實(shí)驗(yàn)報(bào)告目的基因與載體的連接轉(zhuǎn)化及工程菌導(dǎo)入表達(dá)并PCR驗(yàn)證_第1頁(yè)
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PCR二．實(shí)驗(yàn)原理DNA溫度是連接酶的最適溫度---37在室溫下（12~16）既可最大程度發(fā)揮連接酶的活性，又有助于短暫配對(duì)構(gòu)造的穩(wěn)定。DNACo100～1000DNAKanaLBPCR菌落PCR已完畢酶切的載體與目的基因片段。DNADH5a恒溫?fù)u床，高壓滅菌鍋，超凈工作臺(tái)，10、100、1000μLPCRDNA

c.e.LB培養(yǎng)液:胰蛋白胨（Tryptone）10g，酵母提取物（Yeastextract）5g，NaCl5g，瓊脂（固體培養(yǎng)基）15g1NNaOHDNAGoldview（DNA1×TAE上樣緩沖液loading四種脫氧核糖核苷酸原料、TaqPCR PCREP0.2mlEP2.5pET-7.5132X：Y=1:10～30，25μLEP2230min，-30min。42℃45立刻5minDNAEP再在感受態(tài)細(xì)胞混合物中加入0.8mLLB37℃搖床中1h。kanaLB，37℃PCR體積10體積104×1Taq1實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有MgCl2，Buffer中含有Mg2+,因此實(shí)際添加18.5+1.5=20μLddH2O;PCR加樣的次序：先加ddH2O，另首先是緩沖液和菌落，最后加酶，且要把樣品加到液面下，酶從-200C冰箱中拿出后放在冰中待用，加53PCR①94℃預(yù)變性②94DNA③55DNA④72⑤重復(fù)環(huán)節(jié)②~④30DNA30⑥7210min；4℃5mmPCR5μL1μL（×）100V1~2cm254nmDNA五．實(shí)驗(yàn)成果工程菌的差別重要在于熱激時(shí)長(zhǎng)20s45s）圖1平板工程菌生長(zhǎng)狀況（1PCR實(shí)驗(yàn)成果123MA123MBCDFG圖2PCR闡明：泳道編號(hào)依次為：1紅色熒光蛋白工程 2綠色熒光蛋白工程3綠色熒光蛋白工程菌（老師提供，4GFP桿菌基因組條帶（31000bpbpPCRLB何？答：溶重復(fù)次數(shù)過(guò)多，即使在一定程度上能夠提高產(chǎn)物量，PCR20cm討論三.DNA聚合酶的特性和菌落PCRPCR擴(kuò)增，能夠快速鑒定菌落與否為含有目的基因的陽(yáng)性菌落，PCRDH5aBL21BL21是蛋白酶缺點(diǎn)株，體現(xiàn)出來(lái)的蛋白不會(huì)被降解，BL21DH5aDH5aDH5a中體現(xiàn)時(shí)外源基因的啟動(dòng)子必須被大腸

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