臨床醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè) 山楂的降血脂有效部位提取及其滴丸制備工藝研究

PAGE\*romanPAGE\*romanii山楂的降血脂有效部位提取及其滴丸制備工藝研究中文摘要工作包括：條件的優(yōu)選，對(duì)確定的工藝進(jìn)行了驗(yàn)證。以上研究有效利用了山楂資源，提高了山楂類(lèi)制劑的技術(shù)水平。關(guān)鍵詞：山楂；制備工藝ABSTRACTInthispaper,thetridecidacidcomponentsandflavonoidsinhawthornleaveswereextractedbymeansofmacroporousresintreatmentandacid-basetreatment.Atthesametime,theeffectivepartsofhawthorntotalflavonoidsandhawthorntotaltriterpeneacidswereusedasrawmaterialstoprepareChinesemedicinedroppills.Themainresearchworkincludes:Solubilityandbasicpropertiesofpowderwerestudiedintheextractionoftotalflavonoidsfromhawthornandtotaltriterpenateacidfromhawthorn.Preliminarystabilitystudieswerecarriedout,andtheinteractionbetweenthetwoeffectivepartsandtheauxiliarymaterialsforthepreparationofdroppillswasstudied.Thepossibledispersionofthedruginthedroppillmatrixwasinvestigated.Finally,thetypeofpolyethyleneglycolfordroppingpillswasselected,andthecompositionofthewholeprescriptionwasstudied.Optimizationofthepreparationconditionsofdrippreparationwascarriedout,andthedeterminationprocesswasverified.Theaboveresearchhasmadeeffectiveuseofhawthornresourcesandimprovedthetechnicallevelofhawthornpreparations.KeyresinPAGE\*romanPAGE\*romanv目 錄前 言 1第一章綜 述 2山楂的研究概述 2山楂來(lái)源 2山楂的化學(xué)成分 3山楂的藥理作用 4山楂總黃酮類(lèi)研究 7滴丸研究的概述 8高脂血癥的藥物研究概述和研究展望 10高脂血癥概述 10目前臨床上常用的藥物簡(jiǎn)述如下： 10中藥的研究展望： 12本文主要研究工作和創(chuàng)新點(diǎn) 12第二章指標(biāo)性成分測(cè)定方法的研究 14山楂葉黃酮的薄層色譜法鑒別 14試驗(yàn)儀器和藥品 14溶液的制備 14薄層層析 14比色法測(cè)定山楂葉總黃酮的含量 15實(shí)驗(yàn)儀器和藥品 16實(shí)驗(yàn)方法 16實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)選 162.2.4結(jié)論 21反相高效液相色譜法測(cè)定山楂葉黃酮中的有效成分含量 21儀器與試藥 21色譜條件 21對(duì)照品溶液的制備 23線性關(guān)系的考察 23供試品溶液的制備 24方法學(xué)考察 242.3.7討論 26比色法測(cè)定山楂果中總?cè)扑崽崛∥锏暮?27實(shí)驗(yàn)儀器和藥品 27對(duì)照品溶液的配制 27供試品溶液的配制 27測(cè)定波長(zhǎng)選擇 27顯色劑用量及條件優(yōu)選 27樣品的測(cè)定方法 29線性關(guān)系的考察 29精密度試驗(yàn)： 29重復(fù)性試驗(yàn)： 30穩(wěn)定性考察 30回收率試驗(yàn) 312.4.12結(jié)論 32薄層色譜掃描法測(cè)定山楂三萜酸提取部位中熊果酸的含量 32試驗(yàn)儀器與藥品 32對(duì)照品溶液的制備 32展開(kāi)劑的選擇 32提取條件的優(yōu)選 32掃描條件的選擇 33供試品的測(cè)定方法 33方法學(xué)的考察 342.5.8討論 37本章結(jié)論 37第三章有效部位的提取精制工藝研究 39山楂葉中總黃酮的提取精制工藝研究 39試驗(yàn)儀器和藥品 39山楂葉藥材中總黃酮含量的測(cè)定。 