護(hù)肝片中五味子的提取工藝研究

護(hù)肝片中五味子的提取工藝研究

肝保護(hù)片具有平肝理氣、健脾消食的功效。護(hù)肝片具有降低轉(zhuǎn)氨酶的作用。護(hù)肝片是由五味子、柴胡、茵陳、板藍(lán)根、豬膽粉、綠豆六種藥物成份組成的純中藥復(fù)方制劑,其組方來(lái)源于中醫(yī)名著《傷寒論》中茵陳蒿湯與小柴胡湯的配伍原理。臨床上廣泛用于脂肪肝、酒精肝、藥物性肝損傷、慢性肝炎及早期肝硬化的防治,是目前最常用的肝病治療藥物之一。五味子,俗稱山花椒、五梅子等。五味子具有斂肺、滋腎、生津、收汗、澀精等功效。五味子乙素為五味子的有效成分。本文對(duì)護(hù)肝片中五味子的提取工藝進(jìn)行研究。1儀器、設(shè)備和儀器LC-100(梯度)數(shù)字化電腦智能控制高效液相色譜儀(上海伍豐科學(xué)儀器有限公司);1730QFY超聲波清洗器(上海洽姆儀器科技有限公司);PHB恒溫水浴箱(天津因賽科技發(fā)展有限公司);R-1050大型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司);Molchem化工行業(yè)用超純水設(shè)備(上海摩勒科學(xué)儀器有限公司);ZYpureEDIa-20/up超純水機(jī)(北京中揚(yáng)永康環(huán)?？萍加邢薰?;QTR3120基本加熱型超聲波清洗器(天津市瑞普電子儀器公司);PGC-el精密天平(艾德姆衡器(武漢)有限公司);雙向磁力攪拌器(北京來(lái)亨科貿(mào)有限責(zé)任公司)。乙腈(濟(jì)南鴻鑫化工有限公司)、甲醇(寧波市百勝化工有限公司)、磷酸(廣西明利化工有限公司)、三乙胺(湖北武漢雙銀化工有限公司)、乙醇(湖北永發(fā)化工制造有限公司)。五味子(世一堂飲片廠)。2方法和結(jié)果2.1乙醇-乙醇法按處方稱取五味子,粉碎為粗粉,至于回流提取器內(nèi),分別加6倍95%、85%、75%乙醇,浸泡0.5小時(shí),提取二次,第一次2小時(shí),第二次1小時(shí),過(guò)濾,合并濾液,減壓濃縮至相對(duì)密度為1.28(80攝氏度測(cè))。采用高效液相測(cè)定濃縮膏含量。2.2滲句法滲句法按處方稱取五味子,粉碎為粗粉,至于滲濾罐內(nèi),分別采用6倍95%、85%、75%乙醇進(jìn)行滲漉,滲漉速度為每分鐘1升,合并滲漉液,減壓濃縮至相對(duì)密度為1.28(80攝氏度測(cè))。采用高效液相測(cè)定濃縮膏含量。2.3滲句法優(yōu)化五味子乙素提取實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,采用95%乙醇回流提取五味子乙素含量為3.12%;采用85%乙醇回流提取五味子乙素含量為2.82%;采用75%乙醇回流提取五味子乙素含量為2.41%;采用95%乙醇滲漉提取五味子乙素含量為3.32%;采用85%乙醇滲漉提取五味子乙素含量為2.95%;采用75%乙醇滲漉提取五味子乙素含量為2.56%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明滲漉提取含量明顯高于回流提取,最95%乙醇滲漉提取最高。選擇滲漉速度、加醇量、乙醇溫度作為考察因素,采用正交試驗(yàn)法對(duì)影響提取效率的其它工藝條件進(jìn)行優(yōu)選。采用3個(gè)考察水平,用L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn),因素水平表見(jiàn)表1。3重量測(cè)定3.1色譜柱及檢測(cè)波長(zhǎng)色譜條件色譜柱為WatersSunFireC18液相色譜柱(規(guī)格250×4.6mm,5um);甲醇-水(60:40)為流動(dòng)相[7,8,9,10,11,12,13,14];檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm;流速1.0mL·min-1。3.2流動(dòng)相、超聲濾膜的制備供試品溶液的制備取五味子濃縮膏,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入流動(dòng)相100ml,密塞,精密稱定重量,超聲三十分鐘,放冷,精密稱定,用流動(dòng)相補(bǔ)足重量,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。3.33.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備將濃度為0.1μg/ml,0.4μg/ml,0.8μg/ml,1.6μg/ml,3.2μg/ml,6.4μg/ml,12.8μg/ml,,的對(duì)照品溶液分別吸取20μL注入HPLC,以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試驗(yàn)表明,五味子乙素對(duì)照品在0.1~12.8μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。3.5加樣回收率試驗(yàn)回收率試驗(yàn)取已知含量的同一批供試品各6份,分別精密添加一定量的五味子乙素對(duì)照品,測(cè)定含量,計(jì)算回收率。平均回收率為99.56%,RSD為0.56%。4比例乙醇回流提取藥法按照L9(34)正交設(shè)計(jì)表?xiàng)l件進(jìn)行試驗(yàn),得到最佳的提取工藝為6倍95%乙醇(30攝氏度)進(jìn)行滲漉,滲漉速度為每分鐘5毫升,合并滲漉液,減壓濃縮至相對(duì)密度為1.28(80攝氏度測(cè))。本方法可靠、簡(jiǎn)單,可用于生產(chǎn)。2010中國(guó)藥典規(guī)定五味子膏提取方法為采用75%乙醇回流提取五味子膏。實(shí)驗(yàn)證明,用95%乙醇滲漉提取五味子膏,五味子乙素的含量最高。因?yàn)槲逦蹲右宜貙僦苄猿煞?長(zhǎng)時(shí)間加熱回流提取會(huì)破壞其有效成份,所以采用95%乙醇滲漉提取五味子膏,五味子乙素的含量最高。2010中國(guó)藥典規(guī)定采用75%乙醇回流提取三次,乙醇使用量較大,提取時(shí)間常。采用95%乙醇滲漉提取乙醇使用量小,耗能較小。本實(shí)驗(yàn)還考察流動(dòng)相,分別考察乙腈-水-冰醋酸(80:20:0.1),磷酸二氫鉀緩沖液-乙腈(1∶1,磷酸調(diào)至pH3.0),甲醇-乙腈-水(50∶30∶20),乙腈-水-冰醋酸(85:15:0.1)不同比例的流動(dòng)相,結(jié)果以甲醇-水