細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則培訓(xùn)課件

細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則第一節(jié)細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷第二節(jié)細(xì)菌感染的特異性防治第三節(jié)細(xì)菌感染的抗菌藥物治療原則2細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則重點(diǎn)難點(diǎn)熟悉了解掌握1.細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)診斷方法的原理與應(yīng)用2.疫苗的種類1.細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)流程2.常用疫苗的特點(diǎn)

細(xì)菌感染的抗菌藥物治療原則醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）3細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷l(xiāng)aboratorydiagnosisofbacterialinfection第一節(jié)4細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則含菌標(biāo)本可疑細(xì)菌感染血液（雙份）形態(tài)學(xué)檢查細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定細(xì)菌成分檢測(cè)特異性抗體檢測(cè)免疫學(xué)技術(shù)分子生物學(xué)技術(shù)質(zhì)譜分析法生物芯片技術(shù)細(xì)菌培養(yǎng)生物化學(xué)檢查血清學(xué)鑒定藥物敏感試驗(yàn)動(dòng)物（毒力）試驗(yàn)等凝集試驗(yàn)免疫熒光試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)免疫印跡試驗(yàn)等核酸雜交聚合酶鏈反應(yīng)高通量測(cè)序技術(shù)等基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOFMS）固態(tài)芯片、液態(tài)芯片蛋白質(zhì)芯片、基因芯片等凝集試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中和試驗(yàn)免疫熒光試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法5細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）一、臨床標(biāo)本的采集與運(yùn)送原則早期采集無(wú)菌操作選感染部位最佳時(shí)間采集雙份血清標(biāo)本采集做好標(biāo)記置于密閉容器內(nèi)盡快送檢標(biāo)本運(yùn)送6細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）

二、細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查暗視野顯微鏡相差顯微鏡主要用于檢查在生活狀態(tài)下細(xì)菌的動(dòng)力及其運(yùn)動(dòng)情況不染色標(biāo)本7細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則

二、細(xì)菌的形態(tài)學(xué)檢查細(xì)菌的染色革蘭染色抗酸染色熒光金胺O染色其他特殊染色醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）8細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則葡萄球菌（革蘭染色陽(yáng)性）大腸埃希菌（革蘭染色陰性）醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）革蘭染色結(jié)果（張力平提供）9細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則細(xì)菌檢查的一般程序

三、細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定標(biāo)本膿/痰/尿等血液/腦脊液涂片、染色、鏡檢分離培養(yǎng)純培養(yǎng)染色鏡檢生化反應(yīng)血清學(xué)鑒定藥敏試驗(yàn)增菌醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）10細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則1.細(xì)菌的分離培養(yǎng)：是微生物學(xué)診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，是最可靠的傳統(tǒng)診斷技術(shù)（1）培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分（2）酸堿度（pH）（3）培養(yǎng)時(shí)間（4）溫度（5）氣體環(huán)境

三、細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定在血平板上的肺炎鏈球菌菌落（張力平提供）醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）血平板上的完全溶血環(huán)【引用資源ID678481】11細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則

細(xì)菌對(duì)糖類和蛋白質(zhì)的分解產(chǎn)物不完全一樣，故有關(guān)酶類和代謝產(chǎn)物可作為鑒別細(xì)菌的重要依據(jù)之一2.生化試驗(yàn)三、細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定腸道感染細(xì)菌在含鐵雙糖培養(yǎng)基上的生化反應(yīng)（張力平提供）醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）12細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則3.血清學(xué)鑒定

三、細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定（1）利用已知的特異性抗體檢查未知的純培養(yǎng)細(xì)菌（2）對(duì)細(xì)菌進(jìn)行種、群、型的鑒定

沙門(mén)菌血清學(xué)鑒定（倪語(yǔ)星尚紅《臨床微生物檢驗(yàn)》第5版PPT）醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）13細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則4.藥物敏感試驗(yàn)（antimicrobialsusceptibilitytest）最低抑菌濃度（minimuminhibitoryconcentration,MIC）能夠完全抑制培養(yǎng)基中細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度最低殺菌濃度（minimumbactericidalconcentration,MBC）能夠殺死培養(yǎng)基中細(xì)菌的最低藥物濃度方法：紙片擴(kuò)散法、稀釋法、E-test法……

三、細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）14細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則4.藥物敏感試驗(yàn)（1）紙片擴(kuò)散法在瓊脂平板上接種待檢病原菌；貼含有定量抗生素的紙片后培養(yǎng)；紙片上的抗生素向周圍瓊脂中擴(kuò)散，形成了逐漸減小的藥物濃度梯度；根據(jù)藥物紙片周圍抑菌環(huán)的有無(wú)和大小來(lái)判定試驗(yàn)菌對(duì)該抗菌藥物耐藥或敏感。