39山楂葉總黃酮提取精制工藝的初步選擇 39山楂總黃酮乙醇提取工藝影響因素的考察 39山楂總黃酮提取工藝優(yōu)化 41樹(shù)脂吸附性能的考察 44工藝的驗(yàn)證 503.1.8討論 50山楂果中總?cè)扑岵课惶崛」に嚨难芯?50提取工藝優(yōu)選 51提取工藝的驗(yàn)證 543.2.3討論 54本章結(jié)論 55第四章制劑處方前的研究 56材料和儀器 56方法與結(jié)果 56山楂黃酮提取物和山楂三萜酸提取物表觀溶解度測(cè)定 56粉體學(xué)基本性質(zhì)的測(cè)定 57指標(biāo)性成分化學(xué)穩(wěn)定性考察 61藥物在基質(zhì)中的分散程度考察 644.3討論 65第五章滴丸制備工藝的研究 66試驗(yàn)儀器和藥品 66聚乙二醇基質(zhì)的初步優(yōu)選 66滴丸的處方設(shè)計(jì) 67因素水平設(shè)計(jì) 67數(shù)據(jù)處理方式 67正交試驗(yàn)結(jié)果 68滴制條件的優(yōu)化 695.5結(jié)果 715.6驗(yàn)證 715.7討論 71第六章結(jié)論與展望 726.1結(jié)論 726.2展望 73參考文獻(xiàn) 74PAGEPAGE1前 言心血管疾病是目前威脅我國(guó)人民健康的重大疾病之一降血脂藥物需要長(zhǎng)期服用，患者對(duì)藥物的副作用敏感，均有當(dāng)使用兩種有效部位組方時(shí)，需要考察為何選擇這兩種有效部位組方和兩3:3：5組方[2]，制成單方制劑。山楂中黃酮類(lèi)成分和三萜酸類(lèi)成分均為脂溶性成分，在水中溶解度低。目－中藥滴丸。第一章第一章綜述第一章綜 述山楂的研究概述1000制、藥理及臨床研究都有較大發(fā)展。山楂來(lái)源山楂在我國(guó)供藥用者8種[3]。其名稱(chēng)和分布，見(jiàn)表1-1。表1-1序號(hào) 品 種山楂(Crataeguspinnatifids)，山海關(guān)以南稱(chēng)山楂，主產(chǎn)東北、河北、內(nèi)蒙、河南、山東、山西、陜西等省。朝鮮和蘇聯(lián)西伯利亞亦有分布。山里紅(C.pinnatifidavarMajor)，產(chǎn)地同山楂。野山楂(C.cuneatasiebetzuse)，產(chǎn)于河南、湖南、湖北、江西等省。云南山楂(C.seabrifolia)，產(chǎn)于云、貴、川等省。湖北山楂(C.hupehensis)，產(chǎn)于湖北、湖南、江蘇、浙江、江西、四川、陜西等省。甘肅山楂(C.kansuensis)，產(chǎn)于甘肅、山西、河北、陜西、貴州、四川各地。華中山楂(C.wilsonii)，產(chǎn)地同甘肅山楂.桔紅山楂(C.aurantia古也有分布。山楂的化學(xué)成分2050關(guān)于山楂化學(xué)成分有兒茶酚精、胡蘿卜素鞣酸，及三萜類(lèi)成分山楂酸、熊果酸、齊墩果酸21山楂中黃酮類(lèi)成分主要有金絲桃苷、蘆丁等。三萜酸類(lèi)成分主要有熊果酸、齊墩果酸山楂酸。研究表明山楂果實(shí)中總黃酮與果實(shí)大小、果肉薄厚呈正相關(guān)，山里紅及云山楂的藥理作用山楂的心血管作用(1)降血脂作用：學(xué)者對(duì)山楂黃酮調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝作用進(jìn)行了大量研究[3]，LDLRLDLRLDLR山楂葉制劑益心酮有降血清膽固醇作用，酮，使動(dòng)物廓清速度加快，廓清時(shí)間縮短。(2)降壓作用：較小劑量注射對(duì)麻醉兔、小鼠有降壓作用。山楂乙醇浸出物靜脈給藥，能3h(3)舒張血管作用：山楂總黃酮可增加冠脈流量抗實(shí)驗(yàn)性心肌缺氧，抗心率失常等作用，這對(duì)冠心病等心血管疾病的防治顯然是有益的[30]。(4)抗心率失常作用：山楂浸膏對(duì)垂體后葉素引起的心率不齊，有一定的抑制作用。(5)抗氧化作用：山楂葉乙醇提取物對(duì)羥自由基和超氧陰離子的生成有清除和抑制作用。三萜酸類(lèi)的藥理作用多數(shù)的研究表明山楂黃酮類(lèi)成分具有降壓、增加冠脈血流量、降血脂、強(qiáng)心和抗心律失常的藥理作用。助消化作用山楂中脂肪酸可促進(jìn)脂肪分解，山楂酸等可提高蛋白分解酶的活性，有助消化[18]?？拱┳饔蒙介崛∥飳?duì)人胚肺細(xì)胞及誘癌細(xì)胞的抑制作用。這些顯示山楂有抗癌作用[2]。提高機(jī)體免疫力100%進(jìn)作用[19～20][34]?？咕饔蒙介鍎┖鸵掖继崛∫簩?duì)福氏痢疾桿菌、宋內(nèi)氏痢疾桿菌、變形桿菌、大腸桿菌有抗菌作用[35]。止痛作用山楂能使血管舒張，有助于解除局部瘀血狀態(tài)，并有收縮子宮、促進(jìn)子宮復(fù)原的作用[3]。山楂總黃酮類(lèi)研究總黃酮的提取分離其中常用的提取方法概述如下[13]：（1）水煮浸提法：流程為：山楂葉→水浸煮（2次）→濾液濃縮→沉淀→過(guò)濾→干燥。（2）溶劑萃取法：流程為：山楂葉→用70%乙醇提取→減壓回收乙醇→水分散→用正丁醇萃取→回收正丁醇→總黃酮。（3）聚酰胺分離法：流程為：山楂葉→用70%乙醇提取→回收乙醇→加入聚酰胺粉→用乙醇梯度洗脫→收集各級(jí)洗脫液→合并濃縮。（4）樹(shù)脂吸附法：流程為：山楂葉→浸漬→回收乙醇→過(guò)濾→樹(shù)脂分離→回收乙醇→干燥單成分的分離山楂葉乙醇提取物經(jīng)聚酰胺柱層析分離即可得到牡荊素[13]。其中丙酮提取物經(jīng)硅膠柱層析，氯仿—甲醇—水梯度洗脫，薄層層析檢控，相同部分合并，分別得到槲皮素、金絲桃苷、牡荊素、牡荊素鼠李糖苷、鹽酸二乙胺等化合物。成分的測(cè)定研究人員利用高效液相色譜和薄層色譜測(cè)定山楂葉黃酮[39]。量的如斯多苷。滴丸研究的概述Nernst－Noyes—Whitney因：dCDS(C

