大球蓋菇液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

1大球蓋菇液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準規(guī)定了大球蓋菇液體菌種術(shù)語定義及生產(chǎn)的基本要求，主要包括制作要求、生產(chǎn)工藝流程、質(zhì)量要求、技術(shù)要求、生產(chǎn)記錄與存檔。本標(biāo)準適用于大球蓋菇液體菌種的生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準GB50073潔凈廠房設(shè)計規(guī)范GB/T12728食用菌術(shù)語NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程NY/T2375食用菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范NY/T1731食用菌菌種良好作業(yè)規(guī)范3術(shù)語和定義GB/T12728界定的術(shù)語和定義適用于本文件。3.1液體菌種液體菌種是指在裝有液體培養(yǎng)基的容器中，通過控制溫度、不斷通氣攪拌或振蕩，獲得的大量菌絲體片段或菌絲球的液體形態(tài)的食用菌菌種。4生產(chǎn)要求4.1環(huán)境條件應(yīng)符合NY/T528的規(guī)定。4.2生產(chǎn)車間2應(yīng)符合GB50073的規(guī)定。4.3生產(chǎn)原料培養(yǎng)基生產(chǎn)用水應(yīng)符合GB5749的要求，化學(xué)投入品應(yīng)符合NY/T2375要求，天然材料要求新鮮、無霉變、無螨、無蟲、潔凈、干燥。4.4菌種選擇選用菌絲生長旺盛、高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、抗逆性強的菌種。5生產(chǎn)工藝5.1工藝流程母種→搖瓶液體菌種→發(fā)酵罐液體菌種。5.2母種制備5.2.1培養(yǎng)基配方推薦培養(yǎng)基配方：馬鈴薯200g、葡萄糖20g、蛋白胨3g、磷酸二氫鉀1.5g，硫酸鎂1g，瓊脂粉15g~20g，水1000mL。5.2.2母種培養(yǎng)基制作母種培養(yǎng)基按照推薦培養(yǎng)基配方進行配制，裝入試管（18mmⅹ180mm或20mmⅹ200mm）中，分裝量為試管長度的1/5，使用硅膠塞封口；將試管置于高壓蒸汽滅菌鍋中，0.1Mpa滅菌30min。滅菌后將試管趁熱排放在斜面板上冷卻。5.2.3接種與培養(yǎng)在無菌條件下，用接種鉤取黃豆粒大小的初始菌種接種至母種培養(yǎng)基中，24℃~26℃避光培養(yǎng)，菌絲長滿斜面后檢驗合格即可使用。5.2.4母種質(zhì)量要求培養(yǎng)期間每天檢查，及時淘汰染菌或劣勢菌種。菌絲長滿管后逐支進行感官和菌絲微觀特征檢驗，合格菌種進入生產(chǎn)流程。5.3搖瓶液體菌種生產(chǎn)5.3.1搖瓶液體菌種培養(yǎng)基配方推薦選用以下配方：3a)配方1：可溶性淀粉20g/L、麩皮5g/L、磷酸二氫鉀2g/L、維生素C5mg/L，pH自然；b)配方2：玉米粉20g/L、麩皮5g/L、磷酸二氫鉀2g/L、維生素C5mg/L，pH自然；c)配方3：可溶性淀粉20g/L、豆粕粉5g/L、磷酸二氫鉀2g/L、維生素C5mg/L，pH自然；d)配方4：玉米粉20g/L、豆粕粉5g/L、磷酸二氫鉀2g/L、維生素C5mg/L，pH自然。5.3.2培養(yǎng)基配制按液體培養(yǎng)基配方配制，混合均勻，裝入250mL、500mL或1000mL無色玻璃三角瓶中，裝液量宜為搖甁容量的1/4，瓶塞封口，并用報紙或牛皮紙包扎，置于高壓蒸汽滅菌鍋中，在0.1Mpa下滅菌30min。5.3.3接種待培養(yǎng)基冷卻至25℃以下，在無菌條件下，用接種鏟切取3～5塊（3～5）mm×（3～5）mm的母種塊迅速轉(zhuǎn)接于搖甁培養(yǎng)基內(nèi)，封口。5.3.4培養(yǎng)24℃~26℃條件下，靜置培養(yǎng)24h，然后置于搖床上震蕩暗光培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速140r/min～160r/min，培養(yǎng)時間7d～10d。5.3.5搖瓶液體菌種質(zhì)量要求菌液澄清透明，菌球均勻密集，無異味，鏡檢無雜菌、菌絲形態(tài)正常。5.4發(fā)酵罐液體菌種生產(chǎn)5.4.1推薦培養(yǎng)基配方在5.3.1配方的基礎(chǔ)上應(yīng)加入0.1mL/L的消泡劑。5.4.2培養(yǎng)基配制將配制好的培養(yǎng)基材料攪拌均勻，倒入或用泵抽入處理好的發(fā)酵罐中，加水定容至所需體積。培養(yǎng)基投料總量為罐體總?cè)莘e的60%~80%。擰緊上料口蓋，在0.1Ma壓力下滅菌40min~60min。5.4.3接種滅菌結(jié)束后培養(yǎng)基溫度冷卻至24℃以下，利用火焰保護接種，接種量為罐內(nèi)培養(yǎng)基總體積的5.4.4培養(yǎng)4根據(jù)菌絲生長情況,適時調(diào)節(jié)進氣閥，通入適量無菌空氣，同時調(diào)節(jié)排氣閥，維持罐壓。培養(yǎng)具體要求如下：a）罐壓：0.02Mpa~0.05Mpa；b）罐溫：25℃±2℃;c）通氣量：1:0.5~1.2[V/(V·min)]（料液體積/空氣體積/每分鐘d）培養(yǎng)時間：6~9d。5.4.5液體菌種檢測每隔24h從取樣口取樣檢查1次，培養(yǎng)結(jié)束后肉眼觀察菌絲球密集、培養(yǎng)液澄清、無異味，鏡檢無雜菌。5.4.6貯藏大球蓋菇液體菌種生產(chǎn)后應(yīng)立即使用，如不能立即使用應(yīng)進行貯藏。貯藏條件：在發(fā)酵罐內(nèi)注入無菌空