2021藥學(xué)考研配套生物化學(xué)考研真題與解析

2021藥學(xué)考研配套生物化學(xué)考研真題與解析大題問答題解析1．假定某蛋白相對(duì)分子質(zhì)量為180KDa，其一級(jí)結(jié)構(gòu)可能是直線式的也可能是閉環(huán)式的。請(qǐng)分析是否有可能的簡(jiǎn)單的合理方法加以鑒別？[中山大學(xué)2009研]答：可以用Sanger反應(yīng)或Edman反應(yīng)對(duì)蛋白質(zhì)的N末端氨基酸進(jìn)行測(cè)定。Sanger反應(yīng)中，F(xiàn)DNB可以與肽鏈N末端氨基酸的α-氨基反應(yīng)生成黃色的DNP-氨基酸。經(jīng)Sanger反應(yīng)若該蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)是直鏈?zhǔn)降模瑒t可產(chǎn)生黃色的反應(yīng)；若該蛋白是閉環(huán)式的，由于N末端沒有α-氨基，則不能出現(xiàn)黃色的反應(yīng)。而Edman反應(yīng)中，肽鏈N末端氨基酸的α-氨基可與苯異硫氰酸酯反應(yīng)生成PTH-氨基酸，用三氟乙酸處理釋放出PTH-氨基酸，再用有機(jī)溶劑萃取出來，通過色譜分析可以鑒定出PTH-氨基酸。經(jīng)Edman反應(yīng)后，若能測(cè)出N末端氨基酸，則該蛋白為直鏈?zhǔn)?；若測(cè)不出，則該蛋白為閉環(huán)式。另外，理論上講，如果知道序列，可以找一種合適的蛋白酶切斷某一位點(diǎn)，再進(jìn)行電泳，若該蛋白是閉環(huán)式，則電泳結(jié)果只產(chǎn)生一條帶，且大小不變；若是直鏈?zhǔn)剑瑒t會(huì)產(chǎn)生兩條帶，分子量加起來正好180KDa?？s寫中文名稱縮寫應(yīng)用HPLC高效液相層折氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)等的分離純化FPLC快速蛋白質(zhì)液相層析蛋白質(zhì)、多肽及多核苷酸的分離純化SDSSDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量ELISA酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定測(cè)定抗原或抗體RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增cDNAHIC疏水層析利用蛋白質(zhì)表面的非極性基團(tuán)和介質(zhì)上的非極性基團(tuán)間的疏水作用來分離純化蛋白質(zhì)IEF等電聚焦測(cè)定蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)2．試寫出下列生化名詞縮寫的中文名稱以及它們?cè)谏锘瘜W(xué)中的應(yīng)用。（1）HPLC（2）FPLC（3）SDS（4）ELISA（5）RT-PCR（6）HIC（7）IEF。[南京大學(xué)2008研]答：如表1-1所示：表1-13．某一蛋白純化后，凝膠過濾層析顯示其分子量為300000。若在6mol/L鹽酸胍存在條件下對(duì)該蛋白進(jìn)行凝膠過濾層析，只獲得一分子量為50000的蛋白峰。當(dāng)6mol/L鹽酸胍和10mmol/Lβ-巰基乙醇同時(shí)存在時(shí)，凝膠過濾層析結(jié)果顯示分子量為17000和33000的兩個(gè)蛋白峰。請(qǐng)分析該蛋白的結(jié)構(gòu)。[南開大學(xué)2008研]答：該蛋白是由6個(gè)單體組成的多聚體，每個(gè)單體又由兩個(gè)亞基靠二硫鍵連接起來。4．有一個(gè)五肽，加酸水解得Leu、Ala、Tyr利Lys；用羧肽酶水解得酪氨酸；用胰蛋白酶水解得三組分：（1）Lys、Tyr；（2）Tyr；（3）Lys、Leu、Ala；用丹磺酰氯處理，再用酸水解得賴氨酸的熒光衍生物。試說明此肽的氨基酸序列。