電針三陰交穴對(duì)嗎啡戒斷后焦慮小鼠下丘腦-ep、5-h及其代謝產(chǎn)物5-hiaa含量的影響

電針三陰交穴對(duì)嗎啡戒斷后焦慮小鼠下丘腦-ep、5-h及其代謝產(chǎn)物5-hiaa含量的影響

在脫毒期，尤其是脫毒后的癥狀，大多數(shù)患者會(huì)出現(xiàn)焦慮。電針不僅可以抑制亞洲物質(zhì)的滅絕癥狀，還可以緩解中毒患者在滅絕后的焦慮和其他情緒，為預(yù)防和吸收提供更好的治療方法。有研究表明,β-內(nèi)啡肽(β-endorphinpeptide,β-EP)是體內(nèi)主要的內(nèi)源性阿片肽之一,它可調(diào)節(jié)中樞5-HT的釋放,抑制焦慮情緒發(fā)生;當(dāng)其水平降低時(shí),其對(duì)5-HT的抑制作用相應(yīng)減弱,致使中樞5-HT釋放顯著增多,從而產(chǎn)生焦慮情緒。在我們前期實(shí)驗(yàn)研究工作基礎(chǔ)上,為更深入探討電針是否通過(guò)調(diào)整與情緒相關(guān)的重要部位下丘腦β-EP的水平,達(dá)到控制5-HT合成、釋放與代謝,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)抗嗎啡戒斷后焦慮的目的,故此本實(shí)驗(yàn)選擇嗎啡戒斷后焦慮模型,觀察了嗎啡戒斷后不同時(shí)間段3d、5d下丘腦β-EP、5-HT及5-HIAA的水平變化,以及電針的作用效應(yīng),為進(jìn)一步揭示針刺抗嗎啡戒斷后焦慮的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ),為臨床運(yùn)用電針抗嗎啡等毒品戒斷后焦慮情緒、防止復(fù)吸提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料和方法1.1材料表面1.1.1動(dòng)物及飼料動(dòng)物中心昆明種小鼠140只,雄性,體重20g±2g。(動(dòng)物及飼料均由成都中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)前馴養(yǎng)1周,動(dòng)物房溫度、濕度分別維持在24℃、70%左右。1.1.2鹽酸納洛酮注射液鹽酸嗎啡注射液(morphinehydrochloride):沈陽(yáng)第一制藥廠,批號(hào)930503。鹽酸納洛酮注射液(naloxone,NLX):益橋(湖南)制藥有限公司,批號(hào)0207231。5-HT和5-HIAA標(biāo)準(zhǔn)品:SigmaChemicalCo,批號(hào)093k0739、052k1301。β-EP放免試劑盒:北京阜成路六號(hào)海軍放免技術(shù)中心。1.1.3設(shè)備和設(shè)備G6805-II型電針治療儀;日本島津RF-5301PC型熒光分光光度計(jì);高架十字迷宮,采用國(guó)際通用方法制作。1.2方法1.2.1分組及分組按照SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包transform隨機(jī)分組的原則將小鼠分為3d組(70只)和5d組(70只),兩組分別設(shè)定空白組,模型組,模針組,單針組,完全空白組。1.2.2納洛酮非模針組的制備方法A.空白組:除每天在相同的時(shí)間皮下注射與模型組相同劑量的生理鹽水,以及在相同時(shí)間進(jìn)行與模針組相同的方法固定和迷宮實(shí)驗(yàn)外,不做任何其他處理。B.模型組:參照文獻(xiàn)方法改良后進(jìn)行造模,即以小鼠熱板法鎮(zhèn)痛ED50、嗎啡2.95mg/kg為基礎(chǔ),按照逐日遞增原則進(jìn)行,于第15次給藥后3h,腹腔注射納洛酮4mg/kg后,立即將小鼠置于3000mL燒杯內(nèi),觀察注射納洛酮10min內(nèi)小鼠的跳躍反應(yīng)。通過(guò)小鼠跳躍實(shí)驗(yàn)被確認(rèn)為嗎啡成癮者,再接受迷宮試驗(yàn)。隨后進(jìn)行與模針組相同的固定和迷宮試驗(yàn)。C.模針組:在模型組基礎(chǔ)上,進(jìn)行電針治療,電針從催癮后當(dāng)天開(kāi)始進(jìn)行。取“三陰交”穴,穴位根據(jù)《中國(guó)獸醫(yī)針灸學(xué)》及《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》并結(jié)合人體進(jìn)行參照定位。取穴位之后,以半寸針刺于雙側(cè)“三陰交”穴,接電針治療儀,頻率2～20Hz,電壓2～4V,強(qiáng)度逐漸增大,以見(jiàn)到小鼠下肢輕微抖動(dòng)為度。每日治療1次,每次治療15min,3d組、5d組分別連續(xù)治療3d、5d。D.