西北農(nóng)林科技大學(xué)夏效東修改課件

匯報人：夏效東西北農(nóng)林科技大學(xué)教授

尿石素A對ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞功能紊亂的影響及機制3214目錄Contents研究內(nèi)容研究背景研究結(jié)論研究結(jié)果12435癱瘓中風死亡據(jù)統(tǒng)計：我國每5個成人中有1人患有心血管疾病動脈粥樣硬化是誘發(fā)心血管疾病的主要病理根底1.1動脈粥樣硬化發(fā)病率高一、研究背景1動脈粥樣硬化研究概況巨噬-泡沫細胞形成-關(guān)鍵環(huán)節(jié)在胞內(nèi)膽固醇合成過多或者攝入過多的情況下，促進巨噬細胞膽固醇外流對抑制泡沫細胞形成和防治動脈粥樣硬化起到關(guān)鍵作用。內(nèi)皮細胞功能紊亂—啟動環(huán)節(jié)動脈硬化開展的重要表征。表達出促炎、促血小板聚集、促血管收縮、促凝等機能轉(zhuǎn)變。microRNA—新型藥物靶點進行轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控。參與動脈粥樣硬化進程的種類繁多，主要調(diào)節(jié)炎癥反響、脂質(zhì)代謝、細胞增殖等。1.2動脈粥樣硬化分子機制1動脈粥樣硬化研究概況一、研究背景尿石素A(UrolithinA,Uro-A)是石榴、草莓、花生等富含鞣花單寧的食物經(jīng)腸道微生物代謝生成的。尿石素A在血漿中的濃度可達14~25μM。圖1-2.尿石素在腸道中的代謝過程2.1尿石素的形成2尿石素A研究概況一、研究背景抗癌活性抗氧化活性抗炎活性抗瘧疾活性抗菌活性2.2尿石素生物活性一、研究背景2尿石素A研究概況在人動脈內(nèi)皮細胞、THP-1源性巨噬細胞、LPS誘導(dǎo)的RAW264.7中，尿石素A可以顯著抑制促炎因子表達上調(diào)，表現(xiàn)出強于其他種類尿石素的抗炎作用(Gimenez-Bastidaetal.2021，Piwowarskietal.2021)。尿石素A能夠顯著減弱人肝細胞和脂肪細胞中甘油三酯的累積并有效抑制THP-1/巨噬細胞中膽固醇的募集(MeleLetal.2021,KangIetal.2021)。因此推測尿石素A在小鼠RAW264.7巨噬細胞中具有潛在的抑制膽固醇攝入和合成的作用。2.3尿石素A研究進展一、研究背景2尿石素A研究概況第二局部研究內(nèi)容人動脈內(nèi)皮細胞尿石素A細胞活性NO釋放單核-內(nèi)皮黏附和黏附因子表達分析炎癥因子表達分析炎癥信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑分析細胞結(jié)構(gòu)〔LDH〕相關(guān)基因表達分析從細胞水平說明尿石素A防治動脈粥樣硬化的機制二、研究內(nèi)容二、研究內(nèi)容內(nèi)皮細胞炎癥反響單核-內(nèi)皮細胞粘附尿石素A對動脈內(nèi)皮細胞功能的影響MTT毒性乳酸脫氫酶含量及一氧化氮含量及表達分析單核-內(nèi)皮黏附和黏附因子表達分析炎癥因子表達分析炎癥信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑分析分子機制尿石素A抗動脈粥樣硬化形成的作用機制第三局部研究結(jié)果圖1-1.Uro-A對HAEC細胞存活率的影響內(nèi)皮細胞存活率工作濃度：0.52.55μΜ孵育時間：24h1.1低濃度尿石素A促進內(nèi)皮細胞存活率1尿石素A對氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細胞粘附的影響三、研究結(jié)果1尿石素A對氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細胞粘附的影響三、研究結(jié)果1.3尿石素A提高一氧化氮〔NO〕含量圖1-3.Uro-A對NO含量的影響一氧化氮含量1.2尿石素A抑制乳酸脫氫酶〔LDH〕漏出率圖1-2.Uro-A對LDH漏出率的影響乳酸脫氫酶漏出率細胞完整性氧化應(yīng)激信號分子1尿石素A對氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細胞粘附的影響三、研究結(jié)果圖1-4.Uro-A對eNOS和ET-1基因表達量的影響NO血管舒張ET-1血管收縮基因相對表達1.4尿石素A對內(nèi)皮一氧化氮合成酶〔eNOS〕和內(nèi)皮素1〔ET-1〕表達量的影響1.5尿石素A減少單核-內(nèi)皮粘附細胞總數(shù)圖1-5,6孟加拉紅染色法檢測Uro-A對單核-內(nèi)皮粘附細胞總數(shù)的影響。(A)對照組；(B)ox-LDL組；(C)ox-LDL+0.5μMUro-A組；(D)ox-LDL+2.5μMUro-A組；(E)ox-LDL+5μMUro-A組細胞總數(shù)比值1尿石素A對氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細胞粘附的影響三、研究結(jié)果1.6尿石素A對單核細胞粘附內(nèi)皮細胞的影響圖1-7.pH熒光探針法檢測Uro-A對單核細胞粘附內(nèi)皮細胞的影響。(A)對照組；(B)ox-LDL組；(C)ox-LDL+0.5μMUro-A組；(D)ox-LDL+2.5μMUro-A組；(E)ox-LDL+5μMUro-A組圖1-8.