C)

公式（1-1）dt V s tdC/dt面積，Cs，Ctt對(duì)難溶性藥物Ct較小，Cs>>Ct，且對(duì)某一藥物來(lái)說(shuō)，D/Vδ＝k所dC/dt＝kSCs 公式（1-2）Csk這些亞穩(wěn)態(tài)分子擴(kuò)散能量高，溶出快。由于滴丸劑具有溶出快、生物利用度高、療效好、藥物穩(wěn)定性好及制備簡(jiǎn)便、質(zhì)量易控等優(yōu)點(diǎn)，因此受到醫(yī)藥界廣泛的重視。高脂血癥的藥物研究概述和研究展望高脂血癥概述心血管疾病是目前威脅我國(guó)人民健康的重大疾病之一，而由脂質(zhì)代謝紊亂所致的高脂血癥是動(dòng)脈粥樣硬化及冠心病調(diào)脂治療是心血管病藥物防治的重要內(nèi)容之一。臨床上常用的藥物，有如下幾種：他汀類(lèi)HGM-CoAHGM-CoA活性而導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)源性膽固醇合成減少貝丁酸類(lèi)臨床常用的有非諾貝特、苯扎貝特、吉非羅齊等。其他常用藥物(1)多烯脂肪酸類(lèi)[45]常用的有月見(jiàn)草油膠丸、魚(yú)油烯康丸等，為不飽和脂肪酸制劑。(2)煙酸類(lèi)[45](3)在降脂治療中可配合使用抗氧化維生素等[45]。常用降血脂中藥降膽固醇的中藥有生姜、人參、大黃、短毛五加、葛根、麻仁、徐長(zhǎng)卿等；降甘油三酯的中藥有赤陽(yáng)子、銀杏葉中藥的研究展望：隨著近年來(lái)深入的研究,認(rèn)為中藥制劑具有療效肯定,毒副作用少,藥物食研究表明有降脂作用的中草藥有幾十種，其中山楂是其中研究較多，效果（LDL本文主要研究工作和創(chuàng)新點(diǎn)料、工藝過(guò)程和制劑的質(zhì)量。主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)如下：確保了山楂黃酮提取部位的質(zhì)量。3.減少了有機(jī)溶劑對(duì)藥品的污染，提高了有效部位的含量。本文進(jìn)行的其它研究工作如下：建立了山楂中黃酮類(lèi)成分的薄層色譜鑒別方法選擇乙醇提取的工藝條件。及對(duì)藥物在基質(zhì)中的分散狀態(tài)的初步研究。優(yōu)選滴丸的處方組成和制劑過(guò)程中的工藝條件。第二章第二章指標(biāo)性成分測(cè)定方法的研究第二章指標(biāo)性成分測(cè)定方法的研究山楂葉黃酮的薄層色譜法鑒別中蘆丁、金絲桃苷的TLC鑒別方法。試驗(yàn)儀器和藥品硅膠G薄層板，煙臺(tái)化工研究所；甲醇、甲酸，丁酮，乙酸乙酯均為分析純?nèi)芤旱闹苽鋵?duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品，制取蘆丁對(duì)照品溶液。精密稱(chēng)取金絲桃苷對(duì)照品，制取金絲桃苷對(duì)照品溶液。供試品溶液的制備：取山楂總黃酮提取物，制取作為供試液。陰性對(duì)照溶液制備：按山楂滴丸制備方法，除山楂總黃酮外，制取陰性對(duì)照溶液。薄層層析G365nm2－1圖2－1山楂葉黃酮薄層色譜圖比色法測(cè)定山楂葉總黃酮的含量實(shí)驗(yàn)儀器和藥品島津2401紫外分光光度計(jì)；容量瓶；秒表蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品：購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：0080-9705；乙醇、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁等均為分析純；聚酰胺，100目實(shí)驗(yàn)方法聚酰胺的處理取適量聚酰胺，裝柱，使用適量乙醇沖洗后，改用60％乙醇處理，即以60％乙醇充分洗滌后，烘干，備用。對(duì)照品溶液的配制105℃60％60％50mL，25mL60％（1mL0.4mg。供試品溶液的制備精密稱(chēng)取山楂總黃酮提取物0.02g，加入10mL60％乙醇分散溶解，加入0.3g0.3g100mL60％50mL瓶中，定容，作為供試品溶液。實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)選測(cè)定波長(zhǎng)選擇吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按下述的標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法顯色，用紫外-可見(jiàn)分300～600nm510nm2－2。0.350.3吸收度A吸收度A0.20.150.10.050400 450 500 550 600波長(zhǎng)（nm）2－2顯色劑用量的選擇0.412mg/mL5mL，5％NaNO210％Al（NO3）30.4、0.4mL；0.8、0.8mL；1.2、1.2mL；1.6、1.6mL；2.0、2.0mL顯色測(cè)定。其它按下述的標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法顯色。結(jié)果見(jiàn)表2-1表2-1加入量（mL）0.40.81.21.62.0吸收度0.3410.6220.76507640.768顯色后時(shí)間的選擇1mol/LNaOH2min、5min、10min15min、20min、25min、40min、60min、90min2-2表2-2時(shí)間（min）2510152025406090蘆丁0.3400.3190.3080.3030.3030.3020.3020.3010.301樣品0.3760.3530.3410.3380.3370.3370.3370.3360.335供試品的測(cè)定工藝10mL60％乙0.3g0.3g100mL60％乙醇溶解50mL25mL60％5mL，5％NaNO21.2mL，6min，10％Al（NO3）31.2mL，6min，1mol/LNaOH16mL，1.6mL，15min，510nm線性關(guān)系的考察精密吸取蘆丁對(duì)照品液(0.412mg/mL)0mL1mL2mL3mL4mL25mL60％5％NaNO26min，10％Al（NO3）31.2mL，6min，1mol/LNaOH16mL，1.6mL，15min，510nm3853x-0.0022(r=0.9999)0～2.06mg2－3。1吸收度0.8吸收度0.60.40.200 0.5 1 1.5 2 2.5標(biāo)準(zhǔn)品量（mg）圖2－3精密度試驗(yàn)6，RSD％0.505％2－3。表2－3序號(hào)吸收度平均值RSD（％）10.35320.352340.3530.3540.3540.50550.35760.355重復(fù)性試驗(yàn)6RSD％0.86％2－4。序號(hào)含量（％）平均值（％）RSD（％）序號(hào)含量（％）平均值（％）RSD（％）173.5272.13473.172.673.00.86573.8672.7加樣回收率試驗(yàn)915mg、20mg、25mg32－5。