彌漫性腦損傷大鼠腦組織谷氨酸及環(huán)核甘酸代謝改變的實驗研究

彌漫性腦損傷大鼠腦組織谷氨酸及環(huán)核甘酸代謝改變的實驗研究

0腦延遲腦損傷第二腦損傷（bsi）的概念由剪刀首次提出。在對現(xiàn)有腦損傷的基礎上，如合并低血壓和高血壓等二次損傷因素對腦組織的第二次損傷可加重腦損傷。根據(jù)以往的研究，合并sdi的大腦暴露信息，隨著txa的合并，核電站腦損傷（dbi）的水平增加，局部腦血流量降低，核電站腦損傷加劇。另一方面，明了開始機制。同時，dbi和sdi的結合使興奮氨基酸谷氨酸（glu）和通過谷氨酸受體激活的環(huán)氨酸的變化和意義尚不清楚。這是本研究的重點。1材料和方法1.1股動脈插管聯(lián)合膜過濾法正常成齡雄性SD大鼠66只,體質量(250±25)g,隨機分為正常對照、DBI及SBI組,后兩組又按時間不同分為10min,1,6,24和72h組,每組6只.腦損傷模型制作:新鮮配制10g·L-1戊巴比妥鈉(30mg·kg-1)ip麻醉大鼠,氣管插管,小動物呼吸機輔助呼吸,右側股動脈插管監(jiān)測血壓、輸液、用藥,血壓維持在5.33～6.67kPa,肛管內插入體溫計探頭,通過反饋式電子溫度測定儀監(jiān)測體溫,并維持(37.5±0.5)℃.立體定向頭架固定大鼠頭部,正中切開頭頂皮膚,在冠狀縫與人字縫之間,用高分子聚酯于頂骨上固定一圓形金屬小片(直徑10mm,厚度2.5mm).將大鼠移至一已知彈性系數(shù)的軟質厚海綿上,900g鐵質圓棒借一相應口徑的有機玻璃管導向,由1m高處自由垂直墜落于金屬小片上,致傷頭部,造成DBI.二次腦損傷組在DBI穩(wěn)定15min后,經股動脈插管放血3～4mL造成低血壓,同時雙側頸總動脈結扎,維持30min,然后將所放血液回輸并維持血壓在正常水平.1.2方法1.2.1勻漿器中勻漿各實驗組大鼠到預定時間斷頭處死,迅速取腦組織100mg,加入盛有預冷的50g·L-1三氯醋酸3mL的勻漿器中,冰浴中勻漿;勻漿液2000g,4℃離心10min,取上清-20℃保存.待全部試樣收集完畢,在121MB型氨基酸分析儀上進行氨基酸定量分析.1.2.2腦酶原激活劑pa法檢測腦強化酸-乙醇溶液中內鏡萃取-溫度3g.5.2.4和10.5.4.7.4.7.4.7.4.7.4.5%乙醇-5.4.5.4和10.7.4.7.4.4.4.4.4.4.4.5.4.4.4.5.4.5%.4.5%.4.5%.4.5%.4.7.7.7.7.4.7.4.7.4.7.4.7.4.5.4.5.4.7.4.7.4.7.4.7.4.7.7.4.7.4.7.4.7.4和7.4.7.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4.4各組大鼠到預定時間后,活殺取腦,NS沖洗,濾紙吸干,稱取腦組織約50mg,放于2mL預冷的50mmol·L-1醋酸緩沖液(pH4.75)中,冰浴中制成勻漿,轉移至10mL離心管內,用2mL無水乙醇洗勻漿器后將乙醇合并倒入離心管內,混勻靜置5min,3500r·min-1低溫離心15min,取上清放于小瓶內,再以750mL·L-1乙醇1mL洗勻漿器2次,用該2mL750mL·L-1乙醇洗離心后沉淀混勻,3500r·min-1低溫離心15min,上清60℃干燥.放免測定前以50mmol·L-1醋酸緩沖液1mL溶解,測定腦組織cAMP,cGMP含量,放免測定試劑盒由上海中醫(yī)藥學院提供,具體操作按試劑盒說明書進行.統(tǒng)計學處理:各組實驗數(shù)據(jù)用“均數(shù)±標準差(xˉ±s)(xˉ±s)”表示,在微機上應用SPSS統(tǒng)計軟件進行方差分析和配對t檢驗.2結果2.1下降后至2032h間DBI后10min明顯增加(P<0.01),隨后下降,6h逐漸下降并于24～72h間達最低點,在72h持續(xù)低水平并出現(xiàn)回升趨勢;SBI后變化幅值加大并且下降延遲(Tab1).2.2內鏡實際cop的測量,cmp、chmp比的變化,cmp比的下降DBI后24hcAMP有下降(P<0.05),cGMP則升高(P<0.01),cAMP/cGMP比值下降(P<0.05);SBI后變化幅度明顯增加(Tab1).3glu及其抑制劑腦創(chuàng)傷后除機械因素對腦組織的直接損傷外,繼發(fā)性神經生化改變是加重腦細胞損害的因素之一.其中腦細胞外液興奮性氨基酸濃度升高引起腦組織興奮毒性,以及由于腦組織微循環(huán)障礙而造成的代謝應是其中重要方面,二者是相互聯(lián)系、相互影響,共同參與腦損傷后的病理生理過程.一方面,興奮性氨基酸在通過其受體引起神經細胞的過度興奮而使神經細胞受到興奮性損害的同時,也導致神經細胞代謝的改變.其中Glu是哺乳動物中樞神經系統(tǒng)含量最高,作用最廣的氨基酸,它主要通過神經細胞膜上GluR而起作用.腦組織中的GluR有兩大類,即離子型Glu受體(iGluR)和代謝型Glu受體(mGluR).iGluR屬于配體門控的陽離子通道,與配體結合后可引起神經細胞膜對Na+,K+和Ca2+通透性的改變,進而引起細胞內Na+-水潴留、膜電位和膜興奮性改變,Ca2+作為細胞內廣泛的第二信使,又參與細胞內代謝及多種生理病理過程的激活和調節(jié);mGluR是神經細胞膜上與G蛋白偶聯(lián)的七次跨膜蛋白受體,與配體結合后可通過G蛋白介導的細胞內信號轉導機制導致細胞內第二信使、磷酸化酶活性改變及調節(jié)細胞內代謝和生理病理過程.另一方面,腦組織微循環(huán)障礙而造成的代謝應急所造成的能量耗竭、Na+,K+-ATPase活性的降低,神經細胞內Na+內流可以導致Glu釋放,從而加重腦細胞興奮毒性損傷.我們發(fā)現(xiàn)無論DBI或DBI合并SBI,傷后10minGlu明顯增加(P<0.01).原因:①突觸小泡內Glu水平高于細胞外液1000倍,損傷引起細胞膜和突觸膜破裂,Glu大量釋放;②正常血漿內Glu含量明顯高于腦組織,腦損傷后血腦屏障破壞,血漿內Glu進入腦組織;③神經元與膠質細胞存在對Glu的主動轉運和攝取,并且是其滅活的主要機制,外傷時腦組織pH下降、能量代謝障礙、Glu轉運或攝取能力下降.隨后逐漸下降并于24～72h間達最低點,在72h持續(xù)低水平并出現(xiàn)回升趨勢,可能是由于腦細胞內持續(xù)的能量損耗,使Glu合成相關酶活性受抑制,Glu滅活酶代償性活性增強所致;另外,腦損傷后組織合成代謝的加強,對作為蛋白質合成原料的Glu的消耗,以及腦損傷后腦組織含