腎纖復(fù)元膠囊對(duì)慢性腎衰竭大鼠的治療作用

腎纖復(fù)元膠囊對(duì)慢性腎衰竭大鼠的治療作用

腎衰竭是由各種原因引起的腎衰竭的共同途徑和主要病理基礎(chǔ)。腎纖維化包括腎小管間質(zhì)纖維化和腎小球硬化。大量研究表明腎小管間質(zhì)纖維化較腎小球病變?cè)谀I臟疾病進(jìn)展中的意義更加重要。但無(wú)論腎間質(zhì),還是腎小管、腎小球,它們?cè)诶w維化過(guò)程中都涉及細(xì)胞因子誘導(dǎo)間質(zhì)成纖維細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞或腎小球系膜細(xì)胞等轉(zhuǎn)分化為α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)陽(yáng)性的肌成纖維細(xì)胞。肌成纖維細(xì)胞具有很強(qiáng)的增殖能力,可合成Ⅰ型膠原,分泌大量細(xì)胞外基質(zhì)(ECM),并抑制ECM降解,在腎纖維化的發(fā)展中有重要的作用。本研究擬通過(guò)對(duì)慢性腎衰竭大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性治療,觀察“腎纖復(fù)元膠囊”抗腎纖維化延緩慢性腎衰竭進(jìn)展的治療效果,從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度闡明其作用機(jī)制。材料和方法1動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心雄性Wistar大鼠100只,體重(140±20)g,購(gòu)自四川大學(xué)華西動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。隨機(jī)分為假手術(shù)組20只,腎衰組40只,治療組40只。2小鼠igg2a-過(guò)氧化物酶抑制劑Beckman全自動(dòng)生化儀,微量離心機(jī),美國(guó)Spot圖像分析儀?？剐∈驣gG2a-過(guò)氧化物酶;抗α-SMA單抗,由德國(guó)Dako公司生產(chǎn);兔抗鼠Ⅰ型膠原抗體、馬抗兔IgA抗體,均由北京中山生物技術(shù)公司生產(chǎn);1∶50ABC試劑(卵白素過(guò)氧化物酶復(fù)合物)等。3模型方法參照文獻(xiàn)。以兩步法對(duì)腎衰組與治療組大鼠在1周內(nèi)施2次手術(shù),共切除全部腎臟的5/6。4“腎纖復(fù)元膠囊”組“腎纖復(fù)元膠囊”根據(jù)我院康復(fù)科何成奇教授驗(yàn)方制成,其成分為:三七、大黃、丹參、昆布、黃芪、雞內(nèi)金等,共為粉末裝膠囊。以“腎纖復(fù)元膠囊”制成湯劑,于第2次手術(shù)后次日灌胃予治療組大鼠(“腎纖復(fù)元膠囊”300mg·kg-1·d-1)。假手術(shù)組與腎衰組灌胃等量生理鹽水。5腎組織病理學(xué)檢測(cè)觀察并記錄各組大鼠一般情況(體重、毛色、進(jìn)食、尿量),分別于第4周、8周、12周以代謝籠采集24h尿樣測(cè)尿蛋白定量、清潔處死部分大鼠,采集腹主動(dòng)脈血進(jìn)行腎功能檢測(cè),并行病理切片對(duì)腎組織進(jìn)行HE染色、α-SMA、Ⅰ型膠原免疫組化染色檢測(cè)。3組均在8周、12周選α-SMA、Ⅰ型膠原染色各5張切片,每張切片隨機(jī)選取200倍視野5處。每個(gè)視野經(jīng)Spot軟件標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)化后,取其平均積分光密度值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。6統(tǒng)計(jì)方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用MicrosoftExcel軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以(xˉ±s)(xˉ±s)表示,進(jìn)行t檢驗(yàn)。結(jié)果1大鼠尿總情況變化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物外觀表現(xiàn)及死亡率(實(shí)驗(yàn)分組中非正常處死的死亡鼠只數(shù)/該組總只數(shù)):假手術(shù)組:外觀、活動(dòng)正常,體重逐漸增大,到實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)達(dá)(240±24)g,動(dòng)物無(wú)死亡。腎衰組:與正常組比較,該組鼠從第2周開始出現(xiàn)明顯多尿、食量減少、毛色發(fā)黃、弓背;第3周,上述表現(xiàn)加重,并出現(xiàn)明顯消瘦、眼珠紅色變淡;第4周,毛色萎黃、消瘦、眼珠變淡等進(jìn)一步加重,食量仍少,被抓時(shí)反射性排尿量漸減少;第5周,前述變化進(jìn)一步加重,動(dòng)物少尿,開始有大鼠死亡,死亡鼠極消瘦,所剩鼠體重(109±14)g,死亡率15%。