序號(hào)樣品含黃酮量標(biāo)準(zhǔn)品加入量測(cè)得量回收率序號(hào)樣品含黃酮量標(biāo)準(zhǔn)品加入量測(cè)得量回收率平均回收率RSD（mg）（mg）（mg）（％）（％）（％）114.7115.6030.1098.63214.9315.6030.4999.74315.0415.6030.3197.88420.1915.6035.7299.57520.5915.6036.23100.2598.771.03621.6215.6036.7897.16725.1715.6040.5298.39824.8615.6040.1497.94924.3915.6039.8999.35結(jié)論反相高效液相色譜法測(cè)定山楂葉黃酮中的有效成分含量-2儀器與試藥實(shí)驗(yàn)儀器和藥品日本島津LC－10AVP高效液相色譜儀；Metler十萬(wàn)分之一電子分析天平；超聲清洗儀。其他試劑為分析純色譜條件色譜柱為 intersil ODS－3 C18柱（5μm， 250×4.6mm）（（；1.0mL/min255nm；柱溫：25℃。abc時(shí)間t/min對(duì)照品溶液的制備25mL0.45μm線性關(guān)系的考察25mL1、2、3、4、5mL10mL，混勻。再經(jīng)微見(jiàn)圖2－5。峰面積積分值峰面積積分值00 0.2 0.4 0.6 0.8金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)品量（μg）圖2－5精密稱(chēng)取牡荊素-2”-O-6.85mg25mL容量瓶中，加12345mL10mL，2－6。峰面積積分值2000000峰面積積分值150000000 0.5 1 1.5標(biāo)準(zhǔn)品量（μg）圖2－6供試品溶液的制備7030mL10min70％丙酮溶液反復(fù)洗3～450mL，搖勻。方法學(xué)考察精密度試驗(yàn)取同一份山楂黃酮提取物的供試液連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣，測(cè)定金絲桃苷的峰面－6表2－6序號(hào)123456金絲桃苷峰面積206866320614862076218208759020861472091575牡荊素峰面積351672235045293529571354889835464453555673重復(fù)性試驗(yàn)精密稱(chēng)取9份同一批山楂黃酮提取物，其中15mg、20mg、25mg各3份，按3.5所述方法制備供試品溶液，采用HPLC分別檢測(cè)。數(shù)據(jù)見(jiàn)表2－7。序號(hào)取樣量金絲桃苷峰面積牡荊素峰面積金絲桃苷含量序號(hào)取樣量金絲桃苷峰面積牡荊素峰面積金絲桃苷含量牡荊素含量10.01592260765443300.55.15%11.39%20.01588261076443829.25.17%11.43%30.015772543804324465.08%11.23%40.01952325092552656.45.16%11.42%50.01997332945566006.55.16%11.42%60.01997336427571925.95.21%11.53%70.02399402808684773.65.15%11.39%80.02398408101693771.75.21%11.54%90.02398402415684105.55.14%11.39%穩(wěn)定性試驗(yàn)HPLC-2”-O-鼠李糖苷峰面2－8。時(shí)間（h）金絲桃苷峰面積牡荊素峰面積0322375時(shí)間（h）金絲桃苷峰面積牡荊素峰面積0322375548037.11318424541325.82327101556061.74321900545221.28326140554438.814324190552137.524322612548340.3回收率試驗(yàn)0.01g2－9。序 取樣量金絲桃苷含量牡荊素含量金絲桃苷加入量序 取樣量金絲桃苷含量牡荊素含量金絲桃苷加入量牡荊素加入量金絲桃苷測(cè)得量牡荊素測(cè)得量金絲桃苷牡荊素回號(hào) /g回收率/%收率/%/mg/mg/mg/mg/mg/mg1 0.010420.53771.19000.44240.97440.45040.9929101.8101.92 0.010410.53711.18870.44240.97440.44460.9793100.5100.53 0.010320.53231.17810.55301.2180.56791.2485102.7102.54 0.010390.53601.18630.55301.2180.56021.2326101.3101.25 0.010490.54121.19780.66361.46160.67491.4704101.7100.66 0.010540.54371.20330.66361.46160.67951.4981102.4102.5討論對(duì)于山楂葉總黃酮提取物中金絲桃苷和牡荊素-2”-O-鼠李糖苷的含量比色法測(cè)定山楂果中總?cè)扑崽崛∥锏暮繉?shí)驗(yàn)儀器和藥品島津2401紫外分光光度計(jì)；容量瓶；水浴鍋；溫度計(jì)；對(duì)照品溶液的配制1.5mg10mL容量瓶中加無(wú)水乙醇溶解，并定10mL，作為對(duì)照品溶液。供試品溶液的配制50mL容量瓶中加無(wú)水乙醇溶解，50mL，濾過(guò)，續(xù)濾液作為供試品溶液。測(cè)定波長(zhǎng)選擇經(jīng)紫外掃描在548nm有最大吸收，空白無(wú)干擾。顯色劑用量及條件優(yōu)選香草醛—冰醋酸液用量的優(yōu)選取熊果酸對(duì)照品(0.15mg/mL)2.0mL5份，805%香草0.25mL0.50mL0.75mL1.00mL2.0mL，60155.0mL搖勻，補(bǔ)加冰醋酸至25mL定容，在548nm處測(cè)定吸收值，結(jié)果見(jiàn)表2-10。表2-105％香草醛－冰醋酸用量（mL）0.250.500.751.001.25吸收值0.4370.4660.4690.4840.478結(jié)果表明5%香草醛-冰醋酸用量為1.00mL最佳。高氯酸的用量的優(yōu)選取熊果酸對(duì)照品(0.15mg/mL)2.0mL5805%香1.00mL1.0mL1.5mL2.0mL2.5mL3.0mL60155.0mL25mL定容，在548nm處測(cè)定吸收值，結(jié)果見(jiàn)表2－11。表2－11 高氯酸用量（mL）1.01.52.02.53.0吸收值0.3300.3910.4640.4880.485結(jié)果表明，高氯酸用量為2.5mL時(shí)最佳。顯色后水浴的溫度的考察2－12。表2－12 顯色水浴溫度（℃）5060708090100吸收值0.4580.4750.4950.5420.5630.6526060℃。樣品的測(cè)定方法最終的實(shí)驗(yàn)工藝為：精密吸取供試樣品液5%2.5mL，60155.0mL25mL定548nm處測(cè)定吸收值。按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算。線性關(guān)系的考察精密吸取熊果酸對(duì)照品無(wú)水乙醇液(0.15mg/mL)0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL2.5mL5%1.0mL，2.5mL，60155.0mL25mL548nm2-6。吸收度吸收度

