髓過氧化物酶

髓過氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)又稱過氧化物酶，是一種重要的含鐵溶酶體，存在于髓系細(xì)胞(重要是中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞)的嗜苯胺藍(lán)顆粒中，是髓細(xì)胞的特異性標(biāo)志，隨著對(duì)MPO研究的進(jìn)一步，人們發(fā)現(xiàn)MPO基因多態(tài)性造成個(gè)體對(duì)某些疾病易感性的差別，與人類多個(gè)疾病的發(fā)生、發(fā)展親密有關(guān)，因此越來越受到國內(nèi)外學(xué)者的重視。髓過氧化物酶MPO研究1.MPO的構(gòu)造髓過氧化物酶(MPO)是由中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和某些組織的巨噬細(xì)胞分泌的含血紅素輔基的血紅素蛋白酶，是血紅素過氧化物酶超家族組員之一。MPO是I相代謝酶。每個(gè)酶分子有兩個(gè)鐵素基團(tuán)，順磁共振波譜表明血紅素中的鐵是在甲酰基血紅素部分。MPO的合成是粒細(xì)胞進(jìn)入循環(huán)之前在骨髓內(nèi)合成并貯存于嗜天青顆粒內(nèi)，外界刺激可造成中性粒細(xì)胞聚集，釋放髓過氧化物酶(MPO)。在成熟的粒細(xì)胞中，MPO是含量最豐富的糖蛋白，約占外周血多形核中性粒細(xì)胞(PMNs)內(nèi)總蛋白質(zhì)含量的5%，血液中95%的MPO來源于PMNs。MPO的相對(duì)分子質(zhì)量為150×103，是由2個(gè)亞單位聚合而成的二聚體，每個(gè)亞單位又由一條重鏈(α鏈,相對(duì)分子質(zhì)量約60×103)和一條輕鏈(β鏈,相對(duì)分子質(zhì)量約15×103)所構(gòu)成。2個(gè)亞單位在α鏈處由1個(gè)二硫鍵相連。重鏈含有亞鐵卟啉基團(tuán)，闡明MPO是鐵依賴性的。MPO以3種亞形存在于髓系細(xì)胞中，分別為MPOⅠ、Ⅱ、Ⅲ。3種亞型重要是重鏈有差別，輕鏈的差別較小，造成它們?cè)谙鄬?duì)分子質(zhì)量及疏水性等方面不同，3種亞型在功效上的差別還不明確，有待進(jìn)一步研究。2.MPO基因及其多態(tài)性人髓過氧化物酶基因位于染色體17q23?q24，含有12個(gè)外顯子和11個(gè)內(nèi)含子，長約14638bp，調(diào)控其基因體現(xiàn)的是生長因子。MPO的mRNA在早幼粒細(xì)胞的體現(xiàn)水平最高，另首先是原始粒細(xì)胞、幼稚和原始單核細(xì)胞；當(dāng)細(xì)胞分化到成熟時(shí)期，MPO基因體現(xiàn)水平快速下降。現(xiàn)已知MPO基因首先體現(xiàn)的是一條相對(duì)分子質(zhì)量為89×103的前體蛋白(precursorprotein)，通過翻譯后加工，切割成α和β兩種亞基，再聚合為成熟的MPO分子，加上糖鏈，最后形成有功效的MPO。MPO在基因體現(xiàn)過程中存在的缺點(diǎn)，造成MPO基因DNA序列發(fā)生變化，影響其活力。MPO基因的多態(tài)性影響其基因的轉(zhuǎn)錄和體現(xiàn)，對(duì)機(jī)體的疾病易感性有一定的影響。Chevrier等發(fā)現(xiàn)了外顯子11處和啟動(dòng)子區(qū)域的V53F、A332V、I642L和IVS11?2A→C4個(gè)新的基因多態(tài)性位點(diǎn)，它們的作用與功效需要進(jìn)一步研究。