三、細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）15細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則4.藥物敏感試驗(yàn)（2）稀釋法以一定濃度的抗菌藥物與含有待檢細(xì)菌的培養(yǎng)基進(jìn)行一系列不同倍數(shù)稀釋（通常為雙倍稀釋），經(jīng)培養(yǎng)后觀察其最低抑菌濃度。方法瓊脂稀釋法——使用瓊脂培養(yǎng)基肉湯稀釋法——使用肉湯培養(yǎng)基

三、細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）16細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則4.藥物敏感試驗(yàn)（3）濃度梯度瓊脂擴(kuò)散法（E-test法）：簡(jiǎn)稱濃度梯度法將稀釋法和擴(kuò)散法的原理相結(jié)合，使用預(yù)先設(shè)定的穩(wěn)定且連續(xù)的抗菌藥物濃度梯度，采用瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)以確定不同抗菌藥物對(duì)微生物的最低抑菌濃度（MIC）。

三、細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）E-test試驗(yàn)結(jié)果（張力平提供）17細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則5.自動(dòng)微生物鑒定及藥敏分析系統(tǒng)將培養(yǎng)基上分離的可疑致病菌配制成純菌液，放入自動(dòng)微生物鑒定及藥敏分析系統(tǒng)中，通過(guò)計(jì)算機(jī)自動(dòng)掃描、讀數(shù)、分析、最后報(bào)告鑒定及藥敏結(jié)果。

三、細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定自動(dòng)微生物鑒定及藥敏分析系統(tǒng)（張力平提供）醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）18細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則藥敏檢測(cè)原理微型化的肉湯稀釋試驗(yàn)根據(jù)CLSI標(biāo)準(zhǔn)得到相應(yīng)敏感度：敏感、中度敏感和耐藥微生物數(shù)碼鑒定原理計(jì)算并比較數(shù)據(jù)庫(kù)內(nèi)每個(gè)細(xì)菌條目對(duì)系統(tǒng)中每個(gè)生化反應(yīng)出現(xiàn)的頻率總和性能特點(diǎn)自動(dòng)化程度較高、檢測(cè)速度快、可鑒定細(xì)菌種類及藥敏試驗(yàn)種類多、數(shù)據(jù)處理軟件功能強(qiáng)大、結(jié)果準(zhǔn)確可靠系統(tǒng)組成測(cè)試卡（板）、菌液接種器、培養(yǎng)和監(jiān)測(cè)系統(tǒng)、數(shù)據(jù)管理系統(tǒng)自動(dòng)微生物鑒定及藥敏分析系統(tǒng)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）19細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則四、細(xì)菌成分的檢查

1.免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）用已知抗體檢測(cè)待檢標(biāo)本中未知的顆粒性抗原。IgG的Fc段與金葡菌的SPA結(jié)合，F(xiàn)ab段與細(xì)菌抗原結(jié)合后，可使金葡菌發(fā)生肉眼可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象。用已知的熒光抗體檢測(cè)待檢標(biāo)本中的未知抗原，借助熒光顯微鏡觀察。用酶標(biāo)抗體檢測(cè)特異性可溶性抗原。利用雙向瓊脂擴(kuò)散與電泳技術(shù)相結(jié)合的方法。由于電泳和電滲作用，抗原向正極移動(dòng)，抗體向負(fù)極移動(dòng)，在比例合適處形成肉眼可見(jiàn)的沉淀線。凝集試驗(yàn)協(xié)同凝集試驗(yàn)免疫熒光試驗(yàn)酶免疫技術(shù)對(duì)流免疫電泳20細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則2.分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)四、細(xì)菌成分的檢查醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）PCR技術(shù)可用于常規(guī)培養(yǎng)困難或耗時(shí)太長(zhǎng)的病原體以及細(xì)菌毒素基因的檢測(cè)核酸雜交技術(shù)可從標(biāo)本中直接檢出病原菌基因，對(duì)尚不能或難以分離培養(yǎng)的病原菌尤為適用高通量測(cè)序技術(shù)可用于病原菌的分類鑒定、菌群結(jié)構(gòu)和物種多樣性的分析和系統(tǒng)發(fā)育研究，具有檢測(cè)未知病原體的應(yīng)用前景21細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則3.質(zhì)譜分析法（massspectrometry）質(zhì)譜法是將有機(jī)化合物的分子電離、碎裂，然后按照離子的質(zhì)荷比（m/z）大小把生成的各種離子分離，檢測(cè)其強(qiáng)度并排列成譜；根據(jù)細(xì)菌的蛋白質(zhì)質(zhì)譜圖，與數(shù)據(jù)庫(kù)中的細(xì)菌參考譜圖比對(duì)，對(duì)細(xì)菌的屬、種，甚至不同亞種進(jìn)行鑒定與分類；常用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOFMS）。該技術(shù)具有簡(jiǎn)便快速、準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好、低成本、自動(dòng)化和高通量等特點(diǎn)。四、細(xì)菌成分的檢查醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）22細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則4.生物芯片技術(shù)（biochiptechnology）將核酸片段、蛋白質(zhì)或酶、抗原或抗體、細(xì)胞及組織等生物樣品有序地固定于硅片、尼龍膜等固相支持物上，在一定的條件下進(jìn)行生化反應(yīng)。用化學(xué)熒光法、酶標(biāo)法或同位素法顯示反應(yīng)結(jié)果，通過(guò)特定的儀器讀取與收集數(shù)據(jù)，并用軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，從而判斷樣品中靶分子的種類和數(shù)量。分類：液態(tài)芯片/固態(tài)芯片、蛋白芯片/基因芯片/糖芯片/細(xì)胞芯片等

