實(shí)驗(yàn)二凝集反應(yīng)課件

主講教師：張秋玉

實(shí)驗(yàn)二凝集反應(yīng)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)院ZhangQiuyu凝集反應(yīng)（agglutination)沉淀反應(yīng)(precipitation)補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)中和實(shí)驗(yàn)免疫酶標(biāo)技術(shù)(eg.ELISA)免疫熒光技術(shù)放射免疫技術(shù)發(fā)光免疫技術(shù)經(jīng)典反應(yīng)現(xiàn)代反應(yīng)抗原抗體反應(yīng)類型抗原或抗體的檢測方法ZhangQiuyu反應(yīng)類型抗原類型及例子凝集反應(yīng)顆粒性Ag，如細(xì)菌、RBC、表面結(jié)合可溶性Ag的乳膠顆粒等沉淀反應(yīng)可溶性Ag，如血清中免疫球蛋白、補(bǔ)體、αFP、HbsAg等補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)有補(bǔ)體參與，SRBC和其溶血素組成指示系統(tǒng)中和實(shí)驗(yàn)特殊作用的Ag，如病毒、毒素、激素、酶1.1經(jīng)典的血清學(xué)反應(yīng)ZhangQiuyuZhangQiuyu1.2現(xiàn)代的抗原抗體反應(yīng)：現(xiàn)代抗原抗體反應(yīng)用標(biāo)記技術(shù)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的肉眼可見反應(yīng)，其特異性、敏感性均增加，且可以定性、定量甚至定位；缺點(diǎn)是需特殊精密檢測儀。名稱標(biāo)記物檢測儀器缺點(diǎn)免疫酶標(biāo)技術(shù)酶酶標(biāo)儀

免疫熒光技術(shù)熒光熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀

放射免疫技術(shù)同位素液閃儀放射性污染，有半衰期發(fā)光免疫技術(shù)發(fā)光劑發(fā)光現(xiàn)微測定儀

ZhangQiuyu凝集反應(yīng)的定義及基本類型

1．直接凝集試驗(yàn)顆粒性Ag與相應(yīng)Ab的反應(yīng)玻片法：如血型的鑒定、細(xì)菌菌種的鑒定試管法：肥達(dá)氏反應(yīng)2．間接凝集試驗(yàn)（可溶性Ag+載體=致敏顆粒）與相應(yīng)Ab的反應(yīng)3．間接凝集抑制試驗(yàn)可溶性Ag與相應(yīng)Ab作用后，再與致敏顆粒反應(yīng)4.反相間接凝集試驗(yàn)（可溶性Ab+載體=致敏顆粒)與相應(yīng)Ag的反應(yīng)ZhangQiuyuZhangQiuyuZhangQiuyuZhangQiuyu人的紅細(xì)胞表面有20幾種血型抗原系統(tǒng)ABO血型系統(tǒng)是第一個(gè)被描述的紅細(xì)胞血型系統(tǒng)，由Landsteiner于1901年提出：血型ABABO紅細(xì)胞上的凝集原（抗原）ABA和B無抗原血型鑒定的原理根據(jù)紅細(xì)胞上所含抗原種類將人類血型分為如下血型：ABO血型系統(tǒng)中有兩種抗原，分別稱為A抗原和B抗原，均存在于紅細(xì)胞膜的外表面。ZhangQiuyu1.抗原本質(zhì)：血型抗原是鑲嵌于紅細(xì)胞膜上的糖蛋白與糖脂，ABO抗原特異性是在H抗原基礎(chǔ)上形成的ZhangQiuyu2.抗體本質(zhì)：血漿中存在兩種相應(yīng)的抗體即抗A抗體和抗B抗體血型ABABO紅細(xì)胞上的凝集原（抗原）ABA和B無抗原血清中的凝集素（抗體）抗B抗A無抗體抗A和抗B

☆A(yù)BO血型系統(tǒng)的抗體為天然抗體，主要為IgM，不能通過胎盤。ZhangQiuyuZhangQiuyuZhangQiuyu如果交叉配血試驗(yàn)的兩側(cè)都沒有凝集反應(yīng)，為配血相合，可以進(jìn)行輸血；如果主側(cè)有凝集反應(yīng)，則為配血不合，不能輸血；如果主側(cè)不引起凝集反應(yīng)，而次側(cè)有凝集反應(yīng)，只能在應(yīng)急情況下輸血，輸血時(shí)不宜太快太多（<300ml），并密切觀察，如發(fā)生輸血反應(yīng)，應(yīng)立即停止輸注。

ZhangQiuyuZhangQiuyu載玻片1塊/每人**用完各自用水沖洗凈置消毒缸三棱針1根/每人用后棄垃圾斗棉簽根/每人（先取再取1)用后棄垃圾斗牙簽1根/每人（兩端使用）用后棄垃圾斗碘伏生理鹽水試管試管架標(biāo)記筆實(shí)驗(yàn)材料ZhangQiuyu操作步驟

i．取血：搓揉左手無名指的指腹——碘伏消毒——用三棱針刺1-2滴血——將無名指的指腹封住盛有鹽水的試管管口，用傾倒法將血滴洗入鹽水中并混勻形成1%的血球懸液。ii．鑒定：取潔凈玻片一塊，用標(biāo)記筆在中央劃線分區(qū)，標(biāo)明“A”、“B”區(qū)——在“A”、“B”區(qū)分別滴加抗A、抗B血清各1滴——用毛細(xì)吸管吸取待檢的血球懸液滴入抗A、抗B血清中，用牙簽兩端分別拌勻——將玻片平持手中，前后左右轉(zhuǎn)動使之充分混勻，室溫放置10-15分鐘后觀察結(jié)果。ZhangQiuyuZhangQiuyu注意事項(xiàng)

取血時(shí)，注意無菌操作，避免HBsAg的交叉污染（*HBsAg攜帶者）；刺血時(shí)，盡可能一次性成功，用力適當(dāng)，讓血自然流出或搓揉后流出為佳，勿強(qiáng)行擠壓。鑒定時(shí)，滴1滴抗血清及血球懸液即可，多則兩邊易混；牙簽兩頭不可混用；O型血無凝集現(xiàn)象，無須反復(fù)檢測。ZhangQiuyu血型抗B血清抗A血清O__A_+B+_AB++結(jié)果判斷ZhangQiuyuABO血型的遺傳規(guī)律？父母血型分別為A型、B型，他們子女的血型可能是何種？？父母分別為A型和O型，子女有無可能是B型〖思考〗ZhangQiuyu三、E-花結(jié)形成實(shí)驗(yàn)

原理

人的外周血T淋巴細(xì)胞上特有能與綿羊紅細(xì)胞結(jié)合的受體，稱E受體；在一定實(shí)驗(yàn)條件下，綿羊紅細(xì)胞與該受體結(jié)合形成以T細(xì)胞為中心，四周繞以綿羊紅細(xì)胞的玫瑰花團(tuán)，故稱E花結(jié)實(shí)驗(yàn)。E受體與CD2分子、LFA-2（淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原）為同一物質(zhì)。

ZhangQiuyu花結(jié)分類：Ea-RFC(效應(yīng)T細(xì)胞)：正常值為15-35%。E-RFC(總和)：正常值為60-80%。意義：①