脈管通膠囊對血栓閉塞性脈管炎大鼠模型的治療作用

脈管通膠囊對血栓閉塞性脈管炎大鼠模型的治療作用

血栓形成性脈管炎（tao）是一種發(fā)育于年輕男性四肢遠端中小動脈炎的節(jié)段性、炎癥和梗死疾病的類型。臨床發(fā)現(xiàn)自制藥脈管通膠囊對TAO確有較好的療效,為了探討該藥作用機理,本文從體征變化、病理切片血栓分級、血液流變學及血漿TXB2、6-K-PGF1α等方面觀察了該膠囊對血栓閉塞性脈管炎大鼠模型的影響,并初步探討其作用機理?，F(xiàn)將結果報告如下。1材料和方法1.1材料表面1.1.1動物雄性SD大白鼠72只,7月齡,體重(302±17)g,由湖南中醫(yī)學院實驗動物中心提供。1.1.2試劑與儀器脈管通膠囊(由當歸、雞血藤、丹參、黃芪、赤芍、郁金、牡蠣、皂角刺等14味藥物組成,湖南中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院藥劑科制備,批號:980806,0.5g?/粒)、復方丹參片(廣東萬盛花城制藥廠生產,0.3g?/片)、月桂酸(上?；瘜W試劑采購供應站分裝廠提供)、ZT快速醫(yī)用膠(浙江興華醫(yī)療制品廠)、血栓素B2、6-酮-前列腺素F1α放免試劑盒(購自蘇州醫(yī)學院血栓研究所,批號:0723-9702)。1.2大鼠模型的制備72只大鼠隨機分為假手術組、病理模型組(簡稱模型組)、復方丹參片對照組(簡稱丹參片組)、脈管通膠囊低劑量組(簡稱脈通低組)、中劑量組(簡稱脈通中組)和高劑量組(簡稱脈通高組)共6組,每組12只。參照文獻方法制作大鼠TAO模型:氯銨酮100mg?/kg腹腔注射麻醉,游離股動脈,夾閉阻斷血流,假手術組注入0.2mL生理鹽水,其余大鼠注入0.2mL月桂酸,ZT快速醫(yī)用膠封閉針孔。造模3d后假手術組給予蒸餾水灌胃,丹參片組灌胃復方丹參片懸液,脈管通3劑量組灌胃脈管通膠囊懸液,復方丹參片組0.243g?/(kg·d),脈管通膠囊低、中、高劑量組分別為0.405g?/(kg·d)、0.81g?/(kg·d)、1.92g?/(kg·d),低劑量為臨床等效劑量。各組均按1mL?/200g體重劑量灌胃,連續(xù)30d。1.3指標檢測1.3.1病變程度及范圍觀察大鼠患肢皮膚溫度、顏色、動脈搏動、患肢腫脹程度、壞疽和木乃伊化的病變程度和范圍。參照王軍等采用的分級標準分級,Ⅰ級:病變局限于趾甲部;Ⅱ級:病變局限于趾部;Ⅲ級:病變局限于足爪部;Ⅳ級:病變局限于膝關節(jié)以下;Ⅴ級:病變發(fā)展到膝關節(jié)以上。1.3.2血栓分級標準取大鼠右下肢,10%福爾馬林液固定3d后用10%硝酸脫鈣,足趾、踝關節(jié)上、下及股部4個部位橫斷切片,HE染色,對血栓進行分級,0級:無血栓;Ⅰ級:1個血栓;Ⅱ級:2～3個血栓;Ⅲ級:4個以上血栓。1.3.3血液流變量檢查包括全血粘度、血漿比粘度、紅細胞壓積、紅細胞電泳時間,由湖南中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院協(xié)助測定。1.3.4血漿txb2、6-k-pgf1檢測放射免疫法測定。1.4統(tǒng)計方法計數(shù)等級資料采用秩和檢驗,計量資料采用單因素方差分析處理。