法羅培南鈉片在健康人體的藥代動(dòng)力學(xué)研究

法羅培南鈉片在健康人體的藥代動(dòng)力學(xué)研究

法羅培南是一種丙烯類抗生素，主要以口服鈉的形式應(yīng)用于臨床疾病。除抗銅綠假單胞菌活性較弱以外,對(duì)需氧及厭氧革蘭陽性菌、革蘭陰性菌均顯示出廣譜的抗菌活性。研究表明,法羅培南對(duì)各種β-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定,較少產(chǎn)生耐藥性,現(xiàn)已用于治療敏感菌引起的呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)等各系統(tǒng)感染,且取得良好的療效。本試驗(yàn)采用HPLC-UV法測(cè)定血漿及尿液中法羅培南濃度,研究健康受試者口服三劑量(150mg、300mg和600mg)法羅培南鈉片后法羅培南在體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征,為臨床制定合理的給藥方案提供參考依據(jù)。1法羅培南鈉片Agilent1100系列高效液相色譜儀(配有自動(dòng)進(jìn)樣器和紫外檢測(cè)器);GL-20G-Ⅱ高速冷凍離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);XW-80A旋渦混合器(上海精科實(shí)業(yè)有限公司);高速離心機(jī)(美國(guó)雅培公司)。法羅培南鈉片劑,規(guī)格:150mg/片(以法羅培南計(jì)),批號(hào):20080101,由北京四環(huán)制藥有限公司生產(chǎn)。法羅培南鈉標(biāo)準(zhǔn)品(法羅培南含量87.5%)由東北制藥集團(tuán)公司沈陽第一制藥廠提供。替硝唑由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。乙腈為色譜純,三氯乙酸、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉等其他試劑均為分析純?？瞻籽獫{由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院輸血科提供。2方法和結(jié)果2.1平均體重及一般情況經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)試驗(yàn)方案后,選擇12名健康受試者(男6名,女6名),平均年齡為(26.1±1.1)歲,平均體重為(61.3±10.9)kg。試驗(yàn)前,受試者均接受體檢,血尿常規(guī)、肝腎功能和心電圖檢查等均正常。試驗(yàn)前規(guī)定時(shí)間內(nèi)及試驗(yàn)期間未服用其他任何藥物,禁煙酒。告知受試者試驗(yàn)的內(nèi)容、可能出現(xiàn)的不良反應(yīng)及享有的權(quán)利,自愿簽署知情同意書。2.2分組、給藥、血漿將12名受試者隨機(jī)分為3組,分別口服法羅培南鈉片150、300和600mg。給藥前1d受試者晚食清淡飲食后禁食,試驗(yàn)日早晨空腹口服給藥,200mL溫開水送服,并于給藥后2h內(nèi)禁水,給藥后4、10h統(tǒng)一進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)餐。于服藥前(0h)和服藥后0.33、0.67、1、1.5、2、2.5、3、4、5、6、8、10h,分別采集受試者靜脈血4mL,離心分離所得的血漿,于-70℃冷凍保存待測(cè)。受試者于用藥前排空膀胱,收集0h空白尿樣和0~2、2~4、4~8、8~12h的尿樣,測(cè)定總體積后,留取10mL尿樣于-70℃保存待測(cè)。2.3樣品測(cè)定2.3.1流動(dòng)相、檢測(cè)波長(zhǎng)色譜柱:AgilentZORBAXE-clipsePlusC18柱(4.6mm×150mm,5μm);流動(dòng)相:乙腈:0.05mol/LKH2PO4緩沖液(磷酸調(diào)節(jié)pH值為3.2)=16∶84(v/v);流速:1.0mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):318nm;柱溫:30℃。2.3.2低溫離心時(shí)間血樣:于具塞塑料試管中添加500μL血漿,補(bǔ)加50μL水,加入50μL內(nèi)標(biāo)(6μg/mL替硝唑水溶液),加300μL10%三氯乙酸渦旋混合1min,4℃10000r/min低溫離心10min。取上清液300μL,加入1mol/LNaOH45μL,渦旋混合2s,10000r/min離心2min,進(jìn)樣100μL。尿樣:于具塞塑料試管中精確添加尿樣200μL,補(bǔ)加20μL水、15μL10%三氯乙酸渦旋混合2s,10000r/min離心1min,進(jìn)樣50μL。濃度超過標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍的血樣和尿樣用空白血漿或尿液稀釋后,按上述方法復(fù)測(cè)。