大黃中蒽醌類成分的提取、分離和鑒定實驗報告

大黃中蒽醌類成分的提取、分離和鑒定（實驗報告）實驗目的1)1)熟悉蒽醌類成分的提取分離方法(2)掌握pH梯度提取法的原理和操作技術3)3)學習蒽醌類化合物鑒定方法二、 實驗器材材料及試劑：大黃粗粉、濃硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、濃鹽酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通濾紙、薄層層析硅膠板(2.5cmXIOcm)、廣泛PH試紙、剪刀、鉛筆、尺子、點樣毛細管、樣品管等。儀器：500mL圓底燒瓶、球形冷凝管(30cm)、橡皮管、燒杯、滴管、層析缸(廣口瓶)、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽濾瓶、水浴鍋、集熱式磁力攪拌器、磁子、循環(huán)水式多用真空泵、鐵架臺等。三、 實驗原理大黃為蓼科植物,味苦,性寒,具有瀉熱通腸、涼血解毒、逐瘀通經(jīng)等功效。其主要成分為為蒽醌化合物，含量約為3%~5%，大部分與葡萄糖結合苷，游離苷元有大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚等。其中，大黃酸具有羧基，酸性最強；大黃素具有&酚羥基，酸性第二；蘆薈大黃素連有羥甲基，酸性第三；大黃素甲醚和和大黃酚的酸性最弱。根據(jù)以上化合物的酸度差異，可用堿性強弱不同的溶液進行梯度萃取分離。OHOOHOHOOHR1 | R2OR2R2=H大黃素甲醚R1=HR1=CH3R1=CH2OHR1=CH3R1=CH3大黃酸R2=COOH大黃素R2=OH蘆薈大黃素R2=OCH3大黃酚R2=H四、 實驗內(nèi)容大黃素的提取、分離流程圖大黃粗粉10g20%H2SO42 4150ml加熱1h,抽濾、

干燥干燥濾餅流提取1h流提取1h取乙醚層5%NaHCO3萃水層（紫紅色）乙醚層TOC\o"1-5"\h\z! HClI\o"CurrentDocument"5%Na2CO3 ' 1大黃酸沉淀（粗品）水層（紅色）乙醚層1 [HCl0.25%NaOH大黃素沉淀（粗品）水層（紅色）大黃酚、大黃素甲醚沉淀（混合物）具體操作步驟1.游離蒽醌的提?。?）酸水解：稱取大黃粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL,在水浴上加熱1小時，放冷，抽濾，濾餅用NaOH溶液洗至近中性（pH約為6）,于70°C干燥后,研碎,置250mL圓底燒瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小時（調(diào)45C,回流即可），得到乙醚提取液。2）蒽醌類成分的提?。阂颐烟崛∫航?jīng)薄層層析檢查有大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素、大黃素甲醚和大黃酚。薄層板為硅膠一CMC粘合板，展開劑為石油醚（60?90C）：乙酸乙酯（7：3）近水平或直立展開，在可見光下，可看到四個斑點。其中最上面黃色斑點為大黃酚和大黃素甲醚的混合物,在此條件下,不能分開,其余3個斑點依Rf值（由大到?。┑捻樞蚴谴簏S素（橙色斑點）、蘆薈大黃素（黃色斑點）、大黃酸（黃色斑點），記錄圖譜并計算Rf值。（1）將乙醚提取液加入250mL分液漏斗中（使用前先檢漏），以35mL5%NaHCO3水溶液萃取三次，乙醚層經(jīng)薄層層析檢查（展開劑同上），指示已提盡大黃酸后，合并三次NaHCO3萃取液，用濃鹽酸酸化至PH2-3左右，析出大黃酸沉淀。（注意：加酸時應緩慢加入，以防酸液溢出，如出現(xiàn)分層現(xiàn)象，需將上層乙醚蒸去才能析出固體）。抽濾后，刮下顆粒并稱重。（2）經(jīng)5%NaHCO3水溶液萃取后的乙醚層，繼以35mL5%NajCOj水溶液萃取三次，乙醚層經(jīng)薄層檢查（展開劑同上），指示已提盡大黃素后，合并三次Na2CO3萃取液，用濃鹽酸酸化至PH2-3左右，析出大黃素沉淀。（酸化時注意操作同前）。抽濾后，刮下顆粒并稱重。（3）經(jīng)5%Na2CO3水溶液萃取過后乙醚層以35mL0.25%NaOH水溶液萃取四次，乙醚層經(jīng)薄層檢查（展開劑同上），指示已提盡后，合并三次NaOH萃取液，用濃鹽酸酸化至PH2-3左右，析出蘆薈大黃素、大黃酚和大黃素甲醚沉淀混合物。（酸化時注意操作同前）。抽濾后，刮下顆粒并稱重。

(1)堿液試驗分別取各蒽醌結晶數(shù)毫克置于樣品管中，加2%氫氧化鈉溶液1ml,觀察顏色變化。凡有互為鄰位或?qū)ξ涣u基的蒽醌呈藍紫至藍色，其它羥基蒽醌呈紅色。五、 注意事項：1)游離蒽醌的提取要控制溫度，回流不宜太劇烈。2)pH梯度萃取分離時，以保證提取充分，可以用薄層色譜作監(jiān)測。(3)注意堿液濃度及萃取時的靜置時間對實驗結果的影響。、3.6六、 數(shù)據(jù)記錄、結果討論與分析：、3.6Rf大黃素=3?60/5=0?72Rf蘆薈大黃素1、大黃酸2、大黃素沉淀沉淀3沉淀沉淀3、蘆薈大黃素、大黃酚、

大黃素甲醚沉淀混合物0?9mg 3?2mg 2.9mg分別取各上述沉淀（蒽醌結晶）數(shù)毫克置于樣品管中，加2%氫氧化鈉溶液1ml后，觀察到各樣品管中溶液均呈紅色、但第1根管中顏色略淡。七、 思考題1、1、簡述大黃中5種游離羥基蒽醌化合物的R1R1=HR1=CH3R1=CH2OHR1=CH3酸性與結構的關系。R2=COOHB大黃素R2=OHC蘆薈大黃素R2=HD大黃素甲醚R2=OCH3R1=CHR1=CH3R2=H酸性：A>B>C>E?DpH梯度萃取法的原理是什么？如何利用該方法分離大黃中的5種游離羥基蒽醌化合物？答：pH梯度萃取法的原理是由于溶劑系統(tǒng)pH變化而改變了它們的存在狀態(tài)（游離型或解離型），從而改變了他們在溶劑系統(tǒng)中的分配系數(shù)。的酸性不同，用pH梯度萃取法分離他們；大黃酚和大黃素甲醚酸性相近，利用其極性的差異，用柱色譜分離之。結合本實驗，思考設計實驗方案所需因素？答：游離蒽醌的提取要控制溫度，回流不宜太劇烈。要注意堿液濃度及萃取時的靜置時間對實驗結果的影響。八、 參考文獻（1）吳立軍主編，《天然藥物化學實驗指導》北京；人民衛(wèi)生出版社，2011（2）康廷國主編，《中成藥薄層色譜鑒別》.