Piedrafita等研究發(fā)現(xiàn)與疾病有關(guān)的位點(diǎn)有5個(gè)：463G/A，R569W，Y173C，M251T和外顯子9的堿基缺失。現(xiàn)在研究最多的是MPO基因啟動(dòng)子區(qū)第463位核苷酸G/A的突變，該位點(diǎn)位于SP1轉(zhuǎn)錄因子識(shí)別結(jié)合的順式作用元件中，內(nèi)含4個(gè)Alu重復(fù)序列。G/A的突變?cè)斐晌挥贏lu反映元件的SP1轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)消失，從而使MPO轉(zhuǎn)錄水平明顯下降。也有報(bào)道發(fā)現(xiàn)外顯子10的密碼子569存在C被T替代，使CGG→TGG，造成遺傳性MPO缺點(diǎn)性疾病。尚有研究報(bào)道在MPO基因129位點(diǎn)存在G被A取代，使MPO基因的體現(xiàn)水平明顯減少。另外，據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，MPO基因463A等位基因與某些癌癥的風(fēng)險(xiǎn)減少有關(guān)。3.MPO的生物學(xué)作用MPO是中性粒細(xì)胞的功效標(biāo)志和激活標(biāo)志，其水平及活性變化代表著嗜中性多形核白細(xì)胞(PMN)的功效和活性狀態(tài)。純化的人MPO活性為25～35IU/mg，水溶性好，底物H2O2濃度>0.8mmol時(shí)酶受克制，酶反映最佳pH為4.5～5.5，當(dāng)pH≥10，或≤2時(shí)酶失活。MPO的重要功效是在吞噬細(xì)胞內(nèi)殺滅微生物，運(yùn)用過氧化氫和氯離子產(chǎn)生次氯酸鹽，并形成含有氧化能力的自由基。構(gòu)成MPO–H2O2–鹵素系統(tǒng)。許多研究發(fā)現(xiàn)，MPO不僅能殺滅吞噬于細(xì)胞內(nèi)的微生物，并且可釋放到細(xì)胞外，破壞多個(gè)靶物質(zhì)，如腫瘤細(xì)胞、血小板、NK細(xì)胞、原蟲、毒素等，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生和調(diào)節(jié)炎癥反映等多方面發(fā)揮作用。然而，在特定條件下，MPO催化反映生成過量的氧化劑(HOCl、3–氯化酪氨酸、酪氨?；⑾趸野彼岬?，超出局部抗氧化劑的防御反映時(shí)，就會(huì)造成氧化應(yīng)激和氧化性組織損傷。MPO還參加調(diào)節(jié)炎癥反映的許多過程，MPO缺點(diǎn)的中性粒細(xì)胞因過量的注入炎癥部位而發(fā)生氧化反映，大量的超氧化物和氧化物形成，造成炎癥部位組織細(xì)胞損傷。另外尚有學(xué)者發(fā)現(xiàn)MPO能與DNA牢固結(jié)合形成復(fù)合物，有效保護(hù)DNA避免其在氧化過程中受損，從而確保髓系細(xì)胞的正常分化成熟及功效。編輯本段髓過氧化物酶(MPO)與有關(guān)疾病1.MPO與心血管疾病1.1MPO與冠狀動(dòng)脈疾病。冠心病是心血管系統(tǒng)中最常見的疾病，而動(dòng)脈粥樣硬化(AS)又是形成冠心病的重要病理基礎(chǔ)。AS發(fā)病過程中普通出現(xiàn)氧化低密度脂蛋白，進(jìn)而巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)變成泡沫細(xì)胞，泡沫細(xì)胞的形成在AS的發(fā)生機(jī)制中起核心作用。