[北京師范大學(xué)2005研]答：（1）加酸水解得Leu、Tyr、Lys、Ala，說明此五肽由Leu、Tyr、Lys、Ala組成。（2）用羧肽酶水解得Tyr，說明C端殘基為Tyr。（3）用胰蛋白酶水解得三組分Lys、Tyr；Tyr；Lys、Leu、Ala。因?yàn)橐鹊鞍酌笇Ｒ凰釲ys和Arg羧酸形成的肽鍵，水解得三組分，說明此五肽中含有兩個(gè)Lys殘基，則其可能的序列為L(zhǎng)eu-Ala-Lys-Lys-Tyr和Ala-Leu-Lys-Lys-Tyr。（4）丹磺酰氯可用于測(cè)定肽鏈的氨基末端，它能專一地與鏈N-端α-氨基反應(yīng)生成丹磺酰-肽，丹磺酰-肽水解生成的丹磺酰-氨基酸具有很強(qiáng)的熒光，用丹磺酰氯處理，再用酸水解得賴氨酸的熒光衍生物，說明肽鏈N端為L(zhǎng)eu。因此，此肽的氨基酸序列Leu-Ala-Lys-Lys-Tyr。5．在一個(gè)篩選程序中探測(cè)到一個(gè)遷移率異常的Hb。胰蛋白酶消化后的指紋分析顯示在β鏈內(nèi)發(fā)生了一個(gè)氨基酸的取代：正常的氨基端（胰蛋白酶酶切產(chǎn)物，其氨基端第一殘基是Val）八肽（Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-Glu-Lys）不見了，代之以一個(gè)新的六肽。問（1）哪些氨基酸取代符合上述觀察到的現(xiàn)象？（2）給出部分密碼表如表1-2所示，編碼上述正常（β鏈氨基端）八肽的DNA序列為GTGCACCTGACTCCTGAGGAGAAG，此序列中哪些單堿基突變可造成這樣的氨基酸取代？（3）這個(gè)（突變的）Hb與HbA和HbS比較（pH8），（如朝負(fù)極泳動(dòng)）三者的電泳遷移率有什么區(qū)別？[上海交通大學(xué)2006研]表1-2UCACGValAlaGluGlyAGValAlaGluGlyGAIleThrLysArgAAIleThrLysArgG答：（1）主要有以下氨基酸取代：Glu6變?yōu)锳rg，Lys；His2變?yōu)锳rg，Lys，因胰蛋白酶切割羰基端為Arg或Lys的肽鏈。（2）可造成這樣氨基酸取代的單堿基突變是G16變?yōu)锳，使Glu變?yōu)長(zhǎng)ys。因?yàn)槠渌麊螇A基突變不會(huì)導(dǎo)致氨基酸的改變而發(fā)生取代。（3）這個(gè)（突變的）Hb與HbA和HbS的電泳遷移率：HbX＞HbS＞HbA，根據(jù)肽鏈帶電情況。HbA是正常成人血紅蛋白，HbS是鐮刀形紅細(xì)胞貧血患者的異常血紅蛋白，其β鏈節(jié)6位谷氨酸為纈氨酸取代。HbX中Glu6變?yōu)锳rg，Lys；His2變?yōu)锳rg，Lys，帶負(fù)電的氨基酸變?yōu)閹д姾傻陌被?，而HbS中Glu變?yōu)閂al，帶負(fù)電的氨基酸變?yōu)椴粠щ姾傻陌被?。由于電泳朝?fù)極泳動(dòng)，所以電泳遷移率：HbX＞HbS＞HbA。6．今有以下四種蛋白質(zhì)的混合物：①分子量50,000，pI＝10；②分子量72,000，pI＝3.5；③分子量31,000，pI＝7；④分子量12,000，pI＝5，用中性鹽梯度洗脫時(shí)，若不考慮其他因素：（1）它們流過DEAE-纖維素陰離子交換柱；（2）流經(jīng)SephadexG-100凝膠過濾柱時(shí)，這些蛋白質(zhì)的洗脫順序如何？[四川大學(xué)2006研]答：（1）用DEAE-纖維素陰離子交換柱分離蛋白質(zhì)，在一定的pH條件下，等電點(diǎn)pI＞pH的蛋白質(zhì)帶正電，不能與陰離子交換劑結(jié)合；等電點(diǎn)pI＜pH的蛋白質(zhì)帶負(fù)電，能與陰離子交換劑結(jié)合，一般pI越大的蛋白質(zhì)與陰離子交換劑結(jié)合力越弱，首先被洗脫下來。比較4種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)pI：①＞③＞④＞②。所以，當(dāng)它們流過DEAE-纖維素陰離子交換柱，洗脫順序?yàn)棰佟邸堋凇＃?）