針刺對crh、ach及cor分泌的調控與垂體及脊髓關系的研究

針刺對crh、ach及cor分泌的調控與垂體及脊髓關系的研究

許多研究機構證實了打開下肢-腎上腺皮質（hpa）軸的活動的影響。損害大鼠PVN引起垂體門脈血流中的CRH水平明顯降低,也引起血液循環(huán)中的促腎上腺皮質激素(ACTH)和糖皮質激素(GH)水平明顯降低。ACTH是維持腎上腺正常形態(tài)和功能的重要激素,它的合成和分泌是垂體前葉在下丘腦促腎上腺皮質激素釋放激素(CRH)的作用下,在腺垂體嗜堿細胞內進行的。近年來,針刺調節(jié)HPA軸功能的研究較多[2~4],而關于針刺調節(jié)HPA軸功能作用途徑的研究少有報道。陳業(yè)晞等研究觀察到,電針刺激合谷穴和曲池穴通過脊髓磁共振功能成像技術可觀測到脊髓的功能激活區(qū),且激活分布具有一定的特征性,說明脊髓參與針刺信號的傳遞。本項研究擬探討垂體、脊髓在電針刺調節(jié)下丘腦-垂體-腎上腺皮質軸功能的作用,揭示針刺對CRH、ACTH及CORT分泌的調控與垂體、脊髓的關系。1材料和方法1.1實驗動物及設備雄性成年Sprague-Dawley大鼠48只,240~280g,由中國科學院遺傳與發(fā)育生物學研究所提供(SCSK-2002-0016),為普通級動物。標準嚙齒類動物飼料分籠喂養(yǎng),室溫20±2℃,光照12h。實驗過程中對動物的各種處置符合2006年國家科技部發(fā)布的以及本所三級實驗室關于善待實驗動物的倫理學規(guī)定。48只動物隨機分為正常組(C)、正常針刺組(CE)、脊髓損傷組(S)、脊髓損傷針刺組(SE)、垂體摘除組(H)、垂體摘除針刺組(HE)6組,每組8只。1.2促腎上腺素激素VarioskanFlash多功能酶標儀(美國Thermo公司),促腎上腺皮質激素釋放激素(CRH)、促腎上腺皮質激素(ACTH)、皮質醇(Cortisol)、酶聯免疫分析試劑盒(武漢華美產品)。1.3椎內脊分離的方法16只SD大鼠分別用10%的烏拉坦經腹腔麻醉(1.1ml/100g),大鼠俯臥位,固定于拱形手術臺上,背部剪毛、碘伏消毒,以T5為中心,沿背部正中切開,切口長約2.5cm,剝開筋膜、脂肪,緊貼棘突骨面分離椎旁肌(棘肌、背半棘肌和多裂肌)以顯露T4-T6的棘突和椎板,過程中用棉球按壓止血。咬骨鉗咬除T4-T6棘突,在手術顯微鏡下用高速牙科電鉆磨開兩側椎板,小心不要碰到里面的脊髓,用顯微鑷移出椎板,顯微剪剪開硬脊膜和蛛網膜,暴露脊髓,切口以外的軟膜保持完整,脊髓背靜脈血管用電凝止血,然后用顯微剪橫斷脊髓,取出約1~2mm節(jié)段的脊髓組織,脊髓內縮形成一個洞,洞內用無菌明膠海綿填充以確保神經完全分離。在用無菌棉球按壓完全止血后依次縫合肌肉、筋膜和皮膚,皮膚縫合處用酒精擦拭消毒。1.4體積切除儀的使用16只SD大鼠分別用10%的烏拉坦經腹腔麻醉(1.1ml/100g),大鼠固定于立體定向垂體切除儀(Stoelting),門齒鉤刻度預設為+3.9(門齒平面低于耳間線1mm),參考Stoelting公司hoffman-reiter垂體切除儀的體質量-深度和體質量-角度相關曲線選擇進針深度和角度,調整兩側側耳桿角度為19°,取8號注射器針頭(10mL注射器標配,直徑0.8mm)經右側中空耳桿完全插入,此時進針深度約39.8mm,進針時針尖斜面指向尾側,進針完全后旋轉180°使針尖斜面指向嘴側,此后接20mL注射器緩慢抽吸,遇阻力過大可適當旋轉以調整針尖斜面方向直至灰白色垂體組織吸出,有時手術過程中可能有少量出血,應以紗布過濾并大致分辨吸出的垂體分葉結構是否完整。4h后施以針刺治療。正常組模型在麻醉4h后分別施以針刺治療,取穴及方法同上。2結果2.1crh、acth及cort水平c及ce組cort、crh及cort水平的比較實驗對正常組大鼠進行了針刺腎俞、期門后CRH、ACTH及CORT水平的檢測,結果觀察到,CRH、ACTH及CORT水平C及CE組分別為6.79±0.18/7.94±0.19ng/ml、1.16±0.07/0.96±0.06Pg/ml及2.22±0.34/3.39±0.32ng/ml(圖1)。2.2crh、acth及cort水平s及se組的se分析實驗對脊髓損傷大鼠進行了針刺腎俞、期門后CRH、ACTH及CORT水平的檢測。