研究發(fā)現(xiàn)MPO有增進(jìn)AS病變形成的作用，MPO通過產(chǎn)生自由基和多個(gè)反映性物質(zhì)，增進(jìn)斑塊形成和不穩(wěn)定性增加，加速AS進(jìn)展，進(jìn)而引發(fā)多個(gè)并發(fā)癥如急性冠脈綜合征(ACS)。研究發(fā)現(xiàn)，MPO缺點(diǎn)的個(gè)體罹患心血管疾病的危險(xiǎn)性明顯下降。MPO水平的升高不僅與患冠狀動(dòng)脈疾病易感性有關(guān)，還能夠預(yù)測(cè)早期患心肌梗死的危險(xiǎn)性。1.2MPO與急性冠脈綜合征(ACS).MPO增進(jìn)ACS病變形成，并影響粥樣斑塊的穩(wěn)定性，通過增大氧化應(yīng)激而引發(fā)ACS?，F(xiàn)在的研究表明，MPO是預(yù)測(cè)ACS患者發(fā)生不良心血管事件的一種新的預(yù)測(cè)因子，特別是在肌鈣蛋白T(TnT)水平較低的患者，MPO能夠識(shí)別那些將來發(fā)生心血管事件危險(xiǎn)性較高的患者。2.MPO與腫瘤2.1MPO與肺癌在肺部受微生物侵襲、職業(yè)暴露以及吸煙時(shí)，MPO會(huì)隨中性粒細(xì)胞的聚集釋放到炎癥部位。MPO可代謝激活多個(gè)與肺癌有關(guān)的環(huán)境致癌物，能將前致癌物如多環(huán)芳烴類的苯并芘(BaP)轉(zhuǎn)化成含有高度反映性和致癌性的活性產(chǎn)物二醇環(huán)氧化苯并芘(BPDE)，BPDE能與DNA形成加合物并造成姐妹染色體交換，從而造成肺癌。2.2MPO與白血病白血病是累及造血干細(xì)胞的造血系統(tǒng)惡性腫瘤，其病因尚不完全清晰。3.MPO與地方性砷中毒3.1近年來，隨著分子生物學(xué)領(lǐng)域的不停發(fā)展，發(fā)現(xiàn)MPO在砷中毒所致皮膚病變的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。MPO現(xiàn)在被研究者認(rèn)為可能是砷中毒新發(fā)現(xiàn)的一種易感標(biāo)志物，將在慢性砷中毒的早期診療和危險(xiǎn)評(píng)定中含有重要的意義，但國內(nèi)就這方面的研究還沒有涉及到，國外對(duì)其進(jìn)一步的影響機(jī)制的研究也不是諸多，因此還很難在現(xiàn)有的研究基礎(chǔ)上建立起砷中毒易感性與MPO及其多態(tài)性的明確關(guān)系，還需要進(jìn)一步的研究證明。4.MPO與其它疾病4.1MPO在現(xiàn)階段的研究也擬定了它在疾病早期診療與危險(xiǎn)評(píng)定中含有重要的意義。MPO通過不同的途徑可造成某些疾病，同時(shí)其基因多態(tài)性也會(huì)減少機(jī)體對(duì)某些疾病的易感受性，從而對(duì)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)作用，但其作用機(jī)制仍不清晰，隨著分子生物學(xué)領(lǐng)域的不停發(fā)展，MPO的作用機(jī)制研究將不停進(jìn)一步，可能會(huì)發(fā)現(xiàn)其它某些與疾病易感性有關(guān)的多態(tài)性位點(diǎn)，從而使人們更清晰的認(rèn)識(shí)其有關(guān)疾病的發(fā)生、發(fā)展，方便對(duì)這些人群采用有效的防止和治療方法髓過氧化物酶