治療組:第1～3周,變化與腎衰對(duì)照組相同;第4周大多數(shù)鼠毛皮光柔度、眼珠紅色度、食量等比腎衰組明顯改善,反射性排尿不減少反增多;少數(shù)幾只與腎衰對(duì)照組相似;第5周,個(gè)別鼠死亡,大多數(shù)鼠癥狀已出現(xiàn)好轉(zhuǎn),實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)體重(203±22)g,死亡率12.5%。224h尿蛋白試驗(yàn)和腎臟功能見(jiàn)表1。3結(jié)構(gòu)不清,間質(zhì)纖維化(1)假手術(shù)組:腎小球、腎小管、血管及間質(zhì)結(jié)構(gòu)清晰,未見(jiàn)明顯病變。(2)腎衰組:部分腎小球萎縮消失,殘余腎小球偶有代償性肥大,多數(shù)結(jié)構(gòu)不清,主要表現(xiàn)球囊變小;毛細(xì)血管透明變性,有的僅見(jiàn)內(nèi)皮細(xì)胞核;大量單核/巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn);間質(zhì)纖維化,8周即有明顯的α-SMA及Ⅰ型膠原的表達(dá),并且隨時(shí)間延長(zhǎng)而明顯加重。(3)治療組:腎小球大部分存在,結(jié)構(gòu)欠清;腎小管上皮濁腫,有的嗜酸性變,胞核固縮,有的細(xì)胞脫落,在管腔內(nèi)形成細(xì)胞團(tuán);間質(zhì)纖維組織輕度增生,少量炎細(xì)胞浸潤(rùn);α-SMA及Ⅰ型膠原染色較腎衰組為輕。見(jiàn)圖1～圖5,表2。腎纖復(fù)元膠囊治療crf大鼠慢性腎衰竭的作用機(jī)制慢性腎衰竭是多種慢性腎臟疾病進(jìn)展到晚期的嚴(yán)重綜合癥候群,是導(dǎo)致腎臟病患者死亡的主要原因,也為社會(huì)帶來(lái)了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。腎纖維化則是各種原因腎臟疾病進(jìn)展到慢性腎衰竭終末期的共同途徑。近年來(lái)大量研究證實(shí),慢性腎臟疾病中,腎小管間質(zhì)纖維化程度更能體現(xiàn)腎臟疾病的嚴(yán)重性并與預(yù)后相關(guān),在腎臟疾病的轉(zhuǎn)歸中起主導(dǎo)作用。因此,對(duì)抗腎纖維化,特別是腎小管間質(zhì)纖維化是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)之一?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)慢性腎衰竭的治療主要是治療基礎(chǔ)疾病、飲食治療、控制血壓和維持水、電解質(zhì)、酸堿平衡等。一旦慢性腎衰竭進(jìn)展到終末期,除透析和腎移植外并無(wú)其他有效的治療方式。因此,開發(fā)保護(hù)殘余腎功能,延緩慢性腎衰竭進(jìn)展的藥物具有重要的社會(huì)意義。中醫(yī)將慢性腎衰竭歸于“水腫”、“關(guān)格”、“癃閉”、“腎勞”、“腎風(fēng)”、“溺毒”等范疇,認(rèn)為本病大多屬于本虛標(biāo)實(shí)之證,正虛為本,邪實(shí)為標(biāo)。正虛方面多認(rèn)為屬于脾腎陽(yáng)虛、氣陰兩虛、肝腎陰虛;邪實(shí)方面則多集中在濕濁、瘀血、水氣的認(rèn)識(shí)。虛、濁、瘀、毒四大因素互為因果,形成惡性循環(huán)?！澳I纖復(fù)元膠囊”是將大黃、黃芪、昆布等一些具有腎保護(hù)作用的中藥按一定配方精心研制的復(fù)方制劑。方中大黃瀉下行瘀,化痰濕,推陳致新,解毒排濁,是為君藥;黃芪味甘,性溫,歸肺、脾經(jīng),功能益氣升陽(yáng)、固表止汗、利水消腫,主治一切氣血虧虛之證,為臣藥;昆布具較強(qiáng)利水滲濕、通利小便之功,為使藥。方中補(bǔ)氣藥與瀉下藥同用,補(bǔ)氣可升清,瀉下可降濁,攻補(bǔ)兼施,有利于氣機(jī)調(diào)節(jié),從根本上消除痰瘀互結(jié),配以昆布利水滲濕、通利小便,使瘀祛新生、脾腎陽(yáng)氣得復(fù)、水濕腫滿得消。本研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)“腎纖復(fù)元膠囊”治療的CRF大鼠(即治療組)一般情況如進(jìn)食、毛色及反應(yīng)、腎功能生化、24h尿蛋白定量等指標(biāo)明顯優(yōu)于腎衰組,證實(shí)“腎纖復(fù)元膠囊”可延緩CRF大鼠慢性腎衰竭進(jìn)展?！澳I纖復(fù)元膠囊”保護(hù)腎功能的作用機(jī)制可能是:(1)抑制炎癥反應(yīng)。光鏡下各組腎組織病理切片顯示治療組單核巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)目較腎衰組明顯減少,炎癥程度較輕,腎小球硬化及腎小管損傷亦相對(duì)較輕,但由于條件所限,未能測(cè)量化性指標(biāo)。(2)抑制肌成纖維細(xì)胞活化和轉(zhuǎn)分化。應(yīng)用Spot圖像分析系統(tǒng)可見(jiàn)治療組腎小管間質(zhì)表達(dá)α-SMA染色陽(yáng)性的肌成纖維細(xì)胞較腎衰組少。而肌成纖維細(xì)胞在腎纖維化的發(fā)展中有重要的作用。這種細(xì)胞增殖能力強(qiáng),在慢性腎臟疾病中逐漸成為腎間質(zhì)的主要細(xì)胞,同時(shí)產(chǎn)生大量的ECM,是ECM積聚的主要來(lái)源。抑制肌成纖維細(xì)胞的活化可起到抑制腎纖維化,延緩慢性腎衰竭進(jìn)展的作用。