四、細(xì)菌成分的檢查醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）23細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則4.生物芯片技術(shù)用途微生物感染的快速診斷：對(duì)某些病原體多重快速檢查與鑒別；微生物變異機(jī)制和耐藥機(jī)制的研究；微生物基因分型及分子流行病學(xué)的調(diào)查；微生物基因組及后基因組的研究：可研究病原體基因的序列、轉(zhuǎn)錄表達(dá)及抗原的表達(dá)；抗微生物感染藥物的研制等。

四、細(xì)菌成分的檢查醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）24細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則用已知的細(xì)菌或其特異性抗原檢測(cè)病人血清或其他體液中的抗體及其效價(jià)的變化，可以作為感染性疾病的輔助診斷。由于本實(shí)驗(yàn)多采取病人血清檢測(cè)抗體，故常稱為血清學(xué)診斷（serologicaldiagnosis）。一般適用于抗原性較強(qiáng)的細(xì)菌，以及病程較長(zhǎng)的感染性疾病。也可用于調(diào)查人群對(duì)某病原菌的免疫應(yīng)答水平以及檢測(cè)疫苗接種后的預(yù)防效果。

五、細(xì)菌感染的血清學(xué)診斷醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）25細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則血清學(xué)試驗(yàn)應(yīng)用舉例直接凝集試驗(yàn)?zāi)c熱癥（肥達(dá)試驗(yàn)）間接凝集試驗(yàn)鉤體病、梅毒免疫熒光技術(shù)炭疽、立克次體病、恙蟲(chóng)病等多種細(xì)菌感染性疾病補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)慢性布魯氏菌病中和試驗(yàn)風(fēng)濕熱（抗O試驗(yàn)）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)鼠疫、梅毒、Q熱等多種細(xì)菌感染性疾病細(xì)菌性感染的血清學(xué)診斷醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）26細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則細(xì)菌感染的特異性防治specificpreventionandtreatmentofbacterialinfection第二節(jié)27細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則機(jī)體獲得特異性免疫力的方式醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）自然免疫主動(dòng)免疫：隱性或顯性感染被動(dòng)免疫：獲得母體的Ab(胎盤(pán)/初乳)人工免疫析主動(dòng)免疫：疫苗被動(dòng)免疫：抗毒素或丙種球蛋白等28細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則疫苗的種類死疫苗（killedvaccine）：亦稱滅活疫苗（inactivatedvaccine）用物理、化學(xué)方法殺死病原微生物，但仍保持其免疫原性的生物制劑；常用的有：傷寒、霍亂、流行性腦膜炎、鉤端螺旋體病等?；钜呙纾╨ivingvaccine）：亦稱減毒活疫苗（attenuatedvaccine）是通過(guò)毒力變異或人工選擇法（如溫度敏感株）而獲得的減毒或無(wú)毒株，或從自然界直接選擇出來(lái)的弱毒或無(wú)毒株經(jīng)培養(yǎng)后制成的疫苗。常用的有：卡介苗、鼠疫、炭疽等細(xì)菌性減毒活疫苗。

