hplc法測定西南不同主產地生姜中6-姜酚的含量

hplc法測定西南不同主產地生姜中6-姜酚的含量

中國西南部有許多山區(qū)，氣候濕潤，全年高，地理環(huán)境適宜。對生姜有害，有利于生長，品質優(yōu)良。主要成分是姜酚。在醫(yī)學上,生姜是重要的中藥材,它是衛(wèi)生部首批公布的藥食兼用資源之一。姜酚是姜中辣味成分的主要組分之一,現代醫(yī)學研究證實,姜酚具有很強的生物活性和藥理作用,其具有抗氧化、抗腫瘤、抗菌、消炎、強心、降壓、防治心血管疾病、健胃與抗胃潰瘍、保肝利膽、防腐殺蟲等廣泛的生物活性。6-姜酚為姜酚中最主要的活性成分,其可以治療皮膚癌,抑制惡性細胞增生。研究表明生姜的保健特性和藥食兼用特性大部分都與6-姜酚有直接或間接的關系,通過建立HPLC方法來準確測定西南各主要產地生姜中6-姜酚含量,為生姜在醫(yī)藥保健方面的應用提供依據。1主要設備和材料1.1超聲、儀器和干燥配方測量d分離器dq-25d高效液相,型號:Aglient1260型,VWD檢測器;超聲,型號:KQ-250DB,昆山市超聲儀器有限公司;真空干燥,型號:BZF50型,Boxun;電子天平,型號:METTLERTOLEDO。1.2-姜酚對照品生姜:在西南地區(qū)云、貴、川三省相關產地購買;6-姜酚對照品:購買自天津中新藥業(yè),純度98%(HPLC);水:二次蒸餾水;其余試劑均為分析純。2實驗部分2.16-姜酚含量測定2.1.1水、溫度和塔板數色譜柱:DiamonsilC18(5μm,4.6×250mm);流動相:乙腈∶水=66∶34;柱溫:30℃;流速:1.0mL/min;波長:280nm;進樣量:10μL。理論塔板數以6-姜酚計,大于35000。結果如圖1所示,對照品(A)及樣品(B)基線平直,峰形對稱尖銳,無拖尾,顯示在此條件下樣品組分分離效果良好。2.1.2對照品溶液的制備精密稱取6-姜酚對照品15.44mg至25mL容量瓶中,甲醇超聲溶解,定容后作為對照儲備液。根據實驗要求,用甲醇稀釋成5個不同濃度水平的系列對照品溶液,置于4℃冰箱避光保存。分別精密稱取粗姜酚7.94mg、8.01mg、15.02mg、17.21mg和26.00mg至10mL容量瓶中,甲醇超聲溶解,定容后置于4℃冰箱避光保存。2.1.3標準曲線的繪制將6個不同濃度水平6-姜酚對照品溶液依次連續(xù)進樣3次取平均值,濃度為橫坐標X,峰面積值為縱坐標Y,繪制標準曲線如圖2,計算回歸方程,R值。標準曲線回歸方程為Y=6246.5X+4.4,R=0.999962。6-姜酚濃度在0.06176-0.37056mg/mL范圍內,6-姜酚濃度與峰面積的線性關系良好。2.1.4進樣和進樣次數配制低、中、高三種濃度分別是0.067、0.154、0.344mg/mL的6-姜酚標準品溶液,在一天之內分別連續(xù)進樣5次,以及連續(xù)5天分別進樣1次,檢測6-姜酚的峰面積,日內、日間RSD值分別是0.11%、0.19%。2.1.5進樣和日內、持續(xù)時間進樣6-姜酚含量精密吸取濃度為0.801mg/mL的供試品溶液,分別間隔0、1、2、4、8、16、24小時進樣1次測定6-姜酚含量,以及分別間隔1、3、6、10、15、30天進樣1次測定6-姜酚含量,日內、日間RSD值分別是0.48%、1.00%。2.1.6重復精密吸取5份不同濃度水平供試品溶液,測定6-姜酚的含量,RSD值為0.87%。2.1.7最低濃度ms空白溶劑甲醇峰高0.12mAu,0.067mg/mL6-姜酚標準品的峰高52.5mAu。信噪比3∶1,6-姜酚能被檢測出的最低濃度為4.59×10-4mg/mL?？瞻兹軇┘状挤甯?.12mAu,0.067mg/mL6-姜酚標準品的峰高52.5mAu。信噪比10∶1,6-姜酚能被檢測出的最低濃度為1.53×10-3mg/mL。2.1.8加樣回收率試驗取6-姜酚含量為41.13%的粗姜酚不同質量5份,精密稱定,分別加入6-姜酚標準品0.344mg,配制待測樣品溶液,測定6-姜酚含量,計算加樣回收率,RSD值為1.21%。2.1.9-姜酚質量分數的計算樣品溶液進樣10μL,按“2.1.1”色譜條件進行HPLC測定6-姜酚含量,按以下公式計算。c為進樣時樣品濃度,mg/mL;A為樣品中6-姜酚所對應的的峰面積,mAu·s;W6-姜酚為樣品中6-姜酚的質量分數;x為稀釋倍數;v為進樣溶液總體積,mL;m為樣品質量,mg。2.2生姜是中國西南部的主要藥物2.2.1小麥粉的制備將不同品種的生姜分別洗凈切片,恒溫烘干,粉碎至粉末狀,過40目篩,密封陰涼處保存。分別取干姜粉末約0.5g,精確稱量,置于50mL容量瓶,加入30mL甲醇,振蕩搖勻浸泡24h。恒溫50℃,超聲40min,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,置于冰水浴中冷卻15min,取出后用有機濾膜(0.45μm)迅速過濾,放至室溫,得待測濾液。2.2.26-姜酚含量測定3不同部位生姜的6-姜酚含量建立了生姜中主要藥用有效成分6-姜酚的HPLC檢測方法,并對來自西南地區(qū)貴州水城、興義、安順、長順,云南羅平,四川鍵為(黃口、白口)和貴州