動物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體課件高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修32

第二章細(xì)胞工程第2節(jié)動物細(xì)胞融合技術(shù)和單克隆抗體（第二課時）植物細(xì)胞融合植物組織培養(yǎng)運(yùn)用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)，可以跨越不同植物之間的生殖隔離的屏障，培育出新的作物類型。那么，有沒有技術(shù)能讓不同種動物的體細(xì)胞進(jìn)行雜交，培育出集不同細(xì)胞的優(yōu)勢于一身的動物細(xì)胞呢？知識回顧：植物體細(xì)胞雜交的過程閱讀教材，完成下列問題：1.動物細(xì)胞融合的概念2.動物細(xì)胞融合的原理3.誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法4.動物細(xì)胞融合的意義一、動物細(xì)胞融合技術(shù)1.概念：使兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的技術(shù)。融合后形成的雜交細(xì)胞具有原來兩個或多個細(xì)胞的遺傳信息。2.原理：細(xì)胞膜具有一定的流動性。3.誘導(dǎo)融合的常用方法：PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導(dǎo)法。4.意義：突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。6.應(yīng)用：（1）細(xì)胞融合技術(shù)已經(jīng)成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和培育生物新品種等的重要手段。（2）利用動物細(xì)胞融合技術(shù)發(fā)展起來的雜交瘤技術(shù)，為制造單克隆抗體開辟了新途徑。5.融合的實(shí)質(zhì)：細(xì)胞核的融合。滅活的病毒誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的原理？2023/12/7

19世紀(jì)30年代，科學(xué)家曾在患肺結(jié)核、天花和麻疹等疾病的病人的病理組織中觀察到多核細(xì)胞。如何解釋這一現(xiàn)象？

病人體內(nèi)的病毒等誘導(dǎo)多個體細(xì)胞融合形成了多核細(xì)胞。植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合前的處理方法誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合成功的標(biāo)志主要用途意義細(xì)胞膜具有一定的流動性、植物細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜具有一定的流動性用果膠酶和纖維素酶去除細(xì)胞壁用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散成單個細(xì)胞電融合法、離心法；PEG融合法、高Ca2+-高pH融合法PEG融合法、電融合法、滅活病毒誘導(dǎo)法再生出細(xì)胞壁細(xì)胞核的融合獲得完整的雜種植株主要用于制造單克隆抗體打破生殖隔離，實(shí)現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種，培育植物新品種突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較二、單克隆抗體及其應(yīng)用1.傳統(tǒng)抗體制備方法及缺陷（1）制備方法：向動物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原，使動物產(chǎn)生抗體，然后從動物血清中分離所需抗體。（2）缺陷：產(chǎn)量低、純度低，而且特異性差。每一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體單一B淋巴細(xì)胞細(xì)胞群選擇克隆產(chǎn)生大量純度高特異性強(qiáng)的抗體B淋巴細(xì)胞不可能無限增殖2.大量制備單一抗體的思路和需解決的問題3.單克隆抗體的制備（1）單克隆抗體：由單一B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的特異性抗體。（2）單克隆抗體的制備思路一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細(xì)胞（癌細(xì)胞）能無限增殖動物細(xì)胞融合雜交瘤細(xì)胞動物細(xì)胞培養(yǎng)單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞：既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生抗體注射特定的抗原多種B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)融合①未融合的細(xì)胞②多種雜交細(xì)胞（包括B-B細(xì)胞、瘤-瘤細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞）動物細(xì)胞融合單克隆抗體制備的過程①未融合的細(xì)胞②多種雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞抗體檢測呈陽性的雜交瘤細(xì)胞（分泌的抗體能與特定抗原結(jié)合）注射到小鼠腹腔內(nèi)（體內(nèi)培養(yǎng)）體外培養(yǎng)獲取單克隆抗體從小鼠腹水中從細(xì)胞培養(yǎng)液中動物細(xì)胞培養(yǎng)用特定的選擇培養(yǎng)基第一次篩選克隆化培養(yǎng)、抗體檢測第二次篩選（可進(jìn)行多次）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測每一個孔中盡量只接種一個雜交瘤細(xì)胞有限稀釋法第二次篩選檢測原理：抗原和抗體能夠特異性結(jié)合(分子水平的鑒定）第一次篩選第二次篩選原因方法結(jié)果誘導(dǎo)融合后得到的細(xì)胞中，除雜交瘤細(xì)胞之外，還有未融合的親本細(xì)胞，也有融合的具有同種核的細(xì)胞由于小鼠在生活中還受到其他抗原的刺激，所以經(jīng)第一次篩選之后獲得的雜交瘤細(xì)胞中有能產(chǎn)生其他抗體的細(xì)胞用特定的選擇培養(yǎng)基進(jìn)行篩選用96孔板培養(yǎng)，在每一個孔中盡量只接種一個雜交瘤細(xì)胞的情況下，進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測（進(jìn)行多次篩選）篩選獲得雜交瘤細(xì)胞獲得足夠數(shù)量的能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞兩次篩選的比較討論1：ADC的抗體和藥物各具有什么作用？

抗體主要發(fā)揮靶向運(yùn)輸作用，即通過特異性結(jié)合靶細(xì)胞表面的抗原，將連接的藥物輸送到靶細(xì)胞；

藥物發(fā)揮治療效應(yīng)，如殺傷靶細(xì)胞討論2：除了細(xì)胞毒素，還有哪些物質(zhì)理論上可以作為ADC偶聯(lián)的藥物？①可以用放射性同位素標(biāo)記單克隆抗體進(jìn)行靶向放療；②一些作用于細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的藥物可以通過阻斷腫瘤細(xì)胞的信號通路來抑制其生長，理論上也可以將這些藥物與單克隆抗體結(jié)合進(jìn)行治療討論3：單克隆抗體診斷試劑盒和ADC在臨床應(yīng)用上各具有什么優(yōu)勢？①單克隆抗體診斷試劑盒中的單克隆抗體只與特定的抗原反應(yīng)，因此檢測的特異性和靈敏度大大提高；生產(chǎn)單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞可以傳代培養(yǎng)、冷凍保存和復(fù)蘇利用，有利于控制產(chǎn)品的質(zhì)量和標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)診斷試劑盒；②ADC能夠協(xié)同發(fā)揮抗體特異性識別的靶向作用和細(xì)胞毒素對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，因此它在臨床上具有靶點(diǎn)清楚、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)概述應(yīng)用