生物人教版選修3學案專題2細胞工程專題整合與評估

專題整合與評估[知識建網(wǎng)]答案速填：①全能性②愈傷組織③雜種細胞④微型繁殖⑤原代培養(yǎng)⑥細胞核⑦胚胎移植⑧骨髓瘤細胞⑨抗體[要語必背]1．植物組織培養(yǎng)技術、植物體細胞雜交技術的理論基礎都有細胞的全能性，后者還有細胞膜的流動性；動物細胞核移植技術的原理是動物細胞核的全能性。2．人工誘導原生質(zhì)體融合的方法有物理法(離心、振動、電激)和化學法(聚乙二醇處理)，而動物細胞融合還可以用滅活的病毒誘導。3．植物分生區(qū)附近(如莖尖)的病毒極少，甚至無病毒，因此用分生區(qū)組織進行組織培養(yǎng)，再生的植株就不會或極少感染病毒。4．動物細胞培養(yǎng)一般選用胚胎或幼齡動物的組織，細胞在培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)細胞貼壁(生長)和接觸抑制的現(xiàn)象。培養(yǎng)的條件包括：無菌、無毒的環(huán)境，適宜的營養(yǎng)、溫度和pH及氣體環(huán)境。5．雜交瘤細胞是由經(jīng)免疫的B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合而成的，具有既能無限增殖又能產(chǎn)生專一抗體的能力。6．制備單克隆抗體過程中第一次篩選是為了獲得雜交瘤細胞，第二次篩選是為了獲得能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞。7．單克隆抗體最主要的優(yōu)點是特異性強、靈敏度高，并可大量制備。主要用途有：作為診斷試劑、用于治療疾病和運載藥物。[知識整合促貫通]一、細胞工程與基因工程的比較及動植物細胞工程的比較1．細胞工程與基因工程的比較細胞工程和基因工程都可以突破物種間的遺傳障礙，大跨度超越物種間的不親和性，創(chuàng)造出人們所需要的新品種。但基因工程是在分子水平上進行的操作，基本過程一般要經(jīng)過基因操作的“四步曲”；細胞工程是在細胞水平或細胞器水平上進行的操作，所用的技術主要有植物組織培養(yǎng)、植物體細胞雜交、動物細胞培養(yǎng)和細胞核移植等。植物的體細胞雜交雖然能解決物種之間的不親和性(生殖隔離)，但形成的新物種往往是不育的；基因工程不但可以突破物種間的遺傳障礙，而且形成的新品種是可育的。例如，科學家將能分解不同烴類化合物的單孢桿菌的相關基因，轉(zhuǎn)移到另一種單孢桿菌內(nèi)，培育成能分解石油的“超級細菌”，這是基因工程的成果。但如果將三種假單孢桿菌融合或?qū)⑵鋬?nèi)的細胞器移入第四種假單孢桿菌體內(nèi)，使其具有分解四種烴類化合物的功能，這樣的生物技術應屬于細胞工程。2．植物細胞工程與動物細胞工程的主要區(qū)別植物細胞工程動物細胞工程技術手段植物組織培養(yǎng)、植物體細胞雜交等動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合、單克隆抗體的制備、核移植等分散細胞的酶纖維素酶和果膠酶胰蛋白酶雜種細胞培養(yǎng)材料組織eq\o(→,\s\up17(脫分化))愈傷組織eq\o(→,\s\up17(再分化))根、芽→植物體原代培養(yǎng)→傳代培養(yǎng)培養(yǎng)基成分礦質(zhì)元素、蔗糖、維生素、植物激素等葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等【典題精練1】下列關于細胞工程的敘述中，不正確的是()A．細胞融合技術、細胞培養(yǎng)技術屬于細胞工程涉及的技術范圍B．動物可通過細胞融合技術培育出新品種C．植物細胞工程采用的各項技術手段的理論基礎是細胞的全能性D．