定量分析Uro-A對單核細胞粘附內(nèi)皮細胞的影響熒光強度1尿石素A對氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細胞粘附的影響三、研究結(jié)果圖1-9.Uro-A對粘附因子表達量的影響1.7尿石素A抑制粘附因子表達基因相對表達1尿石素A對氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細胞粘附的影響三、研究結(jié)果尿石素A可降低由氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的黏附因子的表達下調(diào)細胞間粘附因子ICAM-1和單核細胞趨化蛋白MCP-1的基因表達對單核-內(nèi)皮細胞粘附進行調(diào)控。維持內(nèi)皮細胞完整性和一氧化氮/內(nèi)皮素含量平衡，從而改善內(nèi)皮細胞功能紊亂的作用。1.8小結(jié)人動脈內(nèi)皮細胞尿石素A1尿石素A對氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的單核-內(nèi)皮細胞粘附的影響三、研究結(jié)果2.1尿石素A降低ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞炎癥因子含量圖2-1.Uro-A對IL-6濃度的影響圖2-2.Uro-A對TNF-α濃度的影響圖2-3.Uro-A對IFN-γ濃度的影響白介素6含量干擾素γ含量腫瘤壞死因子α含量2尿石素A通過調(diào)控MAPK信號通路對ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞炎癥反響的影響三、研究結(jié)果ox-LDL可誘導(dǎo)IL-6、TNF-α產(chǎn)生誘導(dǎo)炎癥反響，Uro-A可有效改善這種作用；ox-LDL不能直接通過IFN-γ對HEAC造成炎癥反響，且Uro-A不是通過響IFN-γ相關(guān)基因或蛋白的表達對炎癥反響進行調(diào)控。圖2-4.Uro-A對PPAR-γ基因表達的影響PPAR-γ基因相對表達2.2尿石素A通過調(diào)控miRNA-27促進過氧化物酶體增殖物激活受體γ〔PPAR-γ〕基因表達2尿石素A通過調(diào)控MAPK信號通路對ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞炎癥反響的影響三、研究結(jié)果Uro-A改善經(jīng)氧化低密度脂蛋白對PPAR-γ基因表達的抑制作用圖2-5.Uro-A對miRNA-27基因表達的影響抑制表達miR-27基因相對表達圖2-6.miR-27過表達和抑制表達的情況下2.5μMUro-A對PPAR-γ基因表達的影響PPAR-γ基因相對表達尿石素A通過抑制miR-27表達提高PPAR-γ轉(zhuǎn)錄水平2.2尿石素A通過調(diào)控miRNA-27促進過氧化物酶體增殖物激活受體γ〔PPAR-γ〕基因表達2尿石素A通過調(diào)控MAPK信號通路對ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞炎癥反響的影響三、研究結(jié)果Thanks2.2尿石素A抑制ERK1/2、SAPK/JNK和p38信號通路關(guān)鍵蛋白的表達2尿石素A通過調(diào)控MAPK信號通路對ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞炎癥反響的影響三、研究結(jié)果圖2-7.U0126和Uro-A對ERK1/2、P-ERK1/2蛋白表達的影響圖2-8.SP600126和Uro-A對SAPK/JNK、P-SAPK/JNK蛋白表達的影響Thanks圖2-9.Uro-A對p38和p-p38蛋白表達的影響2.2尿石素A抑制ERK1/2、SAPK/JNK和p38信號通路關(guān)鍵蛋白的表達2尿石素A通過調(diào)控MAPK信號通路對ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞炎癥反響的影響三、研究結(jié)果Uro-A能夠明顯抑制50μg/mLox-LDL激活的ERK1/2、SAPK/JNK和p38磷酸化，并且和通路抑制劑U0126及SP600125具有一定的協(xié)同作用。2.3尿石素A通過調(diào)控ERK/PPAR-γ信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑抑制ICAM-1表達圖2-10.U0126和2.5μMUro-A對PPAR-γ蛋白表達的影響圖2-11.PPAR-γsiRNA和2.5μMUro-A對ICAM-1mRNA表達的影響尿石素A調(diào)控ERK/PPAR/ICAM-1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑2尿石素A通過調(diào)控MAPK信號通路對ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞炎癥反響的影響三、研究結(jié)果降低炎癥因子含量通過miR-27途徑調(diào)控PPAR-γ抑制ox-LDL誘導(dǎo)的MAPK通路激活通過ERK/PPARγ途徑調(diào)控ICAM-1表達2.4小結(jié)2尿石素A通過調(diào)控MAPK信號通路對ox-