0.145

0.282

0.425

0.562

0.697

0.8380 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5熊果酸的取樣量（mg）圖2-7精密度試驗(yàn)：52－13。表2－13序號(hào)吸收度平均值RSD％10.40720.41030.4050.4101.2240.41250.418重復(fù)性試驗(yàn)：6RSD1.932－14。表2－14序號(hào) 總?cè)扑岷?/p>

（％）

RSD％160.32160.3262.2359.8461.9561.2663.0穩(wěn)定性考察0.15mg/mL2.0mL按標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法操作。結(jié)果見(jiàn)表2-15。表2-15時(shí)間(min)吸收度平均值標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(%)00.59810.52620.4730.4930.06914.130.43940.43150.429100.425200.4210.4230.00410.98400.423600.418800.4061000.4031200.3910.3830.0256.51500.3621800.351回收率試驗(yàn)9769%2-16。序號(hào)樣品中相當(dāng)于熊加入熊果酸的測(cè)定熊果酸的量回收率序號(hào)樣品中相當(dāng)于熊加入熊果酸的測(cè)定熊果酸的量回收率平均回收RSD果酸含量（μg）量（μg）（μg）（％）率（％）（％）131373125619997.98230023125603997.183428673204312531255973631299.3999.4698.570.91530023125609098.82630853125618399.14結(jié)論測(cè)定方法。薄層色譜掃描法測(cè)定山楂三萜酸提取部位中熊果酸的含量描法測(cè)定熊果酸含量。試驗(yàn)儀器與藥品日本島津CS－9301型雙波長(zhǎng)薄層掃描儀G甲酸等均為分析純。對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取熊果酸對(duì)照品適量2.5mg，制作為對(duì)照品溶液。展開(kāi)劑的選擇正丁醇—氯仿—醋酸乙酯等展開(kāi)優(yōu)選，環(huán)已烷—氯仿—醋酸乙酯—甲酸效果最佳，顯色清晰，附近沒(méi)有干擾。提取條件的優(yōu)選342－17表2－17Tab.2-17thecontentsofursolicacidoffiveextractiontimes提取時(shí)間（h）12345熊果酸含量（％）35777掃描條件的選擇經(jīng)對(duì)顯色后分別在熊果酸對(duì)照品及供試品色譜斑點(diǎn)處和空白處掃描紫外吸收光譜，熊果酸顯色后色譜斑點(diǎn)最大吸收峰在530～540nm之間。比較后確定使用雙波長(zhǎng)掃描，掃描方法為反射式鋸齒掃描，波長(zhǎng)為λs＝535nm，λr＝700nm，狹縫1.2×1.2mm，SX=3，靈敏度中等。見(jiàn)圖2－7。圖2－8熊果酸的薄層掃描圖Fig2-8TheTLCchromatogramofursolicacid供試品的測(cè)定方法4小時(shí)，提取液回收乙醚至干，殘?jiān)檬兔眩?0～60℃）浸泡15l（2分鐘，傾去石油醚。殘?jiān)舆m量無(wú)水乙醇―氯仿（3：2）25ml勻，作為供試品溶液。（200010ul，2ulG10％硫1055～7（附錄ⅥB薄層掃描法方法學(xué)的考察線性關(guān)系的考察2.04.06.08.010.0μL對(duì)照品溶液(0.54mg/ml)，點(diǎn)于同一Gy=-477.31+1546.6x，r=0.9997(y為吸收度積分值；x為對(duì)照品量)，線性范圍為：1.08～5.40μg2－8。色譜峰面積色譜峰面積00 2 4 6熊果酸的量（μg）圖2－9熊果酸的線性關(guān)系穩(wěn)定性試驗(yàn)4μLG0.511.5234662－18。表2－18穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果Tab.2-18stability時(shí)間（h）吸收度積分值平均值RSD（％）0.52875.2412935.381.52918.0422865.322909.371.6632861.7942912.0762997.73精密度試驗(yàn)G52－19。52－19。序號(hào)（吸收度積分值）同板精密度不同板精密度179069.8379069.83278274.8880374.583序號(hào)（吸收度積分值）同板精密度不同板精密度179069.8379069.83278274.8880374.58375222.5774954.92477639.2575028.33574592.9074997.80平均值76959.8976885.09RSD％2.5383.422重現(xiàn)性試驗(yàn)52－20。序號(hào)熊果酸含量（％）平均含量（％）RSD％17.24序號(hào)熊果酸含量（％）平均含量（％）RSD％17.2427.35347.117.037.231.9257.3967.28加樣回收率試驗(yàn)(，9份，精密加入熊果酸對(duì)照品溶液(0.494mg/mL)適量，按樣品含量測(cè)定方法制備供試品溶液并測(cè)定熊果酸的含量，計(jì)算回收率，測(cè)得熊果酸的平均100.32%，RSD=2.14%2－21。已知量加入量測(cè)得量回收率平均回收率已知量加入量測(cè)得量回收率平均回收率序號(hào)（mg）（mg）（mg）（％）（％）13.5202.7176.19998.6023.4272.7176.176101.2033.4942.7176.277102.4043.5073.4586.85596.8053.5363.4587.004100.30100.322.1463.4403.4586.83698.2073.4274.1997.62099.8783.4664.1997.774102.6093.5074.1997.827102.87討論條件，均未能使熊果酸和齊墩果酸成功分離，包括甲醇－水(88：12)、甲醇－磷酸鹽緩沖液（9：1、24－乙腈(30：70)、甲醇－水－冰醋酸(33：67：0.2)等。本章結(jié)論的指標(biāo)性成分測(cè)定方法。3.C18為流255nm、柱溫：25℃的色譜條件，同時(shí)測(cè)定了山楂黃酮提取部位中的金絲桃苷和牡荊素-2”-O-第三章第三章有效部位的提取精制工藝研究第三章有效部位的提取精制工藝研究山楂葉中總黃酮的提取精制工藝研究試驗(yàn)儀器和藥品CrataeguspinnatifidaBgemajorN.E.Br的析純山楂葉藥材中總黃酮含量的測(cè)定。1000.5g，加入40mL60％乙醇，6030min3次，合并10mL600.3g0.3g100mL60％50mL2.2的測(cè)定。山楂葉總黃酮提取精制工藝的初步選擇少了有機(jī)溶劑的污染，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步開(kāi)展了工藝優(yōu)選研究。山楂總黃酮乙醇提取工藝影響因素的考察乙醇濃度對(duì)山楂總黃酮提取率的影響精密稱(chēng)取山楂葉粗粉（20目）25g共4份，分別加0，30，60，95％乙醇500mL1.5h中含有量相比，按公式（－－1提取率％＝提取物中黃酮量100％藥材中黃酮量