myeloperoxidase過氧化物酶含血紅素輔基,重要存在于過氧化酶體,運(yùn)用H2O2以氧化酚類及胺類化合物。...動(dòng)物的肝、腎中只有微弱的活性，在牛乳中已分離出過氧化物酶，在白細(xì)胞中含有髓性過氧化物酶，這就是膿含有過氧化物酶活性的因素。紅細(xì)胞也含過氧化物酶，極少量...更多解釋>>

與"髓過氧化物酶"有關(guān)的文獻(xiàn)前10條\o"更多\“髓過氧化物酶\”有關(guān)文獻(xiàn)"更多文獻(xiàn)>>1.髓過氧化物酶在急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者近期預(yù)后判斷中的作用目的探討血漿髓過氧化物酶水平對(duì)急性冠狀動(dòng)脈綜合征患者近期心臟事件的預(yù)測(cè)作用。辦法采用酶聯(lián)免疫吸附法分別測(cè)定急性冠狀動(dòng)脈綜合征組、穩(wěn)定型心絞痛組和非冠心病組患者的血漿髓過氧化物酶濃...詳情>>中國動(dòng)脈硬化雜志

08期

內(nèi)科學(xué);血漿髓過氧化物酶;急性冠狀動(dòng)脈綜合征;中性粒細(xì)胞;酶聯(lián)免疫吸附法;冠狀動(dòng)脈造影;預(yù)后;下載下載2.非糖尿病維持性血液透析患者髓過氧化物酶與頸動(dòng)脈硬化的有關(guān)性目的探討非糖尿病維持性血液透析患者髓過氧化物酶與頸動(dòng)脈硬化有關(guān)指標(biāo)的關(guān)系。辦法酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定非糖尿病維持性血液透析患者同一次透析前后血漿髓過氧化物酶和血清彈性蛋白酶水平變化,...詳情>>中國動(dòng)脈硬化雜志

11期

維持性血液透析;髓過氧化物酶;頸動(dòng)脈粥樣硬化;下載下載3.巨噬細(xì)胞髓過氧化物酶與低密度脂蛋白氧化關(guān)系的研究目的從低密度脂蛋白(LDL)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞髓過氧化物酶活性升高的角度探討體內(nèi)LDL氧化的可能機(jī)制,為動(dòng)脈粥樣硬化(AS)的抗氧化治療提供新的思路。辦法以體外培養(yǎng)的大鼠...詳情>>免疫學(xué)雜志

01期

巨噬細(xì)胞;髓過氧化物酶;低密度脂蛋白;牛磺酸;下載下載4.探討頸動(dòng)脈粥樣斑塊超聲造影顯像特性及血漿髓過氧化物酶水平與腦梗死的關(guān)系目的探討頸動(dòng)脈斑塊實(shí)時(shí)超聲造影的顯像特性及血漿髓過氧化物酶水平對(duì)腦梗死事件的預(yù)測(cè)作用。辦法對(duì)73例頸動(dòng)脈硬化患者的89處斑塊進(jìn)行超聲造影檢查,觀察斑塊的顯像特點(diǎn)。將他們分為斑塊造...詳情>>中國超聲醫(yī)學(xué)雜志

08期

超聲檢查;造影劑;頸動(dòng)脈硬化;血漿髓過氧化物酶;腦梗死;下載下載5.光化學(xué)法誘導(dǎo)小鼠局灶性腦梗死腫瘤壞死因子α體現(xiàn)及髓過氧化物酶活性的變化目的:分析光化學(xué)法誘導(dǎo)小鼠局灶性腦梗死模型腦組織腫瘤壞死因子α體現(xiàn)和髓過氧化物酶活性的變化規(guī)律及其有關(guān)性。辦法:實(shí)驗(yàn)于-07/-07在泰山醫(yī)學(xué)院腦微循環(huán)實(shí)驗(yàn)室完畢...詳情>>中國臨床康復(fù)

40期

腦梗塞;光化學(xué);腫瘤壞死因子;過氧化物酶;下載下載6.冠狀動(dòng)脈病變與2型糖尿病及髓過氧化物酶關(guān)系的探討目的:探討冠狀動(dòng)脈病變與2型糖尿病和髓過氧化酶的關(guān)系。辦法:對(duì)9月至9月在我院就診的210例胸痛臨床懷疑患冠心病的患者進(jìn)行冠狀動(dòng)脈造影,將其中冠狀動(dòng)脈狹窄不不大于...詳情>>瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)