一、人工主動(dòng)免疫醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）30細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則區(qū)別點(diǎn)活疫苗死疫苗制品特點(diǎn)減毒或無(wú)毒的細(xì)菌，可在體內(nèi)增殖死菌，在體內(nèi)不增殖，但仍保持免疫原性制備方法通過(guò)自然篩選/非正常培養(yǎng)得到減毒株通過(guò)物理和/或化學(xué)方法使病原體失活接種次數(shù)和接種量1次，量小2～3次，量大接種反應(yīng)類似輕型感染或隱性感染可出現(xiàn)發(fā)熱、全身或局部腫痛等反應(yīng)免疫應(yīng)答的類型體液免疫和細(xì)胞免疫體液免疫免疫維持時(shí)間1～5年或更長(zhǎng)0.5～1年毒力回升與安全性有可能，對(duì)免疫缺陷者有風(fēng)險(xiǎn)不可能，安全性好疫苗的穩(wěn)定性相對(duì)不穩(wěn)定相對(duì)穩(wěn)定保存不易保存，存活2周，真空凍干可長(zhǎng)期保存易保存，可保存1年以上活疫苗與死疫苗的比較31細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則疫苗的種類類毒素（toxoid）外毒素經(jīng)0.3%～0.4%甲醛處理后，失去了毒性但仍保持免疫原性的生物制品。加入吸附劑（佐劑）氫氧化鋁后便制成精制類毒素。吸附劑可延緩類毒素在體內(nèi)的吸收時(shí)間，刺激機(jī)體產(chǎn)生足量的抗毒素。舉例：白喉類毒素、破傷風(fēng)類毒素

一、人工主動(dòng)免疫醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）32細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則疫苗的種類多糖疫苗（carbohydratevaccine）提取純化細(xì)菌中能引起特異性保護(hù)作用的多糖成份制備而成；成分單一，不存在易引起免疫副反應(yīng)的物質(zhì)，更為安全有效，已成為應(yīng)用最多的疫苗之一；在臨床上被廣泛使用的莢膜多糖疫苗包括：肺炎鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌莢膜多糖疫苗等。

一、人工主動(dòng)免疫醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）33細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則疫苗的種類多糖結(jié)合疫苗將細(xì)菌的聚糖共價(jià)連接到適當(dāng)?shù)牡鞍纵d體上而制備形成；TI-Ag轉(zhuǎn)變TD-Ag，抗體IgM為主向IgG為主轉(zhuǎn)變，抗體親和力更強(qiáng)，效價(jià)更高，持續(xù)時(shí)間也更長(zhǎng)；目前上市的細(xì)菌多糖蛋白結(jié)合疫苗有：b型流感嗜血桿菌、腦膜炎球菌和肺炎球菌等多糖結(jié)合疫苗。

一、人工主動(dòng)免疫醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）34細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則疫苗的種類聯(lián)合疫苗（combinedvaccines）：由不同抗原組分混合制成的疫苗，包括多聯(lián)疫苗與多價(jià)疫苗；多聯(lián)疫苗：由兩種或兩種以上疫苗原液按特定比例配合制成的具有多種免疫原性的疫苗，可同時(shí)預(yù)防多種疾病。如：百白破疫苗（DTP）；多價(jià)疫苗：由同一種細(xì)菌的不同亞型或不同血清型抗原合并組成的含多價(jià)抗原成分的一種疫苗，典型的如23價(jià)肺炎球菌多糖疫苗。

一、人工主動(dòng)免疫醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）35細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則疫苗的種類基因工程疫苗（geneengineeredvaccine）是利用基因工程技術(shù)將編碼病原體保護(hù)性抗原表位的目的基因?qū)朐嘶蛘婧吮磉_(dá)系統(tǒng)中，利用表達(dá)的抗原產(chǎn)物或重組體本身制成的疫苗；基因工程亞單位疫苗、基因工程載體疫苗、核酸疫苗、基因缺失活疫苗等。

一、人工主動(dòng)免疫醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）36細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則抗毒素（antitoxin）將類毒素或外毒素給馬免疫制成；用途：外毒素所致疾病的治療和緊急預(yù)防；精制破傷風(fēng)、白喉和肉毒抗毒素以及多價(jià)精制氣性壞疽抗毒素等；使用這些異種抗毒素時(shí)應(yīng)注意避免Ⅰ型超敏反應(yīng)的發(fā)生。

二、人工被動(dòng)免疫醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）37細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則丙種球蛋白（gammaglobulin）血清丙種球蛋白、胎盤(pán)丙種球蛋白；用途：某些感染性疾病的緊急預(yù)防、燒傷患者預(yù)防感染、丙種球蛋白缺乏癥患者、經(jīng)長(zhǎng)期化療或放療的腫瘤患者等?？咕澹╝ntisera）已基本被淘汰；對(duì)于由銅綠假單胞菌多重耐藥菌株所引起的嚴(yán)重?zé)齻膊「腥镜闹委?，尚可以考慮試用。

二、人工被動(dòng)免疫醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）38細(xì)菌感染的檢測(cè)方法與防治原則兩種人工免疫方法的比較醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（第9版）區(qū)別點(diǎn)人工主動(dòng)免疫人工被動(dòng)免疫免疫物質(zhì)抗原抗體或細(xì)胞因子等接種次數(shù)1～3次1次免疫出現(xiàn)時(shí)間慢（注射后2～4周）快（注射后立即出現(xiàn)）免疫維持時(shí)間長(zhǎng)（數(shù)