植物組織培養(yǎng)是將植物細胞置于包含植物生長和發(fā)育所需的全部營養(yǎng)成分的固體培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)的【解析】A項中各項工程學手段是動物細胞工程中常用的技術手段；植物細胞工程的理論基礎是細胞的全能性；植物組織培養(yǎng)需要離體培養(yǎng)，此時植物細胞不能自養(yǎng)，需要在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，且培養(yǎng)基中含有植物生長和發(fā)育所需的各種營養(yǎng)成分；綜上所述，A、C、D三項正確。同種動物可通過細胞融合技術得到融合細胞，但此類細胞全能性仍被抑制，不能發(fā)育成新個體，成為新品種?！敬鸢浮緽【典題精練2】下列關于現(xiàn)代生物工程技術的應用，可以實現(xiàn)的是()A．利用基因工程技術可獲得符合生產(chǎn)要求的突變植株B．利用細胞工程技術可以大量制備純度高的抗流感病毒的抗體C．利用動物細胞培養(yǎng)或植物組織培養(yǎng)技術，均可獲得完整生物體D．利用細胞工程技術，將兩種二倍體植物的花粉進行細胞雜交，可獲得二倍體可育植株【解析】基因工程是利用原有基因進行的重組，不能產(chǎn)生突變植株，動物細胞培養(yǎng)只能形成細胞或器官，不能形成動物個體；將兩種二倍體植物的花粉進行細胞雜交，由于遠緣雜交不親和，不能獲得二倍體可育植株。【答案】B二、動物細胞工程技術之間的相互關系常見的動物細胞工程技術有動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合、核移植、克隆技術以及單克隆抗體的制備等，其中動物細胞培養(yǎng)是動物細胞工程技術的基礎。動物細胞培養(yǎng)的理論依據(jù)是細胞的增殖；動物細胞融合的理論依據(jù)是細胞膜的流動性；克隆技術的理論依據(jù)是動物細胞核的全能性。克隆技術涉及的生物技術有核移植、胚胎移植和動物細胞培養(yǎng)；而單克隆抗體的制備涉及動物細胞的融合和動物細胞的培養(yǎng)。動物細胞融合最主要的應用是單克隆抗體的制備?！镜漕}精練3】“篩選”是生物工程中常用的技術手段，下列關于篩選的敘述錯誤的是()A．基因工程中利用標記基因篩選出的細胞不一定含重組質(zhì)粒B．在誘變育種中需通過篩選才能得到數(shù)量較少的有利變異C．植物體細胞雜交過程中，原生質(zhì)體融合后獲得的細胞需進行篩選D．單克隆抗體制備過程中，第一次篩選的目的是獲得足夠數(shù)量的能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞【解析】標記基因位于質(zhì)粒上，基因工程中利用標記基因篩選出的細胞不一定都含有重組質(zhì)粒，也可能只含有普通質(zhì)粒，A正確；誘變育種的原理是基因突變，而基因突變具有不定向性和多害少利性，因此在誘變育種中需要通過篩選才能得到數(shù)量較少的有利變異，B正確；植物體細胞雜交過程中，誘導原生質(zhì)體融合后，可獲得多種融合細胞，因此需要對獲得的細胞進行篩選，C正確；單克隆抗體制備過程中，第一次篩選出的是雜交瘤細胞，第二次篩選出的是既能迅速大量增殖又能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞，D錯誤?！敬鸢浮緿【典題精練4】單純皰疹病毒Ⅰ型(HSV－Ⅰ)可引起水泡性口唇炎。利用雜交瘤技術制備出抗HSV－Ⅰ的單克隆抗體可快速檢測HSV－Ⅰ?；卮鹣铝袉栴}：(1)在制備抗HSV－Ⅰ的單克隆抗體的過程中，先給小鼠注射一種純化的HSV－Ⅰ蛋白，一段時間后，若小鼠血清中抗________的抗體檢測呈陽性，說明小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了________反應，再從小鼠的________中獲取B淋巴細胞。將該B淋巴細胞與小鼠的________細胞融合，再經(jīng)過篩選、檢測，最終可獲得所需的雜交瘤細胞，該細胞具有的特點是___________________________。