04期

冠狀動(dòng)脈疾病;2型糖尿病;髓過氧化物酶;冠狀血管造影術(shù);下載下載7.唾液過氧化物酶正過氧化物酶含有多個(gè)生理功效,無論在細(xì)胞代謝調(diào)節(jié)還是在防御方面催化許多重要反映,是重要的細(xì)胞氧化還原體系.1944年Dempsey首先在甲狀腺中發(fā)現(xiàn)甲狀腺過氧化物酶(TPO)....詳情>>生命的化學(xué)(中國生物化學(xué)會(huì)通訊)

1987年06期

下載下載8.胱抑素C與髓過氧化物酶在冠心病嚴(yán)重程度評(píng)定中的應(yīng)用目的研究分析冠心病病變程度與白細(xì)胞計(jì)數(shù)、超敏C反映蛋白(CRP)、纖維蛋白原(FG)、髓過氧化物酶、胱抑素C、肌酐(Scr)、腎小球?yàn)V過率(eGFR)之間的關(guān)系。辦法收集121例...詳情>>檢查醫(yī)學(xué)與臨床

07期

急性冠脈綜合癥;穩(wěn)定性心絞痛;胱抑素C;超敏CRP;纖維蛋白原;髓過氧化物酶;下載下載9.聯(lián)合測(cè)定免疫球蛋白M和髓過氧化物酶對(duì)新生兒細(xì)菌感染的早期診療意義目的探討血清免疫球蛋白(immunoglobin,Ig)M和髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)聯(lián)合測(cè)定對(duì)新生兒細(xì)菌感染的早期診療意義。辦法隨機(jī)選擇7...詳情>>中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志

06期

免疫球蛋白M;髓過氧化物酶;細(xì)菌感染;新生兒;下載下載10.髓過氧化物酶基因G-463A多態(tài)性與肺癌易感性關(guān)系的meta分析背景與目的有關(guān)髓過氧化物酶基因G-463A多態(tài)性與肺癌易感性關(guān)系已有廣泛研究,但研究成果不一致。本研究運(yùn)用meta分析的辦法探討髓過氧化物酶基因G-463A多態(tài)性與肺癌易感性的相...詳情>>中國肺癌雜志

02期

肺腫瘤;髓過氧化物酶;多態(tài)性;meta分析;人髓過氧化物酶(MPO)ELISA檢測(cè)試劑盒本試劑僅供研究使用

實(shí)驗(yàn)原理：MPO試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知MPO濃度的原則品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將MPO物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過的HRP。再通過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中MPO的活性濃度呈比例關(guān)系。

試劑盒內(nèi)容及其配制試劑盒成分（2-8℃96孔配備48孔配備配制96/48份酶標(biāo)板1塊板（96T）半塊板（48T）即用型塑料膜板蓋1塊半塊即用型原則品：400ng/ml1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按闡明書進(jìn)行稀稀空白對(duì)照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型原則品稀釋緩沖液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素標(biāo)記的MPO抗體1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型親和鏈酶素-HRP1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗滌緩沖液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按闡明書進(jìn)行稀釋底物A1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型終止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型

自備材料1．

蒸餾水。2．

加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。3．

振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性1．

避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。2．

實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。3．

不要用嘴吸取試劑盒里的任何成分。

操作注意事項(xiàng)1．

試劑應(yīng)按標(biāo)簽闡明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的原則品應(yīng)丟棄，不可保存。2．

實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立刻放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。3．

不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。4．

使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。5．

使用干凈的塑料容器配備洗滌液。使用前充足混勻試劑盒里的多個(gè)成分及樣品。6．

洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充足拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反映孔中吸水。7．