2.3.3標(biāo)準(zhǔn)曲線及定量限血樣標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:將不同濃度的法羅培南標(biāo)準(zhǔn)系列水溶液加入500μL的空白血漿中,配制相當(dāng)于0.025、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μg/mL的血漿樣品,按血樣處理方法操作,制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。采用最小二乘法,以法羅培南與內(nèi)標(biāo)的峰面積比(As/Ai)對(duì)濃度C進(jìn)行回歸計(jì)算,回歸方程:As/Ai=0.8012C+0.0060,R=0.9992。最低定量限為0.025μg/mL,線性范圍為0.025~10.0μg/mL。尿樣標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:將不同濃度的法羅培南標(biāo)準(zhǔn)系列水溶液加入200μL空白尿液中,配制0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0μg/mL的尿液樣品,按尿樣處理方法操作,制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。以法羅培南的峰面積對(duì)濃度C做回歸,回歸方程:As=58.50C-0.4842,R=0.9991。最低定量限為0.1μg/mL。線性范圍為0.1~10.0μg/mL。2.3.4保留時(shí)間和典型色譜圖血樣中的法羅培南和內(nèi)標(biāo)替硝唑的分離度良好,無內(nèi)源性物質(zhì)干擾,保留時(shí)間分別為8.1、5.9min。典型色譜圖見圖1。尿樣中由于原形藥物濃度較低,尿液內(nèi)源性在內(nèi)標(biāo)處有雜質(zhì)干擾,因此,采用外標(biāo)法測(cè)定,法羅培南的保留時(shí)間為8.4min,見圖2。2.3.5回收率和精密度按“標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”項(xiàng)下配制0.05、0.5、5.0μg/mL的血漿質(zhì)量控制(QC)樣品和0.2、1.0、5.0μg/mL的尿樣質(zhì)量控制(QC)樣品,按血樣和尿樣處理方法操作。對(duì)每個(gè)濃度各6樣本進(jìn)行分析(n=6),連續(xù)測(cè)定3d,計(jì)算日內(nèi)、日間精密度。按上述方法分別制備血樣和尿樣質(zhì)控樣品,計(jì)算每個(gè)濃度(n=6)樣品考察方法的回收率。精密度和回收率結(jié)果見表1。2.3.6個(gè)月穩(wěn)定性測(cè)定分別于血漿樣品處理后即刻(0h)、4℃放置24h、-70℃反復(fù)循環(huán)凍融3次和冷凍1個(gè)月后,分析測(cè)定低、中、高質(zhì)控血樣(0.05、0.5、5.0μg/mL)和尿樣(0.2、1.0、5.0μg/mL),每個(gè)濃度3個(gè)樣本,考察樣品在試驗(yàn)期間所處不同條件下的樣品穩(wěn)定性。結(jié)果相對(duì)偏差絕對(duì)值均<12.2%,表明血樣和尿樣在整個(gè)分析測(cè)試過程中穩(wěn)定。2.4原藥的尿藥泄漏率12名健康受試者口服不同劑量法羅培南鈉片后的法羅培南平均血藥濃度-時(shí)間曲線見圖3。12名健康受試者口服不同劑量法羅培南鈉片后,藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)AUC0~t分別為(3.73±2.77)、(6.72±4.12)和(13.1±8.04)μg·h/mL;Cmax分別為(1.89±0.93)、(3.19±1.14)和(6.95±3.37)μg/mL。150、300和600mg3個(gè)劑量組的原型藥物累積尿藥排泄率分別為(6.32±7.09)%、(4.69±4.32)%、(4.14±2.95)%,統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明,各劑量組間無差異,尿藥最大排泄速率發(fā)生在0~4h。3討論筆者對(duì)流動(dòng)相的配比和pH值進(jìn)行了考察,發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相pH和乙腈的含量對(duì)法羅培南分離影響較大,最終確定KH2PO4緩沖液pH值為3.2、乙腈含量為16%。結(jié)果表明,樣品保留時(shí)間穩(wěn)定,無內(nèi)源性物質(zhì)干擾測(cè)定。本研究顯示,法羅培南在150~600mg劑量間呈線性藥動(dòng)學(xué),與文獻(xiàn)基本一致。健康人單劑量口服150、300和600mg法羅培南鈉片后,達(dá)峰