公式（3－1）表3－1乙醇濃度(%) 0 30 60 95提取率(%) 25.1 49.9 73.1 63.6提取時(shí)間對(duì)山楂總黃酮提取率的影響精密稱(chēng)取山楂葉粗粉（20目）25g560500mL，1h5，20，30，40，60min，濾過(guò)，殘?jiān)蒙倭咳苊较礈欤狭?，與藥材中含有量相比，按公式(3－1)3－2。表3－2時(shí)間(min) 5 20 30 40 提取率(%) 5.1 48.7 62.1 63.9 71.4。溶劑用量對(duì)山楂總黃酮提取率的影響（20目60500mL1h60min，濾過(guò)，殘?jiān)蒙倭咳苊较礈?，合并濾液，減壓干燥，得粗粉。按上述總黃酮測(cè)定方法操作，測(cè)定山楂總黃酮含量，與藥材中含有量相比，按公式（－－。表3－3溶劑用量(mL) 125 250 375 500提取率(%) 34.1 49.9 57.1 73.1提取溫度對(duì)山楂總黃酮提取率的影響（20目6040、60、80、10090min，濾過(guò)，殘?jiān)蒙倭咳?－4。表3－4溫度(℃)406080100提取率(%)32.562.768.775.3山楂總黃酮提取工藝優(yōu)化3－5U10（10×53）均勻設(shè)計(jì)表安排3－6。g（0目2得粗粉。按上述總黃酮測(cè)定方法操作，測(cè)定山楂總黃酮含量，用公式計(jì)算提取率。水平溶劑用量*乙醇濃度(%)水平溶劑用量*乙醇濃度(%)溫度(℃)加熱時(shí)間(min)1560404027655560397070804117585100513801001206157178199211023表3－6因素序號(hào)溶劑用量(倍)乙醇濃度(%)溫度(℃)加熱時(shí)間(min)提取率(%327708512055.839804010026.3411607010055513651008067.761575408039.171780706050.9819601006093.392170554069.5102375854090.6表3－6中數(shù)據(jù)用spss10.0y(選入變量的影響后)對(duì)y考慮剔除。最終確定方程如下：Y=9.022+4.659x1-0.868x2+0.181x3+0.700x4+0.0184x1x3-0.0427x1x4式中：y：提取率，x1：溶劑用量，x2：乙醇濃度，x3：提取溫度，x4：加熱時(shí)間，x1x3、x1x4：因素的交互作用。R＝0.9975，S＝2.585，F(xiàn)＝98.953，P<0.00155，方程有顯著意義。（轉(zhuǎn)換公式如下：

i）的liilbliil

公式（3－2）i iliixilyy3－7表3－7因素x1x2x3x4x1x3x1x4標(biāo)準(zhǔn)偏回歸系數(shù)1.340-0.3070.1930.9910.521-0.360有提取率高、生產(chǎn)成本低的優(yōu)點(diǎn)，更適合工業(yè)生產(chǎn)。圖3－1樹(shù)脂吸附性能的考察樹(shù)脂的預(yù)處理大孔吸附樹(shù)脂（40～60目）48h，裝柱。254nm再用蒸餾水洗至無(wú)醇味，備用。裝柱0.2g餾水浸泡，備用。D101型大孔吸附樹(shù)脂吸附率和解吸率的比較（72.4％）200mL，放入恒溫（30℃）18h，充分吸附后，濾過(guò)。測(cè)定溶液中剩余山楂總黃酮含量，按公式（3-3）計(jì)算：吸附量＝溶液體積吸附前溶液濃度－吸附后溶液濃度樹(shù)脂重量（干）

公式（3-3）9mm70測(cè)定解吸液中總黃酮含量。按公式（3-4）3－8。解吸百分率＝洗脫液的平衡濃度洗脫液的體積吸附量樹(shù)脂重量（干）

公式（3-4）表3－8不同型號(hào)大孔樹(shù)脂的吸附量和解吸率Tab.3-8Absorptionanddesorptionofdifferenttypemacroporeousresins型號(hào) D-101 D-101A D-101C吸附量(mg/g) 256.5 231.4 280.2解吸率(%) 95.4 98.7 94.8由表3－8D-101CD-101A濃度對(duì)吸附的影響（吸附等溫線）0.5g40mL不同濃度的0.8mL，在表面皿上水浴蒸去溶劑，按山楂總黃酮含量測(cè)定方法測(cè)定含量。按公式（3-3）計(jì)算吸附量。以平衡濃度為橫坐標(biāo)，吸附量為縱坐標(biāo)，得到吸附等溫線，見(jiàn)圖3－2。吸附量(mg/g)吸附量(mg/g)00 5 10 15平衡濃度(mg/ml)圖3－23－2Brunauer－5）表示：qqbc1bc

