人細(xì)胞膜表面免疫球蛋白SmIg酶聯(lián)免疫分析ELISA

1人細(xì)胞膜外表免疫球蛋白(SmIg)酶聯(lián)免疫分析〔ELISA〕試劑盒使用說(shuō)明書(shū)本試劑僅供爭(zhēng)論使用白(SmIg)的含量。試驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人細(xì)胞膜外表免疫球蛋白(SmIg)水平。用純化的人細(xì)胞膜外表免疫球蛋白(SmIg)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次參加細(xì)胞膜外表免疫球蛋白(SmIg)HRP標(biāo)記的細(xì)胞膜外表免疫球蛋白(SmIg)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-TMB顯色。TMB在HRP(SmIg)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度OD值準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人細(xì)胞膜外表免疫球蛋白(SmIg)濃度。樣本處理及要求：10-2020分鐘左右〔2000-3000轉(zhuǎn)/分。認(rèn)真收集上清，保存過(guò)程中如消滅沉淀，應(yīng)再次離心。尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右〔2000-3000轉(zhuǎn)/分。認(rèn)真收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。血漿：應(yīng)依據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA10-20分鐘后，離心20分鐘左右〔2000-3000轉(zhuǎn)/分。認(rèn)真收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)當(dāng)再次離心。細(xì)胞培育上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右〔2000-3000轉(zhuǎn)/分。認(rèn)真收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS〔PH7.2-7.4〕稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右〔2000-3000轉(zhuǎn)/分。認(rèn)真收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。參加肯定量的PBS，PH7.4。用液氮快速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本溶化后仍舊保持2-℃的溫度。參加肯定量的PBSPH7.，用手工或勻漿器20分鐘左右〔2000-3000轉(zhuǎn)/分。認(rèn)真收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。標(biāo)本采集后盡早進(jìn)展提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)展，提取后應(yīng)盡快進(jìn)展試驗(yàn)。假設(shè)不能馬上進(jìn)展試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避開(kāi)反復(fù)凍融.不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的〔HRP〕活性。留意事項(xiàng)：濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。封板膜只限一次性使用，以避開(kāi)穿插污染。各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并常常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避開(kāi)試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推舉使用排槍加樣。試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘前方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高〔樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋肯定倍數(shù)n倍〕算時(shí)請(qǐng)最終乘以總稀釋倍數(shù)〔×。底物請(qǐng)避光保存。嚴(yán)格依據(jù)說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)展，試驗(yàn)結(jié)果判定必需以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).全部樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。本試劑不同批號(hào)組分不得混用。如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。試劑盒組成：試劑盒組成說(shuō)明書(shū)封板膜密封袋48孔配置1份2片〔48〕1個(gè)96孔配置1份2片〔96〕1個(gè)保存酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品：2700ng/L0.5ml×10.5ml×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存濃縮洗滌液〔20ml×20倍〕×1瓶〔20ml×30倍〕×1瓶2-8℃保存操作步驟加樣：分別設(shè)空白孔〔空白比照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作一樣、待測(cè)樣40μl10μl〔樣品最終稀釋度為5倍。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在第一、其次孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在第一、其次孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、其次100μl50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)50μl50μl〔50μl，濃度分別為1800ng/，1200ng/L，600ng/，300ng/，150ng/。3730分鐘。30〔48T20倍〕倍濃縮洗滌液用蒸餾水30〔48T20倍〕倍稀釋后備用。洗滌：留神揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此5次，拍干。3。5。顯色：每孔先參加顯色劑A50μl，再參加顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15加酶：每孔參加酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。終止：每孔加終止液50μl，終止反響〔此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度〔OD值。測(cè)定應(yīng)在加終止15分鐘以內(nèi)進(jìn)展。保存條件及有效期：2-℃。有效期：6個(gè)月試劑盒性能：樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R0.