(2)若要大量制備抗該蛋白的單克隆抗體，可將該雜交瘤細胞注射到小鼠的________中使其增殖，再從________中提取、純化獲得。(3)通過上述方法得到的單克隆抗體可準確地識別這種HSV－Ⅰ蛋白，其原因是該抗體具有______和______等特性?！窘馕觥拷o小鼠注射純化的HSV－Ⅰ蛋白(相當于抗原)是為了使小鼠產(chǎn)生免疫反應，檢測結果是陽性表明產(chǎn)生了抗體。再從小鼠的淋巴器官中分離漿細胞，將其與小鼠骨髓瘤細胞融合，并篩選出雜交瘤細胞，這樣的細胞既能無限增殖又能產(chǎn)生單一抗體。想大量獲得該抗體可以把雜交瘤細胞培養(yǎng)在動物細胞培養(yǎng)液中，再分離；也可以將雜交瘤細胞注射到小鼠腹腔中使其增殖，然后從小鼠腹水中提取、純化獲得。單克隆抗體因為是只針對一種抗原，所以特異性強，因為這種抗體的純度高、濃度高，能迅速和抗原結合發(fā)生抗原——抗體反應，所以靈敏度高?！敬鸢浮?1)HSV－Ⅰ蛋白體液免疫脾臟骨髓瘤無限增殖且可產(chǎn)生單一抗體(2)腹腔腹水(3)純度高特異性強(其他合理答案也可)[高考鏈接·明考情]一、選擇題1．(2019·江蘇卷)(多選)如圖為雜交瘤細胞制備示意圖。骨髓瘤細胞由于缺乏次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT－)，在HAT篩選培養(yǎng)液中不能正常合成DNA，無法生長。下列敘述正確的是(ACD)A．可用滅活的仙臺病毒誘導細胞融合B．兩兩融合的細胞都能在HAT培養(yǎng)液中生長C．雜交瘤細胞需進一步篩選才能用于生產(chǎn)D．細胞膜的流動性是細胞融合的基礎真題解析：動物細胞融合可以用滅活的仙臺病毒進行誘導，或用PEG、電激等進行誘導，A正確；免疫B細胞與骨髓瘤細胞進行融合產(chǎn)生的融合細胞有：免疫B細胞自身融合細胞、骨髓瘤細胞自身融合細胞、雜交瘤細胞，據(jù)題干信息骨髓瘤細胞在HAT培養(yǎng)基上無法生長，因此骨髓瘤細胞自身融合細胞在HAT培養(yǎng)基上無法生長，而免疫B細胞自身融合細胞和雜交瘤細胞可以在HAT培養(yǎng)基上生長，B錯誤；融合后產(chǎn)生的雜交瘤細胞并不是都能表達產(chǎn)生所需的單克隆抗體，需要進一步篩選，C正確；動物細胞融合依據(jù)的原理是細胞膜的流動性，D正確。2．(2018·江蘇卷)(多選)如圖為細胞融合的示意圖，下列敘述正確的是(BC)A．若a細胞和b細胞是植物細胞，需先去分化再誘導融合B．a(chǎn)細胞和b細胞之間的融合需要促融處理后才能實現(xiàn)C．c細胞的形成與a、b細胞膜的流動性都有關D．c細胞將同時表達a細胞和b細胞中的所有基因真題解析：若a細胞和b細胞是植物細胞，需要用酶解法去掉細胞壁后再誘導融合，[1]融合完成后的細胞再經(jīng)脫分化和再分化培養(yǎng)，A錯誤；a細胞和b細胞之間的融合需要借助物理、化學等方法處理后才能實現(xiàn)，[2,3]B正確；c細胞的形成要經(jīng)過細胞膜的融合，與a、b細胞膜的流動性都有關，C正確；c細胞內(nèi)有a、b兩細胞的遺傳物質(zhì)，但不能同時表達a、b細胞中的所有基因，D錯誤。真題探源：[1]教材第36頁：植物細胞外面有一層細胞壁，這層細胞壁阻礙著細胞間的雜交。因此，在進行體細胞雜交之前，必須先利用纖維素酶和果膠酶去除這層細胞壁，獲得具有活力的原生質(zhì)體。[2]教材第36頁：進行原生質(zhì)體間的融合，必須要借助一定的技術手段進行人工誘導。[3]教材第52頁：動物細胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同，誘導動物細胞融合的方法與植物原生質(zhì)體融合的方法也類似，常用的誘導因素有聚乙二醇(PEG)、滅活的病毒、電激等。核心素養(yǎng)鏈接：本題考查動物細胞或植物細胞融合的原理與處理方法等知識，意在考查學生的辨別比較能力，體現(xiàn)了生物學科中科學思維等核心素養(yǎng)。3．(2016·江蘇卷)下列有關細胞工程的敘述，正確的是(D)A．