幽門(mén)螺桿菌是一種致病菌（該菌對(duì)萬(wàn)古霉素、兩性霉素B等抗生素不敏感，對(duì)青霉素高度敏感），其危害主要是引起胃黏膜的炎癥，形成急慢性胃炎及消化道潰瘍。體檢時(shí)可通過(guò)14C尿素呼氣實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)幽門(mén)螺桿菌感染情況。受試者口服14C標(biāo)記的尿素膠囊后，定時(shí)收集受試者呼出的氣體并測(cè)定其中是否含有14CO2以及量的多少，作為診斷指標(biāo)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)幽門(mén)螺桿菌能夠以14C標(biāo)記的尿素為氮源，是因?yàn)槠淠墚a(chǎn)生，若要將提取的幽門(mén)螺桿菌進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，配制培養(yǎng)基將僅允許幽門(mén)螺桿菌生長(zhǎng)，同時(shí)抑制其他微生物生長(zhǎng)，因此，該培養(yǎng)基又稱(chēng)為培養(yǎng)基。(2)醫(yī)生為準(zhǔn)確測(cè)定患者胃內(nèi)的幽門(mén)螺桿菌數(shù)量，采取下列圖示方法進(jìn)行計(jì)數(shù)，此方法常用到的接種工具是，已知步驟④獲得的三個(gè)平板的菌落數(shù)分別為90、95、100，對(duì)照組平板為0。則1ml胃液提取物中平均幽門(mén)螺桿菌數(shù)量約為個(gè)，該方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，其原因是。(3)經(jīng)測(cè)定患者胃液中的幽門(mén)螺桿菌呈陽(yáng)性，醫(yī)生提供的治療方案是患者需連續(xù)服用（填抗生素名稱(chēng)）兩周至14C檢測(cè)呈陰性后停藥。研究表明，幽門(mén)螺桿菌可以通過(guò)消化道傳染，為避免傳染給他人，醫(yī)生還建議患者就餐時(shí)。【答案】(1)脲酶選擇(2)涂布器9.5×106當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀(guān)察到的只是一個(gè)菌落(3)青霉素使用公筷【分析】培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物?！驹斀狻浚?）幽門(mén)螺桿菌能夠以尿素為氮源，是因?yàn)槠淠墚a(chǎn)生脲酶，脲酶能夠?qū)⒛蛩胤纸鉃榘?；選擇培養(yǎng)基是指能夠抑制其它微生物生長(zhǎng)，同時(shí)保證所需微生物生長(zhǎng)，故配制培養(yǎng)基將僅允許幽門(mén)螺桿菌生長(zhǎng)，同時(shí)抑制其他微生物生長(zhǎng)，因此，該培養(yǎng)基又稱(chēng)為選擇培養(yǎng)基。（2）據(jù)圖可知，圖中的菌落在平板上分布均勻，接種方法是稀釋涂布平板法，接種工具是涂布器；分析題意，對(duì)照組平板為0，說(shuō)明培養(yǎng)基滅菌徹底，且微生物計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)選擇菌落在30－300之間的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，圖示過(guò)程稀釋了104倍，則1ml胃液提取物中平均幽門(mén)螺桿菌數(shù)量約為（90+95+100）÷3÷0.1×104=9.5×106個(gè)；由于個(gè)別菌落可能是由兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌形成的，在平板上觀(guān)察計(jì)數(shù)時(shí)只是一個(gè)菌落，所以運(yùn)用這種方法統(tǒng)計(jì)的結(jié)果往往較實(shí)際值偏小。（3）幽門(mén)螺桿菌屬于原核生物，能被青霉素殺死，故，醫(yī)生提供的治療方案是患者需連續(xù)服用青霉素兩周至14C檢測(cè)呈陰性后停藥；研究表明，幽門(mén)螺桿菌可以通過(guò)消化道傳染，為避免傳染給他人，醫(yī)生還建議患者就餐時(shí)應(yīng)注意用公筷等。14．人體每天產(chǎn)生的尿酸有2/3通過(guò)腎排出，其余1/3則通過(guò)腸道排泄，其中腸道菌群對(duì)尿酸的代謝起著重要作用。利用腸道細(xì)菌降解尿酸可為高尿酸血癥的治療提供新思路。回答下列問(wèn)題。(1)研究人員需要從（填“高”或“低”）尿酸人群的糞便中采集標(biāo)本，制備成菌液保存。要測(cè)定菌液中細(xì)菌的數(shù)目，可在顯微鏡下用計(jì)數(shù)板直接計(jì)數(shù)；除此之外還可以采用，該方法的測(cè)量值與實(shí)際值相比一般會(huì)偏小。(2)本實(shí)驗(yàn)用到的尿酸選擇培養(yǎng)基需要進(jìn)行（填滅菌方式）處理；培養(yǎng)皿需要進(jìn)行（填滅菌方式）處理。(3)高效尿酸降解菌的馴化過(guò)程采用濃度梯度法把菌液分別接種于不同濃度尿酸（1.7mmol/L，1.9mmol/L、2.1mmol/L，2.3mmol/L）選擇培養(yǎng)液中，每組3個(gè)平行樣本，厭氧條件下37℃，220r/min搖床培養(yǎng)48h。每組3個(gè)平行樣本的目的是；在厭氧條件下培養(yǎng)的原因是。(4)通過(guò)馴化篩選獲得1株腸道細(xì)菌，命名為S3A，其在不同尿酸濃度馴化培養(yǎng)基中均可生長(zhǎng)且尿酸降解率如下表，通過(guò)分析可得到的結(jié)論是。培養(yǎng)基初始尿酸濃度/（mmol·L1）降解后培養(yǎng)基尿酸濃度/（mmol·L1）尿酸降解率/%1.74±0.061.18±0.0432.21.89±0.041.19±0.0337.02.05±0.091.20±0.0641.52.26±0.081.13±0.0450.0【答案】(1)低細(xì)菌或血細(xì)胞稀釋涂布平板法(2)高壓蒸汽滅菌干熱滅菌（或高壓蒸汽滅菌）(3)依據(jù)平行重復(fù)原則，排除偶然因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的干擾該菌為腸道菌群，代謝類(lèi)型為異養(yǎng)厭氧型，需要提供無(wú)氧條件(4)培養(yǎng)基中尿酸濃度越高，S3A菌的尿酸降解率越