結果觀察到,CRH、ACTH及CORT水平S及SE組分別為7.55±0.20/6.38±0.28ng/ml、1.20±0.11/0.89±0.09Pg/ml及2.00±0.18/3.01±0.21ng/ml(如圖2)。2.3針刺前后cort、生長和acth水平比較實驗對垂體摘除大鼠進行了針刺腎俞、期門后CRH、ACTH及CORT水平的檢測。結果觀察到,CRH、ACTH及CORT水平H及HE組分別為6.13±0.25/5.13±0.17ng/ml、0.61±0.05/0.54±0.02Pg/ml及2.25±0.23/1.40±0.11ng/ml(如圖3)。綜合以上結果,針刺后脊髓損傷組CORT水平上調(P<0.05)、垂體摘除組下調(P<0.05);ACTH水平在垂體摘除組與正常組比較明顯降低(P<0.05),脊髓損傷組與正常組比較差異無統計學意義,針刺后變化不明顯;CRH水平脊髓損傷組、垂體摘除組與正常組比較有上調和下調的趨勢,但差異均無統計學意義,針刺后均下調,與非針刺對照組比較差異有統計學意義(P<0.05)。3討論3.1電針刺激對正常大鼠crh、cort水平的影響大量的研究表明,持續(xù)應激能夠嚴重影響人類的身心健康,誘發(fā)和加重疾病,其機制主要與HPA軸的活動亢進有關[10~12]。本項研究觀察到,電針刺激腎俞、期門能上調正常大鼠CRH、CORT水平。對正常模型而言,電針刺激即是一種應激刺激。作為神經、內分泌調控部位的下丘腦是對應激信號和針剌信號發(fā)生反應的重要部位。這種刺激能促進下丘腦室旁核神經元興奮性增強,使CRH水平增高,而伴隨著CRH水平的增高,通過HPA軸的調節(jié)上調CORT水平,出現一種HPA軸活動亢進的狀態(tài)。但ACTH變化不明顯,或許是ACTH自身短反饋作用抑制了ACTH的分泌。3.2電針刺激對髓內研究的調節(jié)本項研究觀察了下丘腦室旁核分泌的CRH對ACTH及CORT調節(jié)作用中脊髓的作用及電針刺激的影響。結果觀察到,脊髓損傷后,CRH水平與正常組比較有上調的趨勢(P>0.05),而ACTH、CORT水平與正常組比較變化不明顯,說明在機體應激反應的過程中,下丘腦是第一反應中樞;電針刺激后與非電刺激組比較CRH水平顯著下調,ACTH水平有下調趨勢。而有趣的是,CORT水平顯著上調,說明電針刺激對CORT的調節(jié)既有中樞效應,亦有外周調節(jié)效應。本項研究中脊髓損傷后,針刺對下丘腦、腎上腺皮質分泌的激素仍具有調節(jié)作用,只是對下丘腦分泌CRH的調節(jié)途徑及腎上腺皮質分泌CORT的調節(jié)途徑有所不同。當第5胸椎脊髓損傷后,針刺腎俞及期門的脊髓反射弧正常,可促進CORT的分泌增加,而中樞信息的傳遞受阻,故CRH下調不能影響CORT的改變。汪克明等研究脊髓通路與足三里效應關系時同樣觀察到,針刺足三里的脊髓反射弧可增強胃平滑肌電活動,而針刺足三里的良性調節(jié)作用在腦干高位中樞調控下,可通過延髓基本中樞、迷走神經背核和孤束核調節(jié)胃平滑肌電活動。郝春光等研究電針刺激足三里和懸鐘、伏兔和三陰交對T11脊髓橫斷大鼠后肢運動功能定位影響,結果觀察到,外周電針治療能促進脊髓損傷大鼠后肢運動功能的部分恢復。楊金偉等研究發(fā)現,電針刺可促進BDNF在損傷部位所支配的肌肉-靶組織中的表達。這些研究表明,針刺可以通過脊髓反射調節(jié)臟腑功能。3.3體外電針刺激本項研究觀察了下丘腦室旁核分泌的CRH對ACTH及CORT調節(jié)作用中垂體作用及電針刺激的影響。結果觀察到,垂體摘除大鼠ACTH水平與正常組比較明顯下調(P<0.05),說明本研究建立的實驗模型是可靠的。當垂體摘除后,ACTH主要來自于下丘腦的分泌與合成,故表達水平相對較低。電針刺激后CRH、CORT水平均較非電針刺激組明顯降低(P<0.05),而ACTH水平變化不明顯。呂琳觀察到壯醫(yī)藥線點灸對去垂體脾虛大鼠的下丘腦、胃、血清胃泌素仍具有調整作用。朱笛霓等研究觀察到在垂體摘除的條件下,電針仍顯示部分參與下丘腦對腦干5HT能神經核團的下行調控過程。本項研究也觀察到,在正常針刺組及脊髓損傷針刺組,ACTH均無明顯變化,在垂體摘除的條件下電針刺激仍然參與了