2結果2.1兒童性動物手術后反應大鼠經股動脈注入月桂酸造模后,約5min后開始出現(xiàn)患肢足爪部變蒼白繼而青紫,皮膚溫度降低,動脈搏動減弱或消失,次日受累的足趾變黑,并逐漸向上發(fā)展,形成壞疽和木乃伊化。少數(shù)動物手術后表現(xiàn)為患肢疼痛、跛行和曳行現(xiàn)象。2周內多數(shù)大鼠出現(xiàn)患側壞疽部分脫落,模型組的病變最嚴重,脈通中、高劑量組的病變最輕,與丹參片組比較有顯著性差異(P<0.05),而假手術組未出現(xiàn)病變表現(xiàn),各組與假手術組比較均具有非常顯著性差異(P<0.01),見表1。2.2血栓形成狀態(tài)假手術組手術區(qū)組織均有輕微粘連,有輕度炎細胞浸潤,以淋巴細胞為主,但股動脈均呈通暢狀態(tài),內膜光滑,血管內無血栓形成;經造模后TAO模型大鼠股動脈內均有不同程度的血栓形成,脈通3個劑量組與丹參片組大鼠的血栓數(shù)量均明顯減少,程度顯著降低,其中脈通中、高劑量組未出現(xiàn)血栓機化現(xiàn)象,血栓再通次數(shù)增多,結果見表2。2.3各組小鼠血清胞技術指標比較,表現(xiàn)為假手術組與模型組相比,部分血液流變值差異有顯著性(P<0.05,P<0.01);實驗組與模型組比較,全血比粘度、血漿比粘度明顯降低(P<0.05),但紅細胞壓積、紅細胞電泳時間變化不明顯;脈通高組與丹參片組比較,全血比粘度低切值明顯降低,差異具有顯著性意義(P<0.05),結果見表3。2.4各組患者6-k-pgf1、txb2、t/k比值對模型組與假手術組比較,血漿6-K-PGF1α含量降低,TXB2、T/K比值明顯升高(P<0.01);脈通各劑量組與模型組相比,6-K-PGF1α含量明顯升高,TXB2、T/K比值降低(P<0.01),與丹參片組比較,T/K比值降低(P<0.01);丹參片組與模型組比較,T/K比值降低(P<0.01),結果見表4。3脈管通膠囊對患者血流變性指標的影響血栓閉塞性脈管炎屬中醫(yī)“脫疽”范疇。脈管通膠囊是針對本病經絡阻隔、氣血阻滯的基本病理,在《醫(yī)林方》當歸活血湯基礎上加減組方而成,可通血脈之瘀滯,促進血栓機化、吸收。由于血液處于高凝狀態(tài),血管內血栓形成,造成微循環(huán)障礙是血栓閉塞性脈管炎發(fā)病的基本病理特點。本實驗研究也發(fā)現(xiàn)造模后均有不同程度的血栓形成,而經脈管通膠囊治療后血栓數(shù)量減少,程度降低,中、高劑量組未出現(xiàn)血栓機化現(xiàn)象,血栓再通次數(shù)增多,表明以活血化瘀通脈之法對本病確有療效。研究結果提示脈管通膠囊對血液流變指標中全血比粘度、血漿比粘度有明顯改善,但紅細胞壓積、紅細胞電泳時間變化不明顯,與關于TAO患者血粘度增高主要與血漿粘度增高和紅細胞變形能力低有關,非紅細胞數(shù)目增多和紅細胞壓積增高所致的報道是一致的。TAO患者TXB2含量顯著升高,TXA2/PGI1α的值顯著升高,表明TAO患者TXA2-PGI2系統(tǒng)的失衡加重和促進了TAO的形成和發(fā)展,而6-K-PGF1α含量既反應血小板聚集情況,更可反應血管內皮的抗血栓功能。脈管通膠囊各劑量組與模型組相比,6-K-PGF1α含量明顯升高,TXB2、T/K比值降低,說明該藥能改善血管的抗血栓功能。脈管通膠囊以四物湯(當歸、生地、赤芍、川芎)活血通脈,改善血液循環(huán),促進受傷之絡脈恢復;并用丹參、全蝎、三棱、乳香活血祛瘀;桑枝、