底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完畢后應(yīng)立刻讀取OD值。8．

加入試劑的次序應(yīng)一致，以確保全部反映板孔溫育的時(shí)間同樣。9．

按照闡明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及次序進(jìn)行溫育操作。

樣品收集、解決及保存辦法1、

血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞快速小心地分離。2、

血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、

細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、

保存------如果樣品不立刻使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免重復(fù)冷凍。盡量的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37

試劑的準(zhǔn)備1．

原則品：原則品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存。稀釋前將原則品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：400ng/ml（6號(hào)原則品）原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。200ng/ml（5號(hào)原則品）100ul的原倍原則品加入100ul的原則品稀釋液100ng/ml（4號(hào)原則品）100ul的5號(hào)原則品加入100ul的原則品稀釋液50ng/ml（3號(hào)原則品）100ul的4號(hào)原則品加入100ul的原則品稀釋液25ng/ml（2號(hào)原則品）100ul的3號(hào)原則品加入100ul的原則品稀釋液12.5ng/ml（1號(hào)原則品）100ul的2號(hào)原則品加入100ul的原則品稀釋液0ng/ml（空白對(duì)照）原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2．

洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作環(huán)節(jié)1．

使用前，將全部試劑充足混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。2．

根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上原則品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)原則品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。3．

加入稀釋好后的原則品50ul于反映孔、加入待測(cè)樣品50ul于反映孔內(nèi)。立刻加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃4．

甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。5．

每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃6．

甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。7．

每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃8．

取出酶標(biāo)板，快速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立刻測(cè)定成果。9．

在450nm波優(yōu)點(diǎn)測(cè)定各孔的OD值。

性能1.敏捷度：最小的檢測(cè)濃度不大于1號(hào)原則品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度有關(guān)系數(shù)R值為0.990。2.特異性：不與人其它細(xì)胞因子反映。3.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均不大于10%。4.局限性：6號(hào)原則品以上的成果為非線性的，根據(jù)此原則曲線無法得到精確的成果。

成果判斷與分析1、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），對(duì)應(yīng)的MPO原則品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得對(duì)應(yīng)的曲線，樣品的MPO含量可根據(jù)其OD值由原則曲線換算出對(duì)應(yīng)的濃度。

3、檢測(cè)值范疇：0-400ng/ml

4、敏感度：1.0ng/ml品型號(hào)：96T/48T產(chǎn)品名稱：人髓過氧化物酶(MPO)ELISA闡明書產(chǎn)品報(bào)價(jià)：產(chǎn)品特點(diǎn)：人髓過氧化物酶(MPO)ELISA價(jià)格公道、品質(zhì)確保，售后服務(wù)完整，并提供免費(fèi)代檢測(cè)服務(wù)！本試劑盒用于測(cè)定人血清，血漿及有關(guān)液體樣本中髓過氧化物酶(MPO)的活性。

96T/48T人髓過氧化物酶(MPO)ELISA闡明書的具體資料：人髓過氧化物酶(MPO)ELISA闡明書目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清，血漿及有關(guān)液體樣本中髓過氧化物酶(MPO)的活性。注意事項(xiàng)：1．

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．

濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響成果。3．

各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其精確性，以避免實(shí)驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最佳控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．

請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做原則曲線，最佳做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值不不大于原則品孔第一孔的OD值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。5．

封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．

底物請(qǐng)避光保存。7．

嚴(yán)格按照闡明書的操作進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)成果鑒定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).8．

全部樣品，洗滌液和多個(gè)廢棄物都應(yīng)按傳染物解決。9．

本試劑不同批號(hào)組分不得混用。10.如與英文闡明書有異，以英文闡明書為準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人髓過氧化物酶(MPO)水平。用純化的人髓過氧化物酶(MPO)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入髓過氧化物酶(MPO)，再與HRP標(biāo)記的羊抗人抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，通過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最后的黃色。顏色的深淺和樣品中的髓過氧化物酶(MPO)呈正有關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度(OD值)，通過原則曲線計(jì)算樣品中人髓過氧化物酶(MPO)的濃度。試劑盒構(gòu)成：試劑盒構(gòu)成48孔配備96孔配備保存闡明書1份1份