凝膠過濾是利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用，根據(jù)被分離物質(zhì)的分子大小不同來進(jìn)行分離。小分子物質(zhì)能進(jìn)入其內(nèi)部，流下時(shí)路程較長(zhǎng)，而大分子物質(zhì)卻被排除在外部，下來的路程短，因此大分子先流出來，小分子后流出來。比較這4種蛋白質(zhì)的分子量：②＞③＞①＞④。所以，流經(jīng)SephadexG-100凝膠過濾柱時(shí)，洗脫順序?yàn)棰凇邸佟堋?．維持蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的因素有哪些？根據(jù)這些因素解釋可逆變性和不可逆變性？[東北師范大學(xué)2008研]答：（1）蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)包括一級(jí)結(jié)構(gòu)、二級(jí)結(jié)構(gòu)、三級(jí)結(jié)構(gòu)和四級(jí)結(jié)構(gòu)，其中，維持一級(jí)結(jié)構(gòu)的主要因素是肽鍵、二硫鍵；維持二級(jí)結(jié)構(gòu)的主要因素是氫鍵；維持三級(jí)結(jié)構(gòu)的主要因素是疏水鍵、離子鍵、氫鍵和范德華力等；維持四級(jí)結(jié)構(gòu)的主要因素是疏水作用，其次是氫鍵和離子鍵。（2）蛋白質(zhì)變性分為可逆變性和不可逆變性兩類：有的蛋白質(zhì)變性后如設(shè)法將變性劑除去，該變性蛋白尚能恢復(fù)其天然構(gòu)象和生物學(xué)活性，這一現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)的復(fù)性，又稱可逆變性，可逆變性一般只涉及蛋白質(zhì)分子的四級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)的變化，即疏水鍵、離子鍵、氫鍵和范德華力等被破壞；大多數(shù)蛋白質(zhì)的可逆變性條件可能很復(fù)雜，許多蛋白質(zhì)變性后空間結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重而不能復(fù)性，此種情況稱為不可逆變性，不可逆變性時(shí)二級(jí)結(jié)構(gòu)也發(fā)生了變化，即氫鍵斷裂，破壞了肽鍵特定的排列，內(nèi)部的一些非極性基團(tuán)暴露到了分子表面，促進(jìn)了蛋白質(zhì)分子之間的相互結(jié)合而發(fā)生不可逆變性。8．蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系？[哈爾濱工業(yè)大學(xué)2007研]答：（1）蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。①一級(jí)結(jié)構(gòu)是空間構(gòu)象的基礎(chǔ)。例如，RNase是由124氨基酸殘基組成的單肽鏈，分子中8個(gè)Cys的—SH構(gòu)成4對(duì)二硫鍵，形成具有一定空間構(gòu)象的蛋白質(zhì)分子。在蛋白質(zhì)變性劑和一些還原劑存在下，酶分子中的二硫鍵全部被還原，酶的空間結(jié)構(gòu)破壞，肽鏈完全伸展，酶的催化活性完全喪失。當(dāng)用透析的方法除去變性劑和巰基乙醇后，發(fā)現(xiàn)酶大部分活性恢復(fù)，所有的二硫鍵準(zhǔn)確無誤地恢復(fù)原來狀態(tài)。若用其他的方法改變分子中二硫鍵的配對(duì)方式，酶完全喪失活性。這個(gè)實(shí)驗(yàn)表明，蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)決定它的空間結(jié)構(gòu)，而特定的空間結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)具有生物活性的保證。②蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)決定其高級(jí)結(jié)構(gòu)，因此最終決定了蛋白質(zhì)的功能。例如，84個(gè)氨基酸的胰島素原，胰島素原也沒活性，在包裝分泌時(shí)，A、B鏈之間的33個(gè)氨基酸殘基被切除，才形成具有活性的胰島素。③功能相似的蛋白質(zhì)往往能顯示它們?cè)谶M(jìn)化上的親緣關(guān)系：比較不同來源的細(xì)胞色素C發(fā)現(xiàn)，與功能密切相關(guān)的氨基酸殘基是高度保守的，這說明不同種屬具有同一功能的蛋白質(zhì)，在進(jìn)化上來自相同的祖先，但存在種屬差異。不同種屬間的同源蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)上相對(duì)應(yīng)的氨基酸差別越大，其親緣關(guān)系愈遠(yuǎn)，反之，其親緣關(guān)系愈近。④許多疾病都是由于相關(guān)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)異常引起的。基因突變導(dǎo)致蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)改變而產(chǎn)生的遺傳病。稱之為分子病。如鐮刀型貧血癥是由于血紅蛋白的β-亞基上的第六位氨基酸由谷氨酸變成了纈氨酸，導(dǎo)致血紅蛋白的結(jié)構(gòu)和功能的改變，其運(yùn)輸氧氣的能力大大地降低，并且紅細(xì)胞呈鐮刀狀。所以，蛋白質(zhì)一定的結(jié)構(gòu)執(zhí)行一定的功能。功能不同的蛋白質(zhì)總是有著不同的序列；比較種屬來源不同而功能相同的蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)，可能有某些差異，但與功能相關(guān)的結(jié)構(gòu)也總是相同的。若一級(jí)結(jié)構(gòu)變化，蛋白質(zhì)的功能可能發(fā)生很大的變化。（2）蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。各種蛋白質(zhì)都有特定的空間構(gòu)象，而特定的空間構(gòu)象又與它們特定的生物學(xué)功能相適應(yīng)，蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能是高度統(tǒng)一的。例如，Hb與O2結(jié)合后，Hb的構(gòu)象發(fā)生變化，這類變化稱為變構(gòu)效應(yīng)，即通過構(gòu)象變化影響蛋白質(zhì)的功能。像血紅蛋白這種具有變構(gòu)效應(yīng)的蛋白質(zhì)稱為變構(gòu)蛋白。血紅蛋白的這種變構(gòu)效應(yīng)能更有效地行使其運(yùn)氧的生物學(xué)功能。9．蛋白質(zhì)電泳基本原理及影響電泳速度的主要因素。[山東大學(xué)2006研]答：（1）蛋白質(zhì)電泳基本原理。蛋白質(zhì)是一種兩性電解質(zhì)，它同時(shí)具有游離氨基和羧基。每種蛋白質(zhì)都有它自己的等電點(diǎn)。等電點(diǎn)的高低取決于蛋白質(zhì)的性質(zhì)，在等電點(diǎn)時(shí)，蛋白質(zhì)所帶的正負(fù)電荷相等。在pH大于等電點(diǎn)溶液中，羧基解離多，此時(shí)蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷，帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。反之，在pH小于等電點(diǎn)的溶液中，氨基解離多，此時(shí)蛋白質(zhì)帶正電荷，在電場(chǎng)中向負(fù)極移動(dòng)。這種帶電質(zhì)點(diǎn)在電場(chǎng)中向著帶異相電荷的電場(chǎng)移動(dòng)，稱為電泳。帶電質(zhì)點(diǎn)所以能在電場(chǎng)中移動(dòng)以及具有一定的移動(dòng)速度，取決于其本身所帶的電荷、電場(chǎng)強(qiáng)度、溶液的pH值、黏度以及電滲等因素。