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文檔簡介

PCR技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中應(yīng)用檢驗(yàn)科主要內(nèi)容：1.PCR的定義；2.PCR的基本原理；3.一、PCR的定義：

PCR（polymerasechainreaction)：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，又稱體外DNA擴(kuò)增技術(shù)。是近年來發(fā)展起來的一種體外擴(kuò)增特異DNA片段的新技術(shù)。

PCR技術(shù)：1985年由美國的KaryMullis首創(chuàng)，可以將微量目的DNA片段擴(kuò)增一百萬倍以上。

優(yōu)點(diǎn)：敏感度高、特異性強(qiáng)、產(chǎn)率高、重復(fù)性好以及快速簡便等，廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)、考古學(xué)、法醫(yī)學(xué)及體育等領(lǐng)域，并已普及到許多普通實(shí)驗(yàn)室，大大簡化了傳統(tǒng)的分子克隆技術(shù)，從而比較容易地對目的基因進(jìn)行分析、鑒定。二、PCR的原理：

用于擴(kuò)增位于兩段已知序列之間的DNA片段，類似于天然DNA的復(fù)制過程。

以擬擴(kuò)增的DNA分子為模板，以一對分別與模板5′末端和3′末端互補(bǔ)的寡核苷酸片段為引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留復(fù)制的機(jī)制沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成，重復(fù)這一過程，即可使目的DNA片段得到擴(kuò)增。

擴(kuò)增的特異性取決于引物與模板DNA的特異性結(jié)合，一個(gè)典型的PCR反應(yīng)包括，“變性-退火-延伸”的多個(gè)循環(huán),其一般反應(yīng)過程為：

1.變性(Denaturation)：

將體系加熱至(95℃，30″)使模板DNA互補(bǔ)雙鏈間的氫鍵斷而解離成為兩條單鏈DNA，以便他與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備。

2.退火(復(fù)性)(Annealling):

將體系溫度突然將溫度降至（55℃左右）后寡核苷酸引物與模板DNA單鏈上的互補(bǔ)序列雜交（按堿基互補(bǔ)配對原則結(jié)合）。同時(shí)，體系中的部分DNA聚合酶被激活，一旦引物與模板雜交，DNA聚合

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