公式（3－5）q（/b為吸附平衡常數(shù)；q（/；C為山楂總黃酮的平衡濃度。上式可改成：c1q

1q

公式（3－6）c~c以q 作圖，可得一直線，由直線的斜率可得飽和吸附量q為687mg/g。溫度對(duì)吸附的影響0.5g540mL濃度5mg/mL24h，（3－3）計(jì)算吸附量。結(jié)果見(jiàn)圖3－3。300吸附量(mg/g)吸附量(mg/g)2001501005000

20 40 60 80溫度(℃)圖3－33.1.6.6鹽離子對(duì)吸附的影響0.5g105mg/mL40mLNaClKCl0.5，1.0，1.5，2.0，2.5mol/L（30℃）24h1.6.43－4吸附量(mg/g)400吸附量(mg/g)NaClKCl300NaClKCl20010000 1 2 3鹽濃度(mol/L)圖3－43.1.6.7山楂總黃酮的吸附曲線6BV/h2mg/mL的山楂總5mL3－5。濃度(mg/mL)2濃度(mg/mL)100 100 200 300 400體積(mL)圖3－53.1.6.8洗脫液的考察0.5g5mg/mL20mL30％、50％、70％、95洗脫，作圖3－6。濃度(μ濃度(μg/mL)30% 50%30% 50%70%90%00 10 20 30體積(ml)圖3－63.1.6.9洗脫劑流速的考察0.5g5mg/mL20mL7，14，21，35BV/h的流速洗脫，以洗脫液的體積為橫坐標(biāo)，洗脫液的濃度為縱坐標(biāo)作圖3－7。7BV/h 14BV/h21BV/h35BV/h7BV/h 14BV/h21BV/h35BV/h濃度(μg/mL)100050000 5 10 15 20洗脫液體積(mL)圖3－73.1.6.10大孔吸附樹(shù)脂吸附純化山楂總黃酮的工藝1.0g處理過(guò)的樹(shù)脂1mL1g10mL，將上述水溶液6BV/h12BV14BV/h的流速洗去雜15BV70％乙醇用同一流速洗脫。工藝的驗(yàn)證g701mL1g6BV/h12BV的水14BV/h15BV7065％以上。討論60。山楂果中總?cè)扑岵课惶崛」に嚨难芯?0提取工藝優(yōu)選醇提取條件的確定3－9。表3－9乙醇濃度（％）提取時(shí)間（h）乙醇用量（倍）16041527062038082550g，加入設(shè)定濃度乙醇回流提取設(shè)定時(shí)量取適量稠膏真空干燥，精密稱(chēng)定，按含量測(cè)定方法測(cè)定計(jì)算提取率作為指標(biāo)。3－10。三萜酸類(lèi)提取率＝干膏出膏率×總?cè)扑岷勘?－10序號(hào)ABCD結(jié)果111112.65212222.58313331.71421232.08522312.80623122.44731322.61832131.62933212.16Ⅰ6.947.346.717.61Ⅱ7.327.006.827.63Ⅲ6.396.317.125.41R0.310.340.140.74平方和142.58142.69142.23145.40s0.14580.18360.03001.0854變差來(lái)源離差平方和自由度均方F值P變差來(lái)源離差平方和自由度均方F值P值A(chǔ)0.145820.07294.855p<0.01B0.183620.09186.116p<0.01C0.030020.01501D1.085420.542736.154p<0.01誤差0.030020.0150總和1.444880.7224酸濃度的確定200g，2873222NaOH2最后用適量水沖洗，真空干燥，即得總?cè)扑崽崛∥?，?jiàn)表3－12。表3－12編號(hào)硫酸濃度（％）收率（％）總?cè)扑岷浚ǎィ┤扑崃刻崛÷?%)138.1342.754266.6483.168394.3572.451堿濃度的確定200g，87322，2NaOH2最后用適量水沖洗，3－13。表3－13編號(hào)堿液濃度（％）收率（％）總?cè)扑岷浚ǎィ┤扑崃刻崛÷?%)115.4462.484234.5582.61353.9592.301提取工藝的驗(yàn)證28722，2NaOH23－14。表3－14批次收率（％）總?cè)扑岷浚ǎィ┤扑崃刻崛÷?%)熊果酸含量（％）14.6572.6227.1524.5582.617.0934.8542.5927.21討論提取率高、成本低、無(wú)有機(jī)溶劑污染等的優(yōu)點(diǎn)。本章結(jié)論通過(guò)以上試驗(yàn)確定了山楂葉中黃酮類(lèi)的提取精制工藝和山楂果中三萜酸類(lèi)的提取精制工藝。具體工藝如下：g0L70℃40min，11.5L60%40min，合并過(guò)濾1mL6BV/h12BV14BV/h15BV70％乙醇用同一流速洗脫。洗脫液真空干燥，得黃褐色粉末，即得總黃酮提取部位。70％2871.1g/mL26％90℃2，30mL23％NaOH2第四章第四章制劑處方前的研究第四章制劑處方前的研究中藥劑型的研究是一項(xiàng)系統(tǒng)工程，就制劑學(xué)而言，制劑處方前研究是在中藥經(jīng)過(guò)提取、精制等工藝后，對(duì)半成品的物理化學(xué)性質(zhì)、與輔料的配伍變化以及體外溶出特性等方面的研究，是中藥劑型研究前一個(gè)非常重要的環(huán)節(jié)具有重要意義。