（2）影響電泳的因素。不同帶電質(zhì)點(diǎn)在同一電場(chǎng)中的遷移率（或泳動(dòng)度）不同，影響遷移率的因素有：①帶電質(zhì)點(diǎn)的性質(zhì)。顆粒所帶凈電荷的量，顆粒大小及形狀等。帶電荷越多，分子越小，泳動(dòng)速度越快。②電場(chǎng)強(qiáng)度。電場(chǎng)強(qiáng)度是單位厘米的電位差。電場(chǎng)強(qiáng)度越大，帶電質(zhì)點(diǎn)泳動(dòng)速度越快。反之亦然。③溶液中pH值。溶液的pH值決定了帶電質(zhì)點(diǎn)的解離程度，也決定了物質(zhì)所帶電荷的多少。對(duì)蛋白質(zhì)、氨基酸等兩性電解質(zhì)而言，pH值離等電點(diǎn)越遠(yuǎn)，顆粒所帶的電荷越多，電泳速度也越快。反之則越慢。蛋白質(zhì)在酸性溶液中易變性，在偏堿溶液中比較穩(wěn)定，所以蛋白質(zhì)電泳大多用pH8.2～8.8的巴比妥或硼酸緩沖液，在這種pH中，血清蛋白一般都帶負(fù)電荷。④溶液的離子強(qiáng)度。溶液的離子強(qiáng)度越高，顆粒泳動(dòng)速度越慢，反之越快。血清電泳一般最適宜離子強(qiáng)度在0.025～0.075之間。離子強(qiáng)度越低，緩沖液的電流下降，擴(kuò)散現(xiàn)象嚴(yán)重，使分辨力明顯降低。離子強(qiáng)度太高，將有大量的電流通過瓊脂板，由此而產(chǎn)生的熱量使板中水分大量蒸發(fā)，嚴(yán)重時(shí)可使瓊脂板斷裂而導(dǎo)致電泳中斷。溶液中離子強(qiáng)度與溶液的濃度成正比。⑤電滲作用。電滲是在電場(chǎng)中液體對(duì)于固體支持物的相對(duì)移動(dòng)。由于瓊脂中含有SO42－，帶負(fù)電荷，造成靜電感應(yīng)致使附近的水帶正電荷，而向負(fù)極移動(dòng)，所以電泳時(shí)有兩種力，即電泳力和電滲力。如果物質(zhì)原來帶正電荷，向負(fù)極移動(dòng)，則因電滲作用向負(fù)極移動(dòng)得更快。如果物質(zhì)向正極移動(dòng)，所帶電荷少，電泳力抵不過電滲力，則也向負(fù)極移動(dòng)，血清中的γ球蛋白就是如此。⑥吸附作用。即介質(zhì)對(duì)樣品的滯留作用。它導(dǎo)致了樣品的拖尾現(xiàn)象而降低了分辨率。紙的吸附作用最大，醋酸纖維膜的吸附作用較小或無。⑦電泳時(shí)間，電泳時(shí)間與遷移率成正比。10．自然界的生物多種多樣，因而蛋白質(zhì)的種類和功能也十分繁多，沒有蛋白質(zhì)也就沒有生命，試述蛋白質(zhì)的功能多樣性及其意義。[華東理工大學(xué)2007研]答：（1）構(gòu)造、更新、修補(bǔ)功能：蛋白質(zhì)是一切生命的物質(zhì)基礎(chǔ)，是肌體細(xì)胞的重要組成部分，細(xì)胞在代謝中蛋白質(zhì)的更新以及細(xì)胞分裂、個(gè)體成長(zhǎng)都必須要蛋白質(zhì)的供給和補(bǔ)充。各種因素造成細(xì)胞破損、組織創(chuàng)傷時(shí)，也需要蛋白質(zhì)作為修補(bǔ)的原料。（2）催化、調(diào)節(jié)功能：物質(zhì)代謝依靠生物催化酶。已知的二千多種酶的化學(xué)本質(zhì)都是蛋白質(zhì)。除酶以外，還需要一些調(diào)控物質(zhì)來控制各種代謝途徑的相互配合，使其成為一個(gè)完整的生命活動(dòng)過程。其中許多調(diào)控物質(zhì)，如胰島素、生長(zhǎng)素、胸腺素和多種促激素的化學(xué)本質(zhì)也是蛋白質(zhì)。（3）轉(zhuǎn)運(yùn)、儲(chǔ)存功能：體內(nèi)一些小分子物質(zhì)和疏水性物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)主要靠血液中特異的蛋白質(zhì)來轉(zhuǎn)運(yùn)的。肝臟中的鐵離子以鐵蛋白復(fù)合體的形式儲(chǔ)存。