PEG是促細胞融合劑，可直接誘導植物細胞融合B．用原生質(zhì)體制備人工種子，要防止細胞破裂C．骨髓瘤細胞經(jīng)免疫處理，可直接獲得單克隆抗體D．核移植克隆的動物，其線粒體DNA來自供卵母體真題解析：用纖維素酶和果膠酶可去掉植物細胞壁，得到原生質(zhì)體，PEG(聚乙二醇)可誘導植物原生質(zhì)體融合，[1]A錯誤；制備人工種子是用人工薄膜包裹經(jīng)組織培養(yǎng)形成的胚狀體、腋芽等，[2]B錯誤；單克隆抗體是雜交瘤細胞產(chǎn)生的，不能由骨髓瘤細胞經(jīng)免疫處理后產(chǎn)生，[3]C錯誤；體細胞核移植技術培育的克隆動物中，細胞核DNA來自提供體細胞的個體，細胞質(zhì)中線粒體DNA來自提供卵母細胞的個體，[4]D正確。真題探源：[1]教材第36頁：在進行體細胞雜交之前，必須先利用纖維素酶和果膠酶去除這層細胞壁，獲得具有活力的原生質(zhì)體……化學法一般是用聚乙二醇(PEG)作為誘導劑來誘導細胞融合。[2]教材第39頁：所謂人工種子，就是以植物組織培養(yǎng)得到的胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽等為材料，經(jīng)過人工薄膜包裝得到的種子。[3]教材第54頁：將雜交瘤細胞在體外條件下做大規(guī)模培養(yǎng)，或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖，這樣，從細胞培養(yǎng)液或小鼠腹水中，就可以提取出大量的單克隆抗體了。[4]教材第47頁：動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體。核心素養(yǎng)鏈接：本題考查細胞融合、人工種子的制備、單克隆抗體的制備以及體細胞核移植等細胞工程的知識，意在考查學生對所學知識要點的理解能力，體現(xiàn)了對科學思維的培養(yǎng)。二、非選擇題4．(2019·全國卷Ⅱ)植物組織培養(yǎng)技術在科學研究和生產(chǎn)實踐中得到了廣泛的應用?；卮鹣铝袉栴}。(1)植物微型繁殖是植物繁殖的一種途徑。與常規(guī)的種子繁殖方法相比，這種微型繁殖技術的特點有能保持植物原有的遺傳特性，繁殖速度快(答出2點即可)。(2)通過組織培養(yǎng)技術，可把植物組織細胞培養(yǎng)成胚狀體，再通過人工種皮(人工薄膜)包裝得到人工種子(如圖所示)，這種人工種子在適宜條件下可萌發(fā)生長。人工種皮具備透氣性的作用是有利于胚狀體進行呼吸作用。人工胚乳能夠為胚狀體生長提供所需的物質(zhì)，因此應含有植物激素、礦質(zhì)元素和糖等幾類物質(zhì)。(3)用脫毒苗進行繁殖，可以減少作物感染病毒。為了獲得脫毒苗，可以選取植物的莖尖進行組織培養(yǎng)。(4)植物組織培養(yǎng)技術可與基因工程技術相結合獲得轉(zhuǎn)基因植株。將含有目的基因的細胞培養(yǎng)成一個完整植株的基本程序是含目的基因的細胞eq\o(→,\s\up17(培養(yǎng)))愈傷組織eq\o(→,\s\up17(誘導分化))小植株(用流程圖表示)。真題解析：(1)與常規(guī)的種子繁殖方法相比，植物微型繁殖技術具有能保持植物原有的遺傳特性、繁殖速度快等特點。(2)人工種皮具有透氣性，有利于胚狀體進行呼吸作用；人工胚乳能夠為胚狀體生長提供植物激素、礦質(zhì)元素和糖等物質(zhì)。(3)植物分生區(qū)附近的病毒極少，甚至無病毒。為獲得脫毒苗，可以選取植物的莖尖進行組織培養(yǎng)。(4)將含有目的基因的細胞培養(yǎng)成一個完整植株的基本程序是含目的基因的細胞eq\o(→,\s\up17(培養(yǎng)))愈傷組織eq\o(→,\s\up17(誘導分化))小植株。5．(2018·全國卷Ⅲ)2018年《細胞》期刊報道，中國科學家率先成功地應用體細胞對非人靈長類動物進行克隆，獲得兩只克隆猴——“中中”和“華華”?