封板膜2片(48)2片(96)

密封袋1個(gè)1個(gè)

酶標(biāo)包被板1×481×962-8℃原則品：900U/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃原則品稀釋液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃酶標(biāo)試劑3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃樣品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃顯色劑A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃顯色劑B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃

樣本解決及規(guī)定：1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(-3000轉(zhuǎn)/分)。認(rèn)真收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的規(guī)定選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(-3000轉(zhuǎn)/分)。認(rèn)真收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)當(dāng)再次離心。3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(-3000轉(zhuǎn)/分)。認(rèn)真收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參考實(shí)施。4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成分時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右(-3000轉(zhuǎn)/分)。認(rèn)真收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成分時(shí)，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)成100萬/ml左右。通過重復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成分。離心20分鐘左右(-3000轉(zhuǎn)/分)。認(rèn)真收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮快速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充足。離心20分鐘左右(-3000轉(zhuǎn)/6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按有關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能立刻進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免重復(fù)凍融7.不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3克制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作環(huán)節(jié)1.

原則品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)原則品孔10孔，在第一、第二孔中分別加原則品100μl，然后在第一、第二孔中加原則品稀釋液50μl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加原則品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加原則品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加原則品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加原則品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為600U/L，400U/L，200U/L，100U/L，50U/L)。2.

加樣：分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其它各步操作相似)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品最后稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。3.

溫育：用封板膜封板后置37℃溫育304.

配液：將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。5.

洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.

加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。7.

溫育：操作同3。8.

洗滌：操作同5。9.

顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.10.

終止：每孔加終止液50μl，終止反映(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。11.

測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。計(jì)算：以原則物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出原則曲線，根據(jù)樣品的OD值由原則曲線查出對(duì)應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用原則物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。試劑盒性能：1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度有關(guān)系數(shù)R值為0.92以上。2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別不大于9%和15%保存條件及使用期：1.試劑盒保存：2-8℃2．使用期：6個(gè)月人髓過氧化物酶（MPO）酶聯(lián)免疫分析

試劑盒使用闡明書

本試劑盒僅供研究使用

檢測(cè)范疇：7.8ng/ml-500ng/ml

最低檢測(cè)限：1.95ng/ml

特異性：本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)天然或重組的人MPO，且與其它有關(guān)蛋白無交叉反映。

使用期：6個(gè)月

預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測(cè)定人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它有關(guān)生物液體中MPO含量。

闡明

1．試劑盒保存：-20℃（較長時(shí)間不用時(shí)）；2-8℃（頻繁使用時(shí)）。

2．濃洗滌液低溫保存會(huì)有鹽析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶。

3．中、英文闡明書可能會(huì)有不一致之處，請(qǐng)以英文闡明書為準(zhǔn)。

4．剛啟動(dòng)的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少量水樣物質(zhì)，此為正?，F(xiàn)象，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)成果造成任何影響。

實(shí)驗(yàn)原理

用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗MPO抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或原則品、生物素化的抗MPO抗體、HRP標(biāo)記的親和素，通過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最后的黃色。顏色的深淺和樣品中的MPO呈正有關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。

試劑盒構(gòu)成及試劑配制

1.酶聯(lián)板（Assayplate）：一塊（96孔）。

2.原則品（Standard）：2瓶（凍干品）。

3.樣品稀釋液（SampleDiluent）：1×20ml/瓶。

4.生物素標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibodyDiluent）：1×10ml/瓶。

5.辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液（HRP-avidinDiluent）：1×10ml/瓶。

6.生物素標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7.辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8.底物溶液（TMBSubstrate）：1×10ml/瓶。

9.濃洗滌液（WashBuffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10.終止液（StopSolution）：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。

需要