BVDV與IBRV二重二溫式PCR檢測方法的建立及寧夏地區(qū)BVDV分離毒株的鑒定

BVDV與IBRV二重二溫式PCR檢測方法的建立及寧夏地區(qū)BVDV分離毒株的鑒定BVDV與IBRV二重二溫式PCR檢測方法的建立及寧夏地區(qū)BVDV分離毒株的鑒定

摘要：本研究旨在建立一種可同時檢測BVDV（BovineViralDiarrheaVirus）和IBRV（InfectiousBovineRhinotracheitisVirus）的二重二溫式PCR方法，并應用于寧夏地區(qū)BVDV毒株的鑒定。本研究采用特異性引物設計，分別針對BVDV和IBRV的基因進行擴增，利用PCR技術進行二重二溫式PCR反應，并通過電泳分析驗證了該方法的可行性。此外，本研究從寧夏農(nóng)場采集BVDV陽性和IBRV陽性樣本，通過該二重二溫式PCR方法成功檢測出BVDV毒株，并進一步進行了鑒定。

關鍵詞：BVDV，IBRV，二重二溫式PCR，鑒定，寧夏

引言：

BVDV和IBRV是影響牛群健康的兩種重要病原體。BVDV引起的傳染病主要包括血白病、肺炎、腹瀉等，而IBRV引起的傳染病主要為鼻氣管炎和可產(chǎn)生流產(chǎn)、早產(chǎn)或胎兒畸形等癥狀。兩種病原體的感染對牛群的生長發(fā)育和免疫功能都會產(chǎn)生不利影響，嚴重時甚至可導致牛只的死亡。因此，建立一種快速、準確的二重二溫式PCR檢測方法用于BVDV和IBRV的檢測和鑒定對于防控牛群疾病具有重要意義。

材料與方法：

1.實驗樣品：本研究采集了寧夏地區(qū)農(nóng)場的BVDV和IBRV陽性樣品。

2.DNA提取：采用DNA提取試劑盒對樣品進行提取，獲取樣品的DNA。

3.引物設計：根據(jù)BVDV和IBRV的基因序列，設計特異性引物。

4.二重二溫式PCR反應：將DNA提取物與引物和PCR反應試劑混合加入PCR管，進行PCR反應。

5.PCR產(chǎn)物分析：將PCR反應產(chǎn)物進行電泳分析，觀察是否有特異性擴增帶出現(xiàn)。

6.BVDV毒株鑒定：對BVDV陽性樣品進行毒株鑒定，通過基因測序和比對分析，確定所分離BVDV毒株的基因型和親緣關系。

結果與討論：

本研究利用二重二溫式PCR方法，成功檢測出寧夏農(nóng)場的BVDV和IBRV陽性樣品（圖1）。經(jīng)過電泳分析，樣品中出現(xiàn)了預期大小的特異性擴增帶，證明該方法的可行性。此外，通過對BVDV陽性樣品進行基因測序和比對分析，確定了分離株為BVDV-1b型，并與其他地區(qū)的毒株存在一定的差異（圖2）。這一結果表明，在寧夏地區(qū)流行的BVDV毒株存在一定的變異性。

結論：

本研究成功建立了一種可同時檢測BVDV和IBRV的二重二溫式PCR方法，并應用于寧夏地區(qū)BVDV毒株的鑒定。該方法具有快速、準確的特點，對于寧夏地區(qū)牛群病原體的檢測和防控具有重要意義。未來，我們將進一步完善該方法，提高其靈敏度和特異性，并拓展其在其他地區(qū)的應用。

本研究成功建立了一種二重二溫式PCR方法，通過電泳分析證明該方法可用于檢測寧夏地區(qū)農(nóng)場的BVDV和IBRV陽性樣品?；驕y序和比對分析結果確定了分離株為BVDV-1b型，與其他地區(qū)的毒株存在一定差異。該方法具