；卮鹣铝袉栴}：(1)“中中”和“華華”的獲得涉及核移植過程，核移植是指將動物的一個細胞核，移入一個已去掉細胞核的卵母細胞中。通過核移植方法獲得的克隆猴，與核供體相比，克隆猴體細胞的染色體數(shù)目不變(填“減半”“加倍”或“不變”)。(2)哺乳動物的核移植可以分為胚胎細胞核移植和體細胞核移植，胚胎細胞核移植獲得克隆動物的難度小于(填“大于”或“小于”)體細胞核移植，其原因是胚胎細胞分化程度低，恢復全能性相對容易。(3)在哺乳動物核移植的過程中，若分別以雌性個體和雄性個體的體細胞作為核供體，通常，所得到的兩個克隆動物體細胞的常染色體數(shù)目相同(填“相同”或“不同”)，性染色體組合不同(填“相同”或“不同”)。真題解析：(1)動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體。[1]用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物，與核供體相比，其細胞的染色體數(shù)目不變。(2)由于動物胚胎細胞分化程度低，恢復其全能性相對容易，而動物體細胞分化程度高，恢復其全能性十分困難，所以，胚胎細胞核移植獲得克隆動物的難度明顯低于體細胞核移植。[2](3)哺乳動物雌性個體和雄性個體的體細胞中常染色體數(shù)目相同，所以分別以雌性個體和雄性個體的體細胞為供體，通常所得到的兩個克隆動物體細胞的常染色體數(shù)目相同，但其性染色體組合不同。真題探源：[1]教材第47頁：動物核移植是將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體。[2]教材第47頁：由于動物胚胎細胞分化程度低，恢復其全能性相對容易，而動物體細胞分化程度高，恢復其全能性十分困難，因此，動物體細胞核移植的難度也就明顯高于胚胎細胞核移植。核心素養(yǎng)鏈接：本題以科技前沿為真實背景考查動物細胞工程中細胞核移植與克隆動物的相關知識，意在考查學生的記憶理解能力與信息提取和分析能力，體現(xiàn)了對科學思維和社會責任等的培養(yǎng)。6．(2017·海南卷)甲、乙兩名同學分別以某種植物的綠色葉片和白色花瓣為材料，利用植物組織培養(yǎng)技術繁殖該植物?；卮鹣铝袉栴}：(1)以該植物的綠色葉片和白色花瓣作為外植體，在一定條件下進行組織培養(yǎng)，均能獲得試管苗，其原理是綠色葉片和白色花瓣的細胞具有全能性，在一定條件下能發(fā)育成完整的植株。(2)甲、乙同學在誘導愈傷組織所用的培養(yǎng)基中，均加入一定量的蔗糖，蔗糖水解后可得到葡萄糖、果糖。若要用細胞作為材料進行培養(yǎng)獲得幼苗，該細胞應具備的條件是具有完整的細胞核(填“具有完整的細胞核”“具有葉綠體”或“已轉(zhuǎn)入抗性基因”)。(3)圖中A、B、C所示的是不同的培養(yǎng)結果，該不同結果的出現(xiàn)主要是由于培養(yǎng)基中兩種激素用量的不同造成的，這兩種激素是細胞分裂素、生長素。A中的愈傷組織是葉肉細胞經(jīng)脫分化形成的。(4)若該種植物是一種雜合體的名貴花卉，要快速獲得與原植株基因型和表現(xiàn)型都相同的該種花卉，可用組織培養(yǎng)方法繁殖，在培養(yǎng)時，不能(填“能”或“不能”)采用經(jīng)減數(shù)分裂得到的花粉粒作為外植體，原因是對雜合體的植株來說，其體細胞的基因型相同，而花粉粒的基因型與體細胞的基因型不同。用花粉粒進行組織培養(yǎng)得到花卉基因型不同于原植株。真題解析：(1)植物細胞(如綠色葉片細胞和白色花瓣細胞)一般都具有全能性，[1]故用它們作為外植體，在一定條件下進行組織培養(yǎng)，均能獲得試管苗。(2)蔗糖是二糖，水解產(chǎn)生的單糖是葡萄糖和果糖。離體細胞可經(jīng)培養(yǎng)形成完整植株，是因為該細胞的細胞核中含有控制其生長發(fā)育的全部遺傳信息。離體的細胞全能性的體現(xiàn)與是否含葉綠體或是否轉(zhuǎn)入抗性基因無關。(3)離體植物細胞的發(fā)育方向與生長素和細胞分裂素的用量不同有關。