材料和儀器s－40：南4000600010000、單硬脂酸酯：北京化學(xué)試劑公司方法與結(jié)果山楂黃酮提取物和山楂三萜酸提取物表觀溶解度測(cè)定930.1mol/LpH6.810mL，置水浴0.8μm減4介質(zhì)時(shí)間(h)黃酮（μg/mL介質(zhì)時(shí)間(h)黃酮（μg/mL）三萜酸（μg/mL）24501.7192.3水48527.9207.572537.8212.324432.762.70.1mol/L鹽酸48490.275.772485.374.724508.7201.1pH6.8緩沖溶液48530.6212.872529.9209.8粉體學(xué)基本性質(zhì)的測(cè)定粒子形態(tài)取樣品顯微鏡照相，見(jiàn)圖4－1。abcd圖4-1粒子形態(tài)圖粒度分布取樣品適量，均勻分散在載玻片上，滴少量石蠟，使沒(méi)有重疊粒子，加蓋玻片，驅(qū)除氣泡，測(cè)定其定向徑，見(jiàn)圖4-2。0.4分布頻率(%)分布頻率(%)0.20.105~10 11~16 17~22 23~27 28~31 >32粒徑范圍(μm)0.35分布頻率(%)分布頻率(%)0.250.20.150.10.0506~1213~1920~2627~3334~4041~47 >48粒度范圍(μm)圖4-2堆密度的測(cè)定10mL10cm1054－2。休止角的測(cè)定采用固定圓錐底法測(cè)定。取樣品適量，使其通過(guò)玻璃漏斗中流下，傾入培rH，由公式測(cè)定6次，取平均值，見(jiàn)表4－2。tgaHr表4－2Tab.4-2Micrometiticpropertiesofsamples性質(zhì)黃酮三萜酸n平均粒徑(μm)(g/cm3)16.081.825±0.2126.331.581±0.285休止角56.5±2.1363.2±1.946指標(biāo)性成分化學(xué)穩(wěn)定性考察光照試驗(yàn)3600Lx計(jì)算相對(duì)4－3。表4－3時(shí)間(d) 黃酮（%） 三萜酸0 100.0 100.01 99.4 99.93 99.4 100.25 98.9 98.710 99.2 99.5溫度影響試驗(yàn)恒溫干燥箱中4－4表4－4溫度溫度(℃)Time(d)黃酮（%）三萜酸(%)0100.0100.0199.499.1403102.499.3598.899.81097.2101.2199.4100.26035100.498.999.899.11098.298.0199.799.3803598.698.199.498.41099.098.7濕度影響試驗(yàn)0.3～0.4mm75（NaCl、25℃計(jì)算相對(duì)百分含量，4－5。表4－5時(shí)間時(shí)間(d)75%黃酮（%）90%70%三萜酸(%)90%0100.0100.0100.0100.01101.298.498.799.5399.799.298.4101.2598.9100.199.999.61099.298.899.298.9提取物吸濕平衡曲線的測(cè)定d0.90.80.7總黃酮吸濕量總黃酮吸濕量(%)0.50.40.30.20.100.3 0.45 0.6 0.75 0.9 1相對(duì)濕度(%)圖4－34.2.3.5提取物與輔料的相互作用peg4000、peg6000、peg10000、泊洛沙姆、s40Rf藥物在基質(zhì)中的分散程度考察本文采用差示掃描量熱法考察藥物的分散狀態(tài)。測(cè)定條件：參比物，樣品約，空氣，升溫速率，紙速，掃描溫度自室溫，結(jié)果見(jiàn)圖4－4。圖4－435％以?xún)?nèi)比較合適，能夠形成分散較好的分散體，起提高生物利用度。4.3討論0.1mol/LHCl顯微照片顯示，總黃酮提取物、總?cè)扑崽崛∥锪Ｗ泳鶠椴灰?guī)則形狀，其中黃酮提取物粒子形狀規(guī)則，休止角較小，粉體流動(dòng)性較好。化學(xué)穩(wěn)定性初步考察結(jié)果表明，總黃酮提取物、總?cè)扑崽崛∥飳?duì)光、熱、濕穩(wěn)定?？梢赃M(jìn)一步進(jìn)行制劑工作。第五章第五章滴丸制備工藝的研究第五章滴丸制備工藝的研究2000定的方法測(cè)定試驗(yàn)樣品的溶散時(shí)限；并任取20粒稱(chēng)重，求出變異系數(shù)。試驗(yàn)儀器和藥品山楂葉總黃酮提取物，山楂總?cè)扑崽崛∥铮鹤灾?；泊洛沙姆，s－40聚乙二醇基質(zhì)的初步優(yōu)選13400060001000010％2％10～12℃，10/分的滴速滴制，濾除冷卻劑，-15℃～-20℃24h5－1。基質(zhì)丸重變異系數(shù)（％）溶散時(shí)限（min）基質(zhì)丸重變異系數(shù)（％）溶散時(shí)限（min）外觀質(zhì)量Peg40004.325.21外觀不圓Peg60003.455.64圓整度較好Peg100004.636.63外觀不圓滴丸的處方設(shè)計(jì)因素水平設(shè)計(jì)50.6mm，10～12℃，進(jìn)行滴丸的5－2。表5－2 水平提取物比例（％）硬脂酸（％）泊洛沙姆18812025225510330815數(shù)據(jù)處理方式采用多指標(biāo)全概率評(píng)分法，對(duì)結(jié)果進(jìn)行處理，用于正交表的計(jì)算。因本試驗(yàn)中丸重差異和溶散時(shí)限重要程度相同，為方便起見(jiàn)，可按下式計(jì)算。P(Bi)=P(Bi|A1)+PBi|A2) （i=1，2，…，n）正交試驗(yàn)結(jié)