（4）運(yùn)動(dòng)、支持作用：生物體的一切活動(dòng)都伴有肌肉的收縮和舒張，都是由肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白等相互作用來完成。皮膚、骨骼和肌腱的膠原纖維主要含有膠原蛋白，它具有強(qiáng)烈的韌性，從而保證這些組織的功能。（5）免疫、保護(hù)功能：生物體的免疫功能與抗體有關(guān)，而抗體是一類特異的球蛋白，對(duì)細(xì)菌、病毒和異體蛋白有高度的識(shí)別能力，并與之結(jié)合使其失活，從而保護(hù)生物體的正常機(jī)能狀態(tài)。（6）生長(zhǎng)、繁殖功能：生物的生長(zhǎng)、繁殖、遺傳和變異都與核蛋白有關(guān)。核蛋白是核酸和蛋白質(zhì)組成的結(jié)合蛋白質(zhì)，由組蛋白和阻遏蛋白來控制調(diào)節(jié)。（7）載體、受體：存在于生物膜上起著轉(zhuǎn)運(yùn)物質(zhì)和傳遞信息的蛋白質(zhì)，載體將胞外物質(zhì)送入胞內(nèi)；受體將信息帶入胞內(nèi)。（8）氧化供能功能：體內(nèi)組織蛋白質(zhì)分解為氨基酸后，經(jīng)脫氨基作用生成α-酮酸，后者參加三羧酸循環(huán)氧化分解，釋放能量。11．今有以下四種蛋白質(zhì)的混合物：（A）相對(duì)分子質(zhì)量12000，pI10；（B）相對(duì)分子質(zhì)量62000，pI4；（C）相對(duì)分子質(zhì)量28000，pI7；（D）相對(duì)分子質(zhì)量9000，pI5。若不考慮其他因素，當(dāng)它們：（1）流過DEAE-纖維素陰離子交換柱，用緩沖液pH8.8和線性NaCl鹽梯度洗脫時(shí)；（2）流經(jīng)SephadexG-75凝膠過濾柱時(shí)，這些蛋白質(zhì)的洗脫順序如何？并簡(jiǎn)單說明原因。[華南農(nóng)業(yè)大學(xué)2009研]答：（1）在DEAE-纖維素陰離子交換柱層析中，蛋白質(zhì)有不同的pI，在同一pH下，各種蛋白質(zhì)所帶的電荷的種類和數(shù)量不同，因此與離子交換劑的吸附作用的強(qiáng)弱不同。帶負(fù)電荷少，吸附能力弱的先洗脫下來，帶負(fù)電荷多，吸附能力強(qiáng)的后洗脫下來，從而將蛋白質(zhì)混合物分開，據(jù)此分析可知四種蛋白質(zhì)的洗脫順序?yàn)椋海ˋ）、（C）、（D）、（B）。（2）在SephadexG-75凝膠過濾柱時(shí)，小顆粒（小分子質(zhì)量）進(jìn)入凝膠的孔內(nèi)擴(kuò)散，流動(dòng)速度慢，后洗脫；大顆粒（大分子量）不進(jìn)入凝膠的孔內(nèi)，滑動(dòng)速度快，先洗脫。據(jù)此分析可知四種蛋白質(zhì)的洗脫順序?yàn)椋海˙）、（C）、（A）、（D）。12．球蛋白的四個(gè)結(jié)構(gòu)層次。[中國科技大學(xué)2009研]答：球蛋白的四個(gè)結(jié)構(gòu)層次：（1）一級(jí)結(jié)構(gòu)，氨基酸序列，包含蛋白質(zhì)全部的交給信息，決定其他不同層次的結(jié)構(gòu)形式；（2）二級(jí)結(jié)構(gòu)，包括多肽鏈主鏈肽段的規(guī)則構(gòu)象及不規(guī)則構(gòu)象。α-螺旋含量高的蛋白質(zhì)，一般是緊密而穩(wěn)定的，不易變化，所以活性部位不會(huì)位于α-螺旋區(qū)域。含β-折疊多的蛋白質(zhì)，其構(gòu)象的緊密程度及穩(wěn)定性稍差一些，但它們的構(gòu)象容易變化，有利于發(fā)揮蛋白質(zhì)的生物功能；（3）超二級(jí)結(jié)構(gòu)，充當(dāng)三級(jí)結(jié)構(gòu)的建筑塊；（4）結(jié)構(gòu)域，每個(gè)結(jié)構(gòu)域都是緊密裝配的，但結(jié)構(gòu)域之間形成裂隙，以松散的單鏈相連；（5）三級(jí)結(jié)構(gòu)，對(duì)于單鏈蛋白質(zhì)，它就是分子本身的特征性立體結(jié)構(gòu)；對(duì)于多鏈蛋白中，它就是亞基的立體結(jié)構(gòu)；______（6）四級(jí)結(jié)構(gòu)，許多相同或不同的球狀亞基，以非共價(jià)鍵聚集在一起，構(gòu)成了高度有序的具有生物功能的寡聚體。