[2]若生長素用量大于細胞分裂素用量，則促進生根；若生長素用量小于細胞分裂素用量，則誘導長出叢芽；若生長素用量等于細胞分裂素用量，則促進愈傷組織的形成。離體的葉肉細胞可經(jīng)脫分化形成愈傷組織，再經(jīng)再分化形成試管苗。(4)欲快速獲得保持優(yōu)良性狀的雜合體的名貴花卉，可用組織培養(yǎng)方法繁殖，[3]但應采用體細胞作為外植體，而不采用經(jīng)減數(shù)分裂得到的花粉粒作為外植體，因為花粉粒的基因型與體細胞的基因型不同，用花粉粒進行組織培養(yǎng)得到的花卉的基因型不同于原植株。真題探源：[1]教材第33～34頁：具有某種生物全部遺傳信息的任何一個細胞，都具有發(fā)育成完整生物體的潛能，也就是說，每個生物細胞都具有全能性的特點。[2]教材第34頁：植物體的根、莖、葉細胞一般都具有全能性，在一定的營養(yǎng)和激素等條件下，可以脫分化形成愈傷組織。將愈傷組織轉(zhuǎn)接到含有不同激素成分的培養(yǎng)基上，就可以誘導其再分化生成胚狀體或叢芽，進而發(fā)育成完整的小植株。[3]教材第38頁：植物組織培養(yǎng)技術不僅可以保持優(yōu)良品種的遺傳特性，還可以高效快速地實現(xiàn)種苗的大量繁殖。核心素養(yǎng)鏈接：本題考查植物細胞工程中植物組織培養(yǎng)技術及其應用，意在考查學生的分析與理解能力，體現(xiàn)了對科學思維和社會責任等生物學科核心素養(yǎng)的培養(yǎng)。7．(2017·全國卷Ⅲ)編碼蛋白甲的DNA序列(序列甲)由A、B、C、D、E五個片段組成，編碼蛋白乙和丙的序列由序列甲的部分片段組成，如圖1所示?；卮鹣铝袉栴}：(1)現(xiàn)要通過基因工程的方法獲得蛋白乙，若在啟動子的下游直接接上編碼蛋白乙的DNA序列(TTCGCTTCT……CAGGAAGGA)，則所構建的表達載體轉(zhuǎn)入宿主細胞后不能翻譯出蛋白乙，原因是編碼乙的DNA序列起始端無ATG，轉(zhuǎn)錄出的mRNA無起始密碼子。(2)某同學在用PCR技術獲取DNA片段B或D的過程中，在PCR反應體系中加入了DNA聚合酶、引物等，還加入了序列甲作為模板，加入了dNTP作為合成DNA的原料。(3)現(xiàn)通過基因工程方法獲得了甲、乙、丙三種蛋白，要鑒定這三種蛋白是否具有刺激T淋巴細胞增殖的作用，某同學做了如下實驗：將一定量的含T淋巴細胞的培養(yǎng)液平均分成四組，其中三組分別加入等量的蛋白甲、乙、丙，另一組作為對照，培養(yǎng)并定期檢測T淋巴細胞濃度，結果如圖2。①由圖2可知：當細胞濃度達到a時，添加蛋白乙的培養(yǎng)液中T淋巴細胞濃度不再增加，此時若要使T淋巴細胞繼續(xù)增殖，可采用的方法是進行細胞傳代培養(yǎng)。細胞培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)箱中通常要維持一定的CO2濃度，CO2的作用是維持培養(yǎng)液的pH。②僅根據(jù)圖1、圖2可知，上述甲、乙、丙三種蛋白中，若缺少C(填“A”“B”“C”“D”或“E”)片段所編碼的肽段，則會降低其刺激T淋巴細胞增殖的效果。真題解析：(1)若在啟動子的下游直接接上編碼蛋白乙的DNA序列(TTCGCTTCT……CAGGAAGGA)，則基因表達載體中編碼蛋白乙的DNA序列起始端無ATG，轉(zhuǎn)錄出的mRNA無起始密碼子，使所構建的表達載體轉(zhuǎn)入宿主細胞后不能翻譯出蛋白乙。(2)在PCR技術中，除了引物和耐高溫的DNA聚合酶外，還需要序列甲(含目的基因的DNA片段)作為模板，dNTP(脫氧核苷三磷酸)作為原料。(3)①當細胞濃度達到a時，添加蛋白乙的培養(yǎng)液中T淋巴細胞濃度不再增加，可能是由于發(fā)生了接觸抑制，可用胰蛋白酶處理貼壁生長的細胞，然后分瓶繼續(xù)進行傳代培養(yǎng)。[1]動物細胞培養(yǎng)中CO2的作用是維持培養(yǎng)液的pH。