單針組:不造模,除每天在相同的時(shí)間皮下注射與模型組相同劑量的生理鹽水,其余處理同模針組。E.完全空白組:除不進(jìn)行迷宮實(shí)驗(yàn)外,其余同空白組處理。迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果另文報(bào)道。1.2.3保水性測(cè)定各組在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后立即斷頭取腦,迅速于冰盤(pán)上取出下丘腦。下丘腦分別采用兩種方法處理:(1)立即稱重后加到1mL100℃生理鹽水中,煮沸5min后迅速冷卻,用0.1N鹽酸制成勻漿,4℃冷藏,1～2h后再用0.1N的NaOH中和,離心取上清液-20℃保存,待測(cè)β-EP含量(采用放射免疫法測(cè)定);(2)置于-70℃保存,待測(cè)5-HT、5-HIAA含量(采用熒光法檢測(cè))。1.2.4處理數(shù)據(jù)采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行單因素方差分析,數(shù)據(jù)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(xˉ+s)(xˉ+s)表示。2結(jié)果2.1小鼠腦電d及探索型小鼠腦電d模型比較結(jié)果見(jiàn)表1。從表1得知,戒斷3天后模型組小鼠下丘腦β-EP水平較各組均下降,且與模針組、單針組、完全空白組比較差異顯著(P<0.01),戒斷5d后模型組小鼠下丘腦β-EP水平雖有一定自然恢復(fù),但仍然明顯低于模針組、單針組、完全空白組(P<0.05);電針治療3d和5d后下丘腦β-EP水平較模型動(dòng)物均有明顯提高(P<0.05)。2.2各組患者5-hoa含量比較結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知,模型組戒斷3d和5d后下丘腦5-HT含量較各組均明顯增高(P<0.05,或P<0.01);5-HIAA含量也較各組升高,且在第3d與完全空白組比較有差異(P<0.05),在第5d與模針組、單針組、完全空白組比較出現(xiàn)差異(P<0.05)。電針治療后可使3d組、5d組5-HT含量下降(P<0.05),使5d組5-HIAA含量下降。3電針治療焦慮-ep的作用早有研究發(fā)現(xiàn)外源性嗎啡的應(yīng)用將導(dǎo)致動(dòng)物機(jī)體內(nèi)合成β-EP的主要中樞部位—下丘腦以及與阿片依賴密切相關(guān)的中樞部位β-EP水平下降,提示外源性阿片藥物對(duì)內(nèi)源性β-EP系統(tǒng)的負(fù)反饋抑制可能是嗎啡依賴和戒斷的重要神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制;而當(dāng)外源性阿片停止應(yīng)用3d、甚至7d后,參與心理依賴形成的中樞部位以及合成部位β-EP水平均難以恢復(fù)正常,β-EP維持于低水平;有人發(fā)現(xiàn)嗎啡依賴大鼠戒斷3d甚至7d后下丘腦POMCmRNA水平仍低于正常大鼠,說(shuō)明在依賴期間受到抑制的β-EP的合成恢復(fù)正常的過(guò)程是緩慢。這可能與焦慮、渴求等心理依賴難以克服有關(guān),也可能是阿片依賴患者戒毒后易復(fù)吸的重要原因。本實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)進(jìn)行迷宮實(shí)驗(yàn)的焦慮小鼠嗎啡戒斷后3d和5d下丘腦β-EP仍處于低水平,與文獻(xiàn)報(bào)道一致;通過(guò)電針治療后,焦慮小鼠下丘腦β-EP含量基本恢復(fù)至正常,提示電針有提高嗎啡戒斷后焦慮小鼠下丘腦β-EP水平作用,這與臨床電針明顯緩解脫毒者在脫毒后期的焦慮情緒有一致性。β-EP是體內(nèi)主要的內(nèi)源性阿片肽之一,具有神經(jīng)遞質(zhì)或調(diào)質(zhì)或神經(jīng)激素樣的細(xì)胞間信使作用,它的異常變化在嗎啡戒斷后焦慮形成中起重要的作用。焦慮與5-HT,Ach,NE,GABA四大遞質(zhì)系統(tǒng)功能紊亂有著極為密切的關(guān)系,而內(nèi)源性阿片樣肽能夠抑制5-HT等致焦慮神經(jīng)遞質(zhì)釋放的作用。嗎啡藥物戒斷后,β-EP分泌減少,對(duì)5-HT能神經(jīng)系統(tǒng)的抑制作用減弱,使得5-HT等神經(jīng)遞質(zhì)釋放顯著增加,產(chǎn)生焦慮情緒。本實(shí)驗(yàn)觀察到,電針可降低嗎啡戒斷3d和5d后焦慮小鼠下丘腦5-HT含量,使其恢復(fù)至正常,這與我們前期的實(shí)驗(yàn)研究工作相一致,電針這一作用可能與其