13．比較蛋白質(zhì)α-螺旋中的氫鍵和DNA雙螺旋中的氫鍵，并指出氫鍵在穩(wěn)定這兩種結(jié)構(gòu)中的作用。[鄭州大學(xué)2007研]答：蛋白質(zhì)α-螺旋的穩(wěn)定性是靠鏈內(nèi)氫鍵維持的，是由每個(gè)氨基酸殘基的N—H于前面隔3個(gè)氨基酸的C＝O形成，肽鍵上所有的肽鏈都參與氫鍵的形成，故α-螺旋相當(dāng)穩(wěn)定。在DNA雙螺旋中：①穩(wěn)定雙螺旋的最重要因素是堿基堆積力；②堿基配對(duì)的氫鍵，GC含量越多，DNA雙螺旋越穩(wěn)定。在α-螺旋中，一個(gè)殘基上的羧基氧與旋轉(zhuǎn)一圈后的（該殘基后面）第四個(gè)殘基上的α-氨基中的氮形成氫鍵，這些在肽鏈骨架內(nèi)原子間形成的氫鍵大致平行于該螺旋的軸，氨基酸側(cè)鏈伸向骨架外，不參與螺旋內(nèi)的氫鍵形成。在雙鏈DNA中糖-磷酸骨架不形成氫鍵，相反在相對(duì)的兩條鏈中互補(bǔ)的堿基之間形成2個(gè)或3個(gè)氫鍵，氫鍵大致垂直于螺旋軸。在α-螺旋中，單獨(dú)的氫鍵是很弱的，但是這些鍵的合力穩(wěn)定了該螺旋結(jié)構(gòu)。尤其是在一個(gè)蛋白質(zhì)的疏水內(nèi)部，這里水不與氫競(jìng)爭(zhēng)成鍵。在DNA中形成氫鍵的主要作用是使每一條鏈能作為另一條鏈的模板，盡管互補(bǔ)堿基之間的氫鍵幫助穩(wěn)定螺旋結(jié)構(gòu)，但在疏水內(nèi)部堿基對(duì)之間的堆積對(duì)螺旋結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性的貢獻(xiàn)更大。在蛋白質(zhì)多肽鏈的α-螺旋中，多肽主鏈上的第n個(gè)殘基的羧基氧與沿螺旋指向的第n＋4個(gè)殘基的酰胺基的氫之間形成氫鍵,這些氫鍵大體上與螺旋軸平行。殘基的側(cè)鏈從主鏈中生出，不出現(xiàn)在螺旋之內(nèi)，不參與螺旋內(nèi)的氫鍵形成。在DNA的雙螺旋中，氫鍵的形成不涉及糖-磷酸骨架，氫鍵是在兩個(gè)反向平行的多核苷酸的堿基對(duì)之間形成的，每個(gè)堿基對(duì)可形成兩個(gè)或三個(gè)氫鍵，氫鍵大體上與螺旋軸垂直。14．試總結(jié)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離及純化的相關(guān)技術(shù)。[西北大學(xué)2004研]答：根據(jù)蛋白質(zhì)在溶液中的性質(zhì)分離純化蛋白質(zhì)的方法，包括：（1）根據(jù)蛋白質(zhì)分子大小不同的純化方法有：透析、超濾、密度梯度離心、凝膠過濾；（2）利用溶解度差別的純化方法：等電點(diǎn)沉淀、蛋白質(zhì)的鹽溶和鹽析、有機(jī)溶劑分級(jí)分離法；（3）根據(jù)蛋白質(zhì)所帶電荷不同的純化方法：薄膜電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、毛細(xì)管電泳、等電聚焦、層析聚焦、離子交換層析；（4）利用選擇性吸附的純化方法：羥基磷灰石層析、疏水作用層析；（5）利用對(duì)配體的特異性生物學(xué)親和力的純化方法：親和層析、免疫電泳；（6）高效液相層析和快速蛋白質(zhì)液相層析。15．試述蛋白質(zhì)分子構(gòu)象變化與其活力之間的關(guān)系。[暨南大學(xué)2011研]答：蛋白質(zhì)多種多樣的功能與各種蛋白質(zhì)特定的空間構(gòu)象密切相關(guān)，蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象是其功能活性的基礎(chǔ)，構(gòu)象發(fā)生變化，其功能活性也隨之改變。蛋白質(zhì)變性時(shí)，由于其空間構(gòu)象被破壞，故引