[2]②對照圖1和圖2分析，能刺激T淋巴細胞增殖的甲和乙中都含有C片段，而對T淋巴細胞增殖刺激作用很弱的丙中沒有C片段，據(jù)此可知，若缺少C片段所編碼的肽段，則會降低其刺激T淋巴細胞增殖的效果。真題探源：[1]教材第45頁：貼滿瓶壁的細胞需要重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細胞繼續(xù)增殖。這樣的培養(yǎng)過程通常被稱為傳代培養(yǎng)。[2]教材第46頁：(動物)細胞培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2，O2是細胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH。進行細胞培養(yǎng)時，通常采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶，將其置于含95%空氣加5%CO2的混合氣體的培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。核心素養(yǎng)鏈接：本題將基因工程與細胞工程結合起來，考查了PCR技術、動物細胞的培養(yǎng)等知識，意在考查學生對所學知識進行遷移運用和對實驗結果進行分析的能力，體現(xiàn)了對科學思維和科學探究的培養(yǎng)。8．(2016·全國卷Ⅱ節(jié)選)如圖表示通過核移植等技術獲得某種克隆哺乳動物(二倍體)的流程。回答下列問題：(1)圖中A表示正常細胞核，染色體數(shù)為2n，則其性染色體的組成可為XX或XY。過程①表示去除細胞核，該過程一般要在卵母細胞培養(yǎng)至適當時期再進行，去核時常采用顯微操作的方法。(2)經(jīng)過多次傳代后，供體細胞中遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性會降低。因此，選材時必須關注傳代次數(shù)。(3)若獲得的克隆動物與供體動物性狀不完全相同，從遺傳物質(zhì)的角度分析其原因是卵母細胞的細胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會對克隆動物的性狀產(chǎn)生影響。(4)與克隆羊“多莉(利)”培育成功一樣，其他克隆動物的成功獲得也證明了動物已分化體細胞的細胞核具有全能性。真題解析：(1)哺乳動物的正常細胞核中性染色體的組成為XX(雌性)或XY(雄性)。卵母細胞需培養(yǎng)至減數(shù)第二次分裂的中期，常采用顯微操作法去除細胞核。[1](2)細胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)過多次傳代培養(yǎng)，細胞中遺傳物質(zhì)的穩(wěn)定性會降低。因此，選材時一般選10代以內(nèi)的細胞，以保證細胞正常的二倍體核型。[2](3)由于卵母細胞細胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會對克隆動物的性狀產(chǎn)生影響，所以獲得的克隆動物與供體動物性狀不完全相同。(4)克隆羊“多莉(利)”以及其他克隆動物的培育成功，證明了已分化的動物體細胞的細胞核具有全能性。真題探源：[1]教材第49頁：目前核移植技術中普遍使用的去核方法是顯微操作去核法。[2]教材第46頁：目前使用的或冷凍保存的正常細胞通常為10代以內(nèi)，以保持細胞正常的二倍體核型。9．(2015·安徽卷節(jié)選)科研人員采用轉(zhuǎn)基因體細胞克隆技術獲得轉(zhuǎn)基因綿羊，以便通過乳腺生物反應器生產(chǎn)人凝血因子Ⅸ醫(yī)用蛋白，其技術路線如圖。(1)由過程①獲得的A為含目的基因的表達載體。(2)在核移植之前，必須先去掉受體卵母細胞的核，目的是保證核遺傳物質(zhì)來自含目的基因的成纖維細胞。受體應選用MⅡ期卵母細胞。(3)采用胎兒成纖維細胞進行轉(zhuǎn)基因體細胞克隆，理論上可獲得無